ELISA试剂盒检测过程中的常见问题以及解决方法

  ELISA试剂盒检测过程中的常见问题还是很多的下面所提到的是我司在检测过程中所遇到的一些ELISA产品会出现的问题及解决方法:

　　1. 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低。

　　a.原因：未加入酶标记物。
　　解决办法：请按照操作步骤进行。

　　b.原因：试剂盒内容物未能充分回。
　　解决办法：确定试剂盒内容物回温后再进行操作。

　　c.原因：室温太低。
　　解决办法：若室温太低(<19℃)，请于操作步骤4，适当延长温育时间。

　　d.原因：未使用试剂盒的清洗液清洗。
　　解决办法： 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。

　　e.原因：试剂盒已过有效期限。
　　解决办法：请更换成仍在有效期限内的试剂盒。

　　2. 标准曲线线性不佳，或是平行性不好。

　　a.原因：温育位置避光不好或受到气流干扰。
　　解决办法： 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内)。

　　b.原因：操作时间拖太久。
　　解决办法：请在方法熟练后再进行操作。

　　c.原因：微孔间相互污染。
　　解决办法： 加样品时，请小心勿溅出微孔外，以免造成其它微孔的污染。

　　d.原因：标准品或酶标记物所加入的量不一致。
　　解决办法：请使用已校正过的移液枪，并确保其与吸头之间有高度密合性。

　　e.原因：添加样品或试剂的操作方法不正确。
　　解决办法：加样品或试剂时，吸头请勿接触微孔。

　　f.原因：洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤)。
　　解决办法：请随时监控洗板机洗板过程，洗完后立即进行下一步骤。

　　3. 吸光值均偏高(或线性不够陡)。

　　a.原因：室温太高(>25℃)。
　　解决办法： 若无法降低室内温度，请适当缩短步骤4的温育时间。

　　b.原因：底物溶液受到污染。
　　解决办法： 若发现底物溶液已呈现淡蓝色，请不要再使用。

　　c.原因：反应时间超过太久。
　　解决办法：请控制反应时间。

　　d.原因：酶标记物污染了盒内其它试剂。
　　解决办法：使用过的吸头应立即丢弃，可避免试剂间相互污染，凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡，再以清水冲洗干净，可确保无残留)

　　4. 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值。

　　a.原因：微孔中的试剂未能充分混合。
　　解决办法： 试剂加完后，需轻敲盘四周使其充分混合均匀。

　　b.原因：洗板过程发生问题。
　　解决办法：请随时监控洗板机洗板过程，洗完后立即进行下一步骤。

  c.原因：添加样品或酶标记物的量不一致。
　　解决办法： 请使用已校正过的移液枪，并确保其与吸头之间有高度密合性。