微生物检测选择合适的培养基、培养温度和培养时间

微生物EM（环境监测）检测中最常遇到的问题之一与培养策略和培养基的选择有关。

使用一种培养基（TSA）或者两种培养基（TSA和SDA），使用单个温度、两个温度，是否从低温到高温，还是高温到低温。影响微生物回收率的因素有：结果观察时间(单一温度通常比两个温度早)、成本(只用TSA比使用TSA+SDA便宜)以及微生物回收率的高低。很少有研究报告回收率相关的培养条件选择，但是，已有报告单一温度条件30-35℃培养对于霉菌回收的不如两个温度培养的好。下面的数据总结了在我们实验室进行的一项小研究。

采用标准TSA LP80培养基、分别使用30-35℃@5天、25-30℃@5天、20-25℃@72小时+30-35℃@48小时3种方案进行评价。以SDA培养基20-25℃@5天条件为对照，对霉菌的回收情况进行评价。

这些样本是从生产车间入口附近的非受控区域采集的，以确保足够高的计数以获得合适的数据大小。在每个地点取3个表面接触皿和1个浮游菌(1立方SAS180)，每天取12个点。每个点取3组重复样本，每个培养温度测试1组样品。实验2中还收集了SDA样本。样本分别在12月至1月，以及9个月后的8月至9月采集，以覆盖季节变化。培养后对每组样品进行计数，以确定菌落计数。在实验2中，三位分析员还计算了每个组的霉菌菌落数，并计算了每个样本的平均值。

图1、在试验1的3天内，在每种培养策略下检测到的细菌菌落总数

图2、在试验2的8月至9月的3天内，在每种培养策略下检测到的细菌菌落总数

总的来说，25-30℃的单一温度日变化最小，可能比其他2种方法回收了更多的菌落。这种类型的测试存在相当大的差异，因此需要研究更大的面以获得更可靠的数据集。

霉菌检测

在整个试验过程中，每个试验点霉菌菌落的发生频率都被记录下来。结果如图3所示。正如我们所看到的那样，SDA（22.5℃）回收了大部分的菌落，组合温度（25-30℃+30-35℃）次之，然后是25-30℃，最后是30-35℃。在30-35℃条件下，回收率小于SDA（22.5℃）的1%。

图3.在3天的试验中，每种培养策略检测到的霉菌菌落总数

总结

如果成本是驱动因素，那么单一培养基，组合温度培养(从低到高)的TSA是最佳选择。如果速度是主要的要求，那么25-30℃的单一温度是最好的。如果需要全部回收，那么优选2种培养基，TSA和SDA。