人谷氨酸脱羧酶自身抗体操作步骤

上海远慕生物科技有限公司

2018/07/31 15:14

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人谷氨酸脱羧酶自身抗体酶联免疫分析试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人谷氨酸脱羧酶自身抗体（GAD-Ab）水平。用纯化的人谷氨酸脱羧酶自身抗体（GAD-Ab）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入谷氨酸脱羧酶自身抗体（GAD-Ab），再与HRP标记的谷氨酸脱羧酶自身抗体（GAD-Ab）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷氨酸脱羧酶自身抗体（GAD-Ab）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人谷氨酸脱羧酶自身抗体（GAD-Ab）浓度。

操作步骤

1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟

8.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.

10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。