提取的核酸浓度太低，满足不了下游实验要求咋办？

上海远慕生物科技有限公司

2021/10/09 11:07

阅读：74

我们在进行分子生物学实验的时候，通常会对生物大分子的浓度有一定的要求，比如您要进行转染实验，加入细胞的质粒浓度要求在1 µg/µl，这样才能得到比较高的转染效率。可是您抽提的质粒浓度只有200 ng/µl，这时候该怎么办呢？如何将质粒浓度浓缩到理想的浓度呢？

常用的方法有两种：乙醇沉淀法和离心浓缩法。

乙醇沉淀法：

操作步骤：
1. 估算含有质粒溶液的体积V，加入V/9体积的3M NaAc ,使得NaAc终浓度为0.3M
2. 加入2倍体积的冷无水乙醇，冰上或者-20℃孵育20min
3. 最大离心速度（＞13000rpm)离心10min，弃去上清
4. 用75%乙醇洗涤2次
5. 室温晾干
6. 加入适当体积的水或TE buffer 溶解即可
（以上步骤来自分子克隆）

经过一系列的复杂操作，再去做一下核酸定量检测，你往往会发现，浓度比理想的要低很多！这是因为在整个过程中比较容易产生核酸的损失，比如乙醇沉淀步骤没有将核酸完全析出、离心步骤没有完全将核酸完全离心下来、去除上清时不小心将核酸吸出等。

离心浓缩法：
原理：借助于真空离心浓缩仪，将待浓缩的核酸样品放入离心机中，用真空泵提高离心机中的真空度，在低压下核酸溶液的沸点降低，在室温下即可快速挥发以达到浓缩核酸溶液的目的。

操作步骤：
1. 将样品管放入离心机中
2. 设置离心机转速、时间，点击运行
3. 打开真空泵
4. 浓缩结束后取出样品即可

采用离心浓缩法具有更大的优势：
1. 操作简单，避免复杂操作带来样品损失及污染
2. 浓缩速度快，100µl的待浓缩样品浓缩至20µl大约需要40min
3. 成功率高，整个过程核酸分子均在EP管中，避免核酸损失
4. 更好的保护核酸，常温低压下进行核酸浓缩，避免核酸降解
因此，离心浓缩法越来越受到用户的青睐！