细菌保存(细菌,培养物,甘油,琼脂平板)

1.细菌保存于穿刺培养物中：一般细菌保存于穿刺培养物可以维持两年。具体方法如下：用灭菌接种针挑取分散良好的单菌落，针缓慢穿过琼脂到达瓶底，连续几次，盖上瓶盖拧紧，做好标记。室温下存放于暗处。（最好一点可以将瓶盖放松，在适当温度下培养过夜，再拧紧瓶盖并加封Parafilm膜，室温或最好在4度避光保存）。

2.细菌保存于含有甘油的培养物中：

（1）在液体培养基中生长的细菌培养物：取0.85ml细菌培养物，加入0.15ml高压灭菌甘油，振荡培养物使甘油分布均匀，然后转移到标记好的保存管内，密封，在乙醇－干冰或液氮中冻结后再转至－70度长期保存。在复苏时，用灭菌接种针刮取冻结的培养物表面，然后立即把黏附于接种针上的细菌划于含适当抗生素(antibiotic)的LB琼脂平板表面，于37度过夜。

（2）在琼脂平板上生长的细菌培养物：从琼脂平板表面刮下细菌放入装有2mlLB的无菌试管内，再加入等量的含有30％灭菌甘油的LB培养基，振荡使甘油完全分布均匀后，分装于无菌保存管内，密封，再按前述方法冰冻保存。这一方法的优点在于可用于保存在质粒载体上建立的cDNA文库。

细菌生长繁殖条件：充足的营养 必须有充足的营养物质才能为细菌的新陈代谢及生长繁殖提供必需的原料和足够的能量。 适宜的温度 细胞生长的温度极限为-7℃～90℃。各类细菌对温度的要求不同，可分为嗜冷菌（psychrophiles）,最适生长温度为（10℃～20℃）；嗜温菌（mesophiles）,20℃～40℃;嗜热菌（thermophiles）,在高至56℃～60℃生长最好。病原菌均为嗜温菌，最适温度为人体的体温，即37℃，故实验室一般采用37℃培养细菌。有些嗜温菌低温下也可生长繁殖，如5℃冰箱内，金黄色葡萄球菌缓慢生长释放毒素，故食用过夜冰箱冷存食物，可致食物中毒。 合适的酸碱度 在细菌的新陈代谢过程中，酶的活性在一定的ph范围才能发挥。多数病原菌最适ph为中性或弱碱性（ph7.2～7.6）。人类血液、组织液ph为7.4，细菌极易生存。胃液偏酸，绝大从数细菌可被杀死。个别细菌在碱性条件下生长良好，如霍乱孤菌在ph8.4～9.2时生长最好;也有的细菌最适ph偏酸，如结核杆菌（ph6.5～6.8）、乳本乡杆菌（ph5.5）。细菌代谢过程中分解糖产酸，ph下降，影响细菌生长，所以培养基中应加入缓冲剂，保持ph稳定。 必要的气体环境 氧的存大与否和生长有关，有些细菌仅能在有氧条件下生长；有的只能在无氧环境下生长；而大多数病原菌在有氧及无氧的条件下均能生存。一般细菌代谢中都需CO2，但大多数细菌自身代谢所产生的CO2即可满足需要。有些细菌，如脑膜炎双球菌在初次分离时需要较高浓度的co2（5～10%），否则生长很差甚至不能生长。