ELISA试剂盒操作步骤

上海远慕生物科技有限公司

2016/04/15 10:18

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ELISA试剂盒操作步骤：

1.   使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2.   根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3.   加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

4.   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5.   每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6.   甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7.   每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

8.   取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9.   在450nm波长处测定各孔的OD值。

ELISA试剂盒结果判断与分析：

1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的IFN-Α标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的IFN-Α含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

3、检测值范围： 0-1000pg/ml

4、敏感度:3.9pg/ml

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