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上海远慕生物科技有限公司
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实验室培养基pH值监控的注意事项
pH值是培养基的常规监控项目，微生物的生长不仅依赖丰富的营养，还需要在适宜的pH值范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性，因此培养基pH值是否符合要求直接影响微生物检验结果。
1、培养基配置：
配料—溶解—调PH—过滤—分装—包扎—灭菌—摆斜面—贮存
1.配料
配方换算→在容器中加入少量水（蒸馏水，自然水）→按照配方称取各种药品（依次加入）→加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。
2.溶解
淀粉溶解：少量冷水调成糊状
加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。
3.调PH
用1N的盐酸或1N的 NaOH把培养基调节到所要求的值。
4.过滤
滤纸或棉花进行过滤。（有时可以省去）
5.分装
一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。
(1)三角瓶
若作静置培养，则100mL培养基/250mL的三角瓶，最多不能超过150mL培养基/250mL的
三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15-20mL培养基/250mL的三角瓶，保证通气良好。
(2)试管分装
液体培养基一般装4-5mL，约试管的1/4高度；
固体斜面培养基一般装3-4mL，约试管的1/5高度。
6.包扎
分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。
7.灭菌
按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。
8.摆斜面
灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的1/2。
9.贮存
培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用
注意事项：
在配制时，首先要确保培养基未结块、颜色未发生变化或其他物理性状明显改变；应按照使用说明上的要求操作，称量应达到相应的精确度；纯化水是配制培养基最常用的溶剂，应确保溶剂的质量符合要求；配制培养基应采用干净且不会对培养基理化特性产生改变的容器。
在分装前，应确保培养基完全溶解混匀，加热助溶是最常用的方法，应注意不要过度加热，尤其是含糖量较高的培养基，糖类不耐热的特性会使糖类在高温条件下产生有机酸而使pH值下降。
2、培养基的pH控制
培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。
虽然培养基中含有缓冲物质成分，能使培养基的pH尽可能的保持在要求的范围内，但是配出的培养基若不符合要求，就要进行必要的调整。如果有已校准pH计，可用pH计，如果没有，可用精密的pH试纸，再根据需要用1 moL/L氢氧化钠或1moL/L盐酸（微调可用0.1氢氧化钠或0.1moL/L盐酸）调制所需的pH。培基的pH一般为7.4～7.6，也有酸性或碱性的。用氢氧化钠调整的需要高压灭菌的培养基，在调整pH时要调至高出所需0.1个～0.2个单位，因用氢氧化钠调整时，高压灭菌后，培养基的pH要降低0.1~0.2。如培养基中含有碳酸钙成分，可不pH。
3、pH电极的维护保养
目前，实验室使用pH计电极大部分都是复合电极。其优点是使用方便，不受氧化-还原物质的影响，且平衡速度快。使用时应注意以下事项：
⒈复合电极不用时，可充分浸泡饱和氯化钾溶液中。切忌用洗涤液或其他吸水性试剂浸洗。
⒉使用前，检查玻璃电极前端的球泡。正常情况下，电极应该透明而无裂纹；球泡内要充满溶液，不能有气泡存在。
⒊测量浓度较大的溶液时，尽量缩短测量时间，用后仔细清洗，防止被测液粘附在电极上而污染电极。
⒋清洗电极后，不要用滤纸擦拭玻璃膜，而应用滤纸吸干, 避免损坏玻璃薄膜、防止交叉污染，影响测量精度。
⒌测量中注意电极的银—氯化银内参比电极应浸入到球泡内氯化物缓冲溶液中，避免电计显示部分出现数字乱跳现象。使用时，注意将电极轻轻甩几下。
⒍电极不能用于强酸、强碱或其他腐蚀性溶液。
⒎严禁在脱水性介质如无水乙醇、重铬酸钾等中使用
1、培养基配置：
配料—溶解—调PH—过滤—分装—包扎—灭菌—摆斜面—贮存
1.配料
配方换算→在容器中加入少量水（蒸馏水，自然水）→按照配方称取各种药品（依次加入）→加足所需水量（一药一勺，取药后立即盖上瓶盖）。
2.溶解
淀粉溶解：少量冷水调成糊状
加热溶解，特别是加有琼脂的培养基，一定要煮沸，琼脂的熔解温度95-97℃，且需要边加热边搅拌以防止烧焦。
3.调PH
用1N的盐酸或1N的 NaOH把培养基调节到所要求的值。
4.过滤
滤纸或棉花进行过滤。（有时可以省去）
5.分装
一般培养基放在三角瓶或试管中灭菌使用。
(1)三角瓶
若作静置培养，则100mL培养基/250mL的三角瓶，最多不能超过150mL培养基/250mL的
三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌；若作摇瓶培养，则15-20mL培养基/250mL的三角瓶，保证通气良好。
(2)试管分装
液体培养基一般装4-5mL，约试管的1/4高度；
固体斜面培养基一般装3-4mL，约试管的1/5高度。
6.包扎
分装好后，塞上棉塞，在用牛皮纸将棉塞包裹好，防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。
7.灭菌
按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高，营养成分会被破坏，培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。
8.摆斜面
灭菌后需要摆斜面的试管要趁热斜着摆放，使其凝固成为一个斜面，约占试管长度的1/2。
9.贮存
培养基在30℃下放置一天，无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用
注意事项：
在配制时，首先要确保培养基未结块、颜色未发生变化或其他物理性状明显改变；应按照使用说明上的要求操作，称量应达到相应的精确度；纯化水是配制培养基最常用的溶剂，应确保溶剂的质量符合要求；配制培养基应采用干净且不会对培养基理化特性产生改变的容器。
在分装前，应确保培养基完全溶解混匀，加热助溶是最常用的方法，应注意不要过度加热，尤其是含糖量较高的培养基，糖类不耐热的特性会使糖类在高温条件下产生有机酸而使pH值下降。
2、培养基的pH控制
培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。
虽然培养基中含有缓冲物质成分，能使培养基的pH尽可能的保持在要求的范围内，但是配出的培养基若不符合要求，就要进行必要的调整。如果有已校准pH计，可用pH计，如果没有，可用精密的pH试纸，再根据需要用1 moL/L氢氧化钠或1moL/L盐酸（微调可用0.1氢氧化钠或0.1moL/L盐酸）调制所需的pH。培基的pH一般为7.4～7.6，也有酸性或碱性的。用氢氧化钠调整的需要高压灭菌的培养基，在调整pH时要调至高出所需0.1个～0.2个单位，因用氢氧化钠调整时，高压灭菌后，培养基的pH要降低0.1~0.2。如培养基中含有碳酸钙成分，可不pH。
3、pH电极的维护保养
目前，实验室使用pH计电极大部分都是复合电极。其优点是使用方便，不受氧化-还原物质的影响，且平衡速度快。使用时应注意以下事项：
⒈复合电极不用时，可充分浸泡饱和氯化钾溶液中。切忌用洗涤液或其他吸水性试剂浸洗。
⒉使用前，检查玻璃电极前端的球泡。正常情况下，电极应该透明而无裂纹；球泡内要充满溶液，不能有气泡存在。
⒊测量浓度较大的溶液时，尽量缩短测量时间，用后仔细清洗，防止被测液粘附在电极上而污染电极。
⒋清洗电极后，不要用滤纸擦拭玻璃膜，而应用滤纸吸干, 避免损坏玻璃薄膜、防止交叉污染，影响测量精度。
⒌测量中注意电极的银—氯化银内参比电极应浸入到球泡内氯化物缓冲溶液中，避免电计显示部分出现数字乱跳现象。使用时，注意将电极轻轻甩几下。
⒍电极不能用于强酸、强碱或其他腐蚀性溶液。
⒎严禁在脱水性介质如无水乙醇、重铬酸钾等中使用
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