1)目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小
2) 样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作
3)杂蛋白多,建议处理目的蛋白
4)抗体特异性不强,建议使用特异性强的抗体
5)抗体孵育时间过久,建议减少抗体孵育时间
6)二抗与抗原有交叉反应,建议选择合适的封闭物
7)二聚体或多聚体存在,建议增加蛋白质变性过程及强度
8)底物显色与曝光时间过长,建议缩短显色及曝光的时间
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