各种已被命名和经过细胞生物学鉴定的细胞系或细胞株,都是一些形态比较均一、生长增殖比较稳定的和生物性状清楚的细胞群。因此凡符合上述情况的细胞群也可给以相应的名称,即文献中常称之为已鉴定的细胞(Certified Cells)。已鉴定的细胞可用于各种实验研究和生产生物制品,当前世界上已建的各种细胞系(株)已难胜数。
体外培养细胞的种类和命名
体外培养细胞的名称,随培养细胞技术的发展和细胞种类的增多而演变。最早采用的名称为细胞株(Cell strain),以后又出现细胞系(Cell Line)一词,两者曾一度混用致概念不明确,导致文献中也很混乱。
名词的由来
细胞株(cell
strain)最初为W.Earle(1940)所采用,他把自己建立的小鼠结缔组织L系称为“株”,1951年,George
Gey把其建立的人体宫颈癌细胞Hela系称为“株”。1954年,White另外使用了“系”来称呼A
Carrel培养的鸡胚心脏的细胞群,细胞系(cell line)由此产生,之后这两个名词长期混用。
即使在1979年国际组织培养协会专业术语委员会颁布“专业名词建议”和1984年在宁波召开的全国动物组织和细胞培养会议通过“动物细胞、组织和器官培养技术中的一些术语的译名和解释”之后,到目前为止国内对这两个名词的使用仍是混乱的,不仅在商品名中混用,在专业文献中亦有混用现象。
现将细胞系和细胞株区分如下:
1、细胞系(Cell Line):原代培养物经首次传代成功即成细胞系,由原先存在于原代培养物中的细胞世系(Lineage of Cells)所组成。
2、细胞株(Cell
Strain):通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限,称为有限细胞株(finitecell
strain);如果可以连续传代,称为连续细胞株(continuous cell
strain)。对于人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定,并连续传代的即可称为连续性株或系。
因此,细胞系泛指可传代的细胞,细胞株是具有特殊性质的细胞系。
(一)初代培养
初代培养又称原代培养,即直接从体内取出的细胞、组织和器官进行的第一次的培养物。一旦已进行传代培养(Subculture)的细胞,便不再称为初代培养,而改称为细胞系。
(二)细胞系
初代培养物开始第一次传代培养后的细胞,即称之为细胞系。如细胞系的生存期有限,则称之为有限细胞系(Finite Cell Line);已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系,称连续细胞系或无限细胞系(Infinite Cell Line)。
无限细胞系大多已发生异倍化,具异倍体核型,有的可能已成为恶性细胞,因此本质上已是发生转化的细胞系。无限细胞系有的只有永生性(或不死性),但仍保留接触抑制和无异体接种致癌性;有的不仅有永生性,异体接种也有致瘤性,说明已恶性化。
这两种不同性质的无限细胞系,在国内外文献中对这些名词的应用上也常不十分严格。为概念上的明确,对有恶性的无限细胞系采用“恶性转化细胞系”一词表示可能更妥。而对那些只具永生性而无恶性的细胞系,则用无限细胞系或转化细胞系即可。如
NIH3T3、Rat-1、10T1/2等均属这类细胞系。
由某一细胞系分离出来的、在性状上与原细胞系不同的细胞系,称该细胞系的亚系(Subline)。
(三)克隆细胞株
从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法,单细胞增殖形成的细胞群,称细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群,亦可称之为亚株(Substrain)
(四)二倍体细胞
细胞群染色体数目具有与原供体二倍细胞染色体数相同或基本相同(2n细胞占75%或80%以上)的细胞群,称二倍体细胞培养。如仅数目相同,而核型不同的即染色体形态有改变者为假二倍体。二倍体细胞在正常情况下具有限生命期,故属有限细胞系。但随供体年龄和组织细胞的不同,二倍体细胞的寿命长短各异。
人胚肺成纤维细胞可传50代土10代,人胚肾只有8~10代,人胚神经胶质细胞15~30代;如从老龄个体取可传50则细胞生存期更短。由不同年龄供体取材建立的二倍体细胞系可供研究衰老之用。
为保持二倍体细胞能长期被利用,一般在初代或2~5代即大量冻存作为原种(Stook Cells),用时再进行繁殖,用后再继续冻存,可供长期使用或延缓细胞的衰老。
做实验选择原代细胞还是细胞株?
原代细胞:从体内直接分离的细胞。功能、代谢、形态类似体内细胞的特点,因此原代细胞适用于分析单个细胞形态、代谢、功能。原代细胞的缺点是:细胞均一性差,因为从特定组织取下来的原代细胞可能处于不同的发育时期。增殖能力差、培养时间受限、转染效率低。
细胞株:原代细胞经过长期培养和筛选后,功能、代谢、形态趋于均一化的无限增殖细胞。适用于整体水平实验。优点是:容易培养、好感染、干扰因素少、便于同步化、实验好操作。缺点是:与整体差别大、可能丧失原代细胞的特性,细胞株在长期传代过程中遗传物质发生变异。所以同一个学名的细胞株,有可能有完全不同的形态、代谢、功能表现。不同代数的细胞株,性质也可能完全不同。
原代细胞由于转染效率低这个问题,应用受到了限制。自从腺病毒诞生后,因为其超强的感染能力,克服了原代细胞难感染的问题,使得原代细胞的使用变得更加简单。由于细胞实验后,很多时候需要做到动物体内,由于原代细胞有体内细胞的特点,为了细胞实验和动物体内实验的结果更加趋向一致性,因此用原代细胞来进行细胞实验更值得考虑。
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