人集聚蛋白（Agrin）ELISA检测试剂盒标本处理方式

    中文名：人集聚蛋白（Agrin）ELISA试剂盒

    别名：人集聚蛋白（Agrin）ELISA Kit

    供应商：上海远慕

    规格：48t/96t

    保存：2-8℃

    保质期：6个月

    适用范围：本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床。

    用途：用于测定人血清，血浆，组织及相关液体样本中的含量或活性。

    特点：灵敏性高、特异性强、重复性好。

    ELISA试剂盒种属：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等。

    检测目的：用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

    人集聚蛋白（Agrin）ELISA试剂盒组成及试剂配制：

    1、酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。

    2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

    3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

    4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

    5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

    6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

    7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

    8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

    9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

    10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

    人集聚蛋白（Agrin）ELISA检测试剂盒组织结构：

    1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心 23分钟将血红细胞迅速小心地分离。

    2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心60分钟去除颗粒。

    3、 细胞上清液：1000×g离心32分钟去除颗粒和聚合物。

    4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心33分钟，取上清液。

    5、 保存：如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使

    用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解

    冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

    人集聚蛋白（Agrin）ELISA试剂盒实验原理：

    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人集聚蛋白（Agrin）水平。用纯化的集聚蛋白（Agrin）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入集聚蛋白（Agrin）抗原，再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的集聚蛋白（Agrin）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人集聚蛋白（Agrin）浓度。

    人集聚蛋白（Agrin）ELISA检测试剂盒标本处理操作步骤：

    1.  标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；再各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后，在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为150 μg/L，100 μg/L ，50μg/L，25μg/L，12.5μg/L）。

    2.   加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

    3.  温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

    4.  配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用

    5.  洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

    6.  加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

    7.  温育：操作同3。

    8.  洗涤：操作同5。

    9.  显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。

    10.  终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

    11.  测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

    人集聚蛋白（Agrin）ELISA检测试剂盒注意事项：

    1.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

    2.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

    3.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

    4.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

    5.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

    6.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

    7.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

    8.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

    9.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

    人集聚蛋白（Agrin）ELISA检测试剂盒标本处理及要求：

    1.血清、血浆、脑脊液、腹腔液标本可直接测定；

    2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

    3.采集后尽早进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

    本司ELISA试剂盒安全性：

    1.避免直接接触终止液和底物。如不小心接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

    2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

    3.不要用嘴接触试剂盒里的任何成份。

    4 Elisa试剂盒请远离儿童。