血液虽然离我们很近，但大部分人对它的了解是有限的，甚至许多人看到血液还会有一点害怕，其实对它有足够的了解是十分有必要的，可以避免陷入一些误区。血压主要由血清与血浆组成，不过血清和血浆虽然关系密切，但有许多不同，下面就让我们一起来看看血清与血浆的不同。血清与血浆的区别血浆一般指的是离开人体后的血液经过抗凝的处理之后，然后再经过离心沉淀的物质，它是不含有细胞成分的，含有纤维蛋白原比较多，而血清含有许多特异性的免疫体，它是保护我们身体健康的关键元素，两者的不同主要有三点，分别是颜色不同、密度不同、成分不同。1、颜色不同血浆是全血分离出血细胞以后的剩余部分，呈淡黄色，而血清指血浆凝固以后在血凝块表面吸出的无色透明的液体，所以颜色不一样。2、密度不同因为血浆中含有各种凝血因子，所以血浆密度比血清密度高。3、成分不同因为血浆中含有各种凝血因子，从凝血XIII到纤维蛋白原。而血清当中由于所有的凝血因子都参与血液凝固，所以血清当中不含有凝血因子。同时，由于钙离子也参与凝血过程，血清当中的钙离子浓度与血浆相比较低。血清和血浆的关系血清是血液从体内取出后发生凝血后的上层澄清液体，凝血的主要反应是纤维蛋白原转化为纤维蛋白，所以血清中不再含有纤维蛋白原。而血浆是血液从体内取出加入抗凝剂后离心得到的上清液，抗凝剂的存在阻断了凝血链式反应，是凝血过程受阻，纤维蛋白原还存在于其中。血浆多少钱一袋浆是血液去除血细胞成分以后的液体成分，血浆中含有丰富的各种蛋白质、各种凝血因子以及各种抗体，在临床上应用十分广泛。200ml的血浆一般价格在100元左右，当然在不同的地区、不同的医院价格可能有所差别。血浆的作用血浆的主要作用是运载血细胞，运输维持人体生命活动所需的物质和体内产生的废物等。血浆分类：1、新鲜冰冻血浆：采血后6h内分离血浆在-30℃以下速冻成块并储存在-20℃以下即为FFP。2、普通冰冻血浆：主要包括从保存期已经超过6-8小时的全血中分离出来的血浆、全血的有-效期以内分离出来的血浆、保存期满一年的FFP冰冻呈固态而制成。3、病毒灭活血浆：采用亚甲基蓝病毒灭活技术对在全血的有-效期内分离出的血浆或从新鲜冰冻血浆中分离出冷沉淀凝血因子后剩余的血浆进行病毒灭活并冰冻呈固态而制成。

微生物实验室如果从事致病菌检测、培养基质控验收、方法验证等相关工作，就应该备有标准菌株。实验室需对使用的标准菌株进行规范性管理，以便有效地、安全地使用，保证实验结果的准确性。一、实验室应建立菌种管理制度内容包括菌种申购、保管、领用、使用、传代、存储等方面的内容，标准菌种申购应由专人申购，保管由专人双人双锁管理，领用及使用应填写记录，使用时应对菌种进行纯度及生化特性进行菌种核查验证并记录，存储应有专门的冰箱、超低温冰箱进行存储，使用完的菌株应按要求销毁处理。二、实验室根据需求购买相应的标准菌株购买标准菌株应从有资质的机构进行购买，到货的标准菌株应包括菌种证明，后面附有菌种质控报告。收到菌种时应仔细阅读菌种证明，核实到货的菌种与申购的是否一致，包装是否完整，注意保存条件及有效期，并将菌种放置相应的条件下进行储存(一般在活化前储存于4℃冰箱中)。核实后及时填写菌种清单，菌种清单应包括菌种名称、菌种编号、到货日期、储存条件、购买数量、领用日期、领用人、销毁日期等。三、实验室建立菌种传代图菌种传代图记录简洁清晰，记录内容包括菌种名称、菌种编号、到货日期、菌种完整性、菌种活化日期、活化方法(主要包括活化使用的培养基及培养温度)、活化数量、保藏条件，保存数量、领用人、传代日期、传代数量、菌种用途、销毁日期等。菌种在活化后及每次使用时都应对菌株纯度、菌落形态(在选择培养基上的典型菌落)、生化特性(如氧化酶试验、三糖铁试验等)、表型分析(用VITEK 鉴定)进行核查并记录，以保证菌种使用的有效性。四、菌种保藏方法菌种保藏方法可依据标准SN/T2660-2010《食品微生物实验室菌种保藏方法》进行保存。建议实验室购买-80℃超低温冰箱，选择甘油保存法，甘油保存方法操作方便，保存时间较长。菌株使用过程中应在生物安全柜中进行，遵循无菌操作以防菌种污染。使用完的菌种应按生物安全要求，在121℃高压灭菌30min，并做好菌种销毁记录。实验室菌株管理是小事，然而却是重要的事。他直接影响着实验结果的准确性，不容忽视哦!

PCR是体外人工选择性扩增DNA的一种方法，它类似于生物体内DNA的复制。在生物体内DNA复制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs；而体外PCR反应同样需要类似的成分，有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工设计的特定序列，实现对特定位置的扩增；PCR Buffer提供一个反应的缓冲环境；反应过程同生物体内一样，DNA双链打开，引物结合模板，延伸形成新链。而这些过程在生物体内靠DNA解旋酶解链，而在体外在通过控制反应温度实现的。如常用94℃变性模板DNA打开双链，在退火温度处引物结合到模板上，蕞后在72℃完成延伸，并反复重复此过程即可实现对特定片段DNA的大量扩增。到第三循环开始才产生出和靶DNA区段相同的DNA分子，进一步循环地产生出靶DNA区段的指数加倍。　　在扩增后期,由于产物积累,使原来呈指数扩增的反应变成平坦的曲线,产物不再随循环数而明显上升,这称为平台效应。平台期(Plateau)会使原先由于错配而产生的低浓度非特异性产物继续大量扩增，达到较高水平。因此，应适当调节循环次数，在平台期前结束反应， 减少非特异性产物。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。　　类型　　1.菌落PCR（Colony PCR）不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。蕞后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。　　菌落PCR与我们通常的普通DNA的PCR的不同在于，直接以单个菌作为模板。是一种可以快速鉴定菌落是否为含目的质粒的阳性菌落。操作简单，快捷，阳性率较高，在转化鉴定中较常见。　　2.降落PCR（touch－downPCR）：降落PCR代表了一种完全不同的PCR优化方法，它不是用许多反应管和每管用不同的试剂浓度和循环参数，而是用一个反应管或一小组反应管，在适合于扩增目的产物而不得到人为产物或引物二聚体的循环条件下反应；设计多循环反应的程序，使相连循环的退火温度越来越低、由于开始时的退火温度选择高于估计的Tm值，随着循环的进行，退火温度逐渐降到Tm值，并蕞终低于这个水平。这个策略有利于确保第一个引物－模板杂交事件发生在蕞互补的反应物之间，即那些产生目的扩增产物的反应物之间。尽管退火温度蕞终会降到非特异杂交的Tm值，但此时目的扩增产物已开始几何扩增，在剩下的循环中一直处于主导地位。由于目标是在较早的循环中避免低Tm值配对，在降落PCR中必需应用热启动技术。当引物和模板的同源性未知时，降落PCR尤其有价值，当引物是根据氨基酸序列设计的简并引物时，或者扩增多基因家族成员时，或者想进行进化PCR时经常会碰到这种情况。编设降落PCR程序的目的是要设定一系列退火温度越来越低的循环，退火温度的范围应该跨越15℃左右，从高于估计Tm值至少几度到低于它10℃左右。目前大多数的PCR仪上都可以很方便地进行降落PCR。递减PCR通过在PCR 的前几个循环使用严紧的退火条件提高特异性。循环设在比估算的Tm 高大约5℃的退火温度下开始，然后每个循环降低1℃到2℃（当然，也可以每几个循环降1－2℃），直到退火温度低于Tm 5℃。特异性蕞高的目的模板会被优先扩增，这些产物在随后的循环中继续扩增占据优势。递减PCR 对于那些不了解引物和目的模板同源性程度的方法更为有用，如AFLP? DNA 指纹分析。原理就在于，温度的升高提高了PCR扩增的特异性，但也提高了引物结合的难度，降低了扩增的效率，因此一开始先用高温扩增，保证扩增的严谨性，待目的基因的丰度上升后，降低扩增的温度，提高扩增的效率（此时非特异的位点由于丰度低，无法和特异位点竞争）。但是，退火温度TOUCH DOWN无法改善扩增效率低的问题，一般用于在杂模板中提高扩增特异性　　3.巢式PCR(Nest PCR):一种变异的聚合酶链反应(PCR)，使用两对（而非一对）PCR引物扩增完整的片段。第一对PCR引物扩增片段和普通PCR相似。第二对引物称为巢式引物（因为他们在第一次PCR扩增片段的内部）结合在第一次PCR产物内部，使得第二次PCR扩增片段短于第一次扩增。巢式PCR的好处在于，如果第一次扩增产生了错误片断，则第二次能在错误片段上进行引物配对并扩增的概率极低。因此，巢式PCR的扩增非常特异。　　4.不对称PCR　　低浓度的引物（限制引物）首先被用完，随后只有高浓度的引物，继续合成单链DNA。蕞后产物中99%是单链DNA。两个引物的浓度相差100倍　　5.RT-PCR　　反转录RCR（reversetranscription PCR）和实时PCR（real time PCR）共同的缩写。反转录RCR是以mRNA为模板进行反转录反应得到cDNA，然后以cDNA为模板通过PCR进行DNA扩增。而实时PCR(real-time PCR)，属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。　　6.加端PCR! W6 D, E% r0 J) g9 U& B:X, F　　加端PCR（add-pcr）是使扩增产物的5’-末端加一段DNA顺序的PCR。设计加端PCR的引物时，除与模板配对的那一部分外再加上若干碱基，这样使扩增产物的末端加上额外一段DNA，如加上一个限制酶的识别顺序或特定功能的DNA片段。stoflet等报道在结构基因前加上噬菌体t7的启动子，当然也可用于DNA片段的末端标记或引入特定的点突变。末端可加碱基的数量与引物的长短有关，当引物足够长时扩增产物或末端甚至可以加上十几个到几十个碱基。　　衔接物连接后PCR可以通过设计引物扩增验证是否已经连接上　　模板　　1.模板可以是多种形式，主要包括基因组DNA、质粒DNA、携带病毒的基因组DNA、PCR产物，cDNA等，但不能为RNA。对于不同类型的模板，其主要不同在于预变性的时间以及模板的量。一般对于大的基因组DNA预变性时间10min足够，质粒DNA2min、携带病毒的基因组DNA预变性2min、PCR产物预变性2min即可。　　注意cDNA为单链DNA，但仍可做PCR的模板，只不过在第一轮循环时只有一个引物结合，合成另一条链。从第二轮开始，两个引物均与特异位点结合，从而实现了与常规PCR的接轨。而同作为单链的RNA却不能进行PCR扩增，原因就在于实现PCR反应的是DNA聚合酶，只能特意识别DNA链。　　2.对于模版的量来说，一般25ul体系DNA的质量为50—100ng。对于基因组DNA由于其结构比较复杂，提取的浓度也往往比较大，为防止浓度过大对PCR造成影响，故需对提取的DNA进行梯度稀释。否则浓度过高则可能会引起非特异性扩增。对于质粒及PCR产物由于其结构简单，且提取浓度一般较低，则无需稀释。　　引物　　１．一般引物用贮液浓度为10uM。对于刚合成的引物可以根据期管壁上的说明计算稀释至10uM即可（一般引物说明上配制的浓度往往过高，所以必须稀释至10uM才能利用实验室蕞小刻度（0.5ul）的移液器取到）。另外引物一旦稀释完毕，应注意分装小份，防止在用的过程中反复冻融引物而造成引物的失效。　　2.一般25ul反应中引物用量为0.5ul（终浓度要求为为0.1——1uM），若引物若放置时间比较长，则可以适当增加引物的用量。引物用量过多，容易导致引物二聚体（电泳时位于前方不成条带的小片段）的出现。　　附：　　1.引物稀释的方法：配制时首先将合成的引物12000r/min离心5min，室温静置１分钟，然后再慢慢打开管盖，根据引物合成单（或储存引物的离心管）说明加入一定量的灭菌水（引物说明是加入Buffer，此处加入无菌水即可）以达到10uM的浓度，在漩涡振荡器上充分振荡5-10min，即配成10um的贮存液，-20℃保存备用　　PCRbuffer　　一般PCR Buffer为10×的，使用时终浓度应为1×。如25ul体系中，应加入10×PCR Buffer为2.5ul。另外使用时应注意是否添加了Mg2+，若没有，则需要再单独添加，有则无需。　　Mg2+　　推荐用量为１—４ｍM。浓度过低，影响PCR产物的产量，而浓度过高，则出现非特性扩增。在PCR反应中Mg2+浓度，需进行优化。　　三磷酸脱氧核苷酸（dNTPs）　　避免反复冻融，应分装小份。dNTP的浓度取决于PCR反应体系中的特定靶序列的长度，常用浓度为0.2 mM。 据此我们可以确定反应体系中的dNTP的蕞低适宜浓度。当dNTP的浓度大于50mmol/L时会抑制Taq酶的活性。需要注意的是dNTP与Mg2+之间的浓度关系。因为dNTP中的磷酸基团可与Mg2+结合，使反应体系中游离Mg2+浓度下降从而影响Taq 酶的活性。　　Taq酶　　PCR使用的Taq酶在反应时由于丧失3’——>5’外切核酸酶活性，因而不具有校正活性。在典型的一次PCR反应中，taq酶造成的错误的核苷酸错误的掺入率大概为每20000个核苷酸中就有一个，虽然表面上看起来不会有多大的影响，但是在分子克隆中如果有一个错误核苷酸掺入，很有可能造成移码突变，影响是严重的。为弥补taq酶这一缺点常将克隆后的序列进行测序，来确认所扩增序列的准确性。同时也可采用保真度更高的Pfu DNA Polymerase，来确保扩增的准确性，Pfu DNA Polymerase有3 ’-5’的外切酶活性，5’-3’外切酶活性，是目前已发现的所有耐高温DNA 聚合酶中出错率蕞低的。但PCR产物为平端，不能进行Ta克隆！而解决此问题的办法是使用TaqPlus DNA Polymerase，该酶是Taq 酶和pfu Polymerase的混合物，因此既能保证准确性又能保证能够进行Ta克隆。在使用中应该注意如下问题：　　1．25ul体系中一般用量为0.1ul（用枪头沾一下即可），用量过多可能会出现非特异性扩增。　　2.PCR体系构建过程中蕞后加入的一种成分，因此只有在其他试剂加完之后才可从冰箱中取出加入。　　3.Taq酶中含有甘油，故不结冰，若结冰则应丢弃。　　4.对于预变性时间较长的PCR反应，应在预变性即将结束后加入酶，减少长时间高温对酶活力造成的损伤。　　5.保存时间过长的酶可以适当增加用量。　　体系构建　　1.加样原则是酶蕞后加，倒数第二加的为模板。加样时应从离心管底部将各成分依螺旋式上升的方式加到管壁上。如果做多管PCR，那么按照如下方法计算出公共成分做n管时所需总体积然后混合均匀之后再分装到各个离心管中去，这样可以有效地避免误差及污染。　　V总 =V标×（n+1）　　其中V总需配制的总体积V标每管PCR反应需要某成分的标准体积，n表示所做PCR的管数。　　2设立适当的阳性对照和阴性对照，检测PCR各试剂的可用性及污染性，便于对电泳结果准确的分析。　　预实验　　准备一个冰盒，并将做PCR的各试剂（除酶）、模板及无菌水放到冰上融化，设置PCR仪上反应程序。　　实验步骤　　下列步骤均在冰上操作　　1. 取1.5ml离心管，加入各公共成分（除酶）的V总，然后分装于各PCR管中，蕞后将酶加入。　　2. 瞬时离心10s，将各成分混匀。　　3. 放入PCR仪反应。　　4. 4℃冰箱保存。　　5. 电泳检测。　　注：常用于PCR的DNA聚合酶多要求反应必须冷启动，即反应必须在瞬间从低温达到变性温度（一般94℃）。但有些酶需要热启动，则无需在冰上操作，但酶同样还是需要现用现取，保持酶的蕞大活性。

说起抗体，这是我们在平时经常听到的词汇，因为抗体与我们的健康是息息相关的，也可以说抗体是不能缺少的。那么大家知道抗体是什么吗，抗体的功能有哪些呢，抗体有哪些类型呢?想要了解的朋友就一起来看看下面的内容吧。　　抗体是一种由浆细胞(效应B细胞)分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等的大型Y形蛋白质，仅被发现存在于脊椎动物的血液等体液中，及其B细胞的细胞膜表面 。抗体能识别特定外来物的一个独特特征，该外来目标被称为抗原。　　抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。轻链有κ和λ两种，重链有μ、δ、γ、ε和α五种。 整个抗体分子可分为恒定区和可变区两部分。在给定的物种中，不同抗体分子的恒定区都具有相同的或几乎相同的氨基酸序列。可变区位于"Y"的两臂末端。　　在可变区内有一小部分氨基酸残基变化特别强烈，这些氨基酸的残基组成和排列顺序更易发生变异区域称高变区。高变区位于分子表面，多由17个氨基酸残基构成，少则只有2～3个。高变区氨基酸序列决定了该抗体结合抗原抗原的特异性。一个抗体分子上的两个抗原结合部位是相同的，位于两臂末端称抗原结合片段。"Y"的柄部称结晶片段，糖结合在FC上。　　抗体的功能　　抗体的主要功能是与抗原(包括外来的和自身的)相结合，从而有效地清除侵入机体内的微生物、寄生虫等异物，抗体(antibody)是一种应答抗原产生的、可与抗原特异性结合的蛋白质。每种抗体与特定的抗原决定基结合。这种结合可以使抗原失活，也可能无效但有时也会对机体造成病理性损害，如抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗甲状腺球蛋白抗体等一些自身抗体的产生，对人体可造成危害。　　分类　　按作用对象　　按作用对象，可将其分为抗毒素、抗菌抗体、抗病毒抗体和亲细胞抗体。　　动物抗体功能　　根据注入细菌或病毒的不同，以及注射到不同种类的动物体内，得到不同免疫性能的抗病毒血清抗体。根据河南顺鑫动物血液制品有限公司的市场调研，市场上动物血清抗体大致分为以下几类抗体。　　1、猪抗体　　猪瘟抗体，猪蓝耳抗体，猪圆环病毒抗体，猪伪狂犬抗体，猪细小病毒抗体，猪口蹄疫抗体，猪流感抗体等。　　2、禽抗体　　小鹅瘟抗体，鸭肝抗体抗体，鸭浆膜炎抗体，禽流感抗体，新城疫抗体等　　3、牛抗体　　牛口蹄疫抗体，奶牛乳房炎抗体，牛流行热抗体，牛病毒性腹泻抗体，牛出血性败血症抗体等　　4、羊抗体　　羊痘抗体，羊口蹄疫抗体，羊小反刍兽疫抗体，羊快疫抗体，羊肠毒血症抗体，羊猝疽抗体，羊黑疫抗体等　　5、犬抗体　　犬狂犬病抗体、犬瘟热抗体、犬副流感抗体、犬腺病毒抗体与犬细小病毒病抗体，狐貉水貂的伪狂犬抗体、细小病毒抗体、乙脑抗体等　　按可见反应　　按与抗原结合后是否出现可见反应，可将其分为在介质参与下出现可见结合反应的完全抗体，即通常所说的抗体，以及不出现可见反应，但能阻抑抗原与其相应的完全抗体结合的不完全抗体。　　按抗体来源　　按抗体的来源，可将其分为天然抗体和免疫抗体。　　抗体就是免疫球蛋白，是改变了的球蛋白分子。由特异性抗原刺激产生，抗体的产生是由于抗原侵入人体后引起各种免疫细胞相互作用，使淋巴细胞中的B细胞分化增殖而形成浆细胞，浆细胞可产生分泌抗体。

冻存的ATCC细胞株和杂交瘤细胞株在运送过程中使用干冰保持低温。收到冻存细胞后，可以立即解冻复苏，去除二甲基亚砜（DMSO）后进行细胞培养。如果不立即复苏培养细胞，必须将细胞冻存管放置于液氮罐气相层存储。请不要将细胞存储在-130℃以上的温度。如果温度不够低，达不到-130℃，细胞活力会迅速下降。操作方法：ATCC推荐在操作冻存的ATCC细胞株时使用手套，工作服和防护面具以避免任何事故发生。检查包装，查看是否有任何破裂或渗漏。冻存的ATCC细胞株应处于固体状。将冻存的ATCC细胞株从有干冰的包装中取出，立即复苏培养，或迅速转移放置在液氮罐气相层在-130℃以下的温度存储。冻存细胞的复苏和培养：1、先准备好细胞培养皿或细胞培养瓶，及产品说明推荐的相应细胞培养基。并在37℃水浴中预先温热细胞培养基。2、小心取出装有细胞的冻存管，保持管盖拧紧，将冻存管盖以下的部分置于37℃水浴中并轻微的搅拌以帮助解冻。解冻过程应该尽快，大约短于2分钟或待最后一块小冰晶体刚融化，就应将细胞冻存管取出水浴。3、在水浴中取出的细胞冻存管表面喷洒70%乙醇配制的消毒剂，用无菌纸巾或纱布拭干。之后的操作步骤都应该遵循在无菌条件下生物安全柜中严格操作。4、小心拧开冻存管的顶部，将管内容物用1ml移液枪转移到含9毫升培养基的无菌离心管中。离心5到7分钟（125xg），小心吸去上清液以去除抗冻剂（二甲基亚砜），避免丢失细胞沉淀。将细胞沉淀重悬于配好的完全培养基中。将细胞悬液转移到培养容器，轻轻摇晃使细胞均匀的分布。生长较慢的细胞株可重悬于5-8ml培养基并转移到T25培养瓶。生长较快的细胞株可重悬于12-20ml培养基并转移到T75培养瓶。5、将细胞培养容器置于细胞培养箱，在温度37℃，二氧化碳浓度5%的培养条件下进行孵育。细胞培养24小时后应在显微镜下观察细胞形态和生长状况。*注1：虽然大多数细胞株可以在一种以上的培养基中生长，但细胞的特征有可能会在更换不同培养基时发生。为保证最佳效果，请从细胞培养一开始就使用ATCC推荐指定的培养基。*注2：某些细胞株，如杂交瘤株，可能需要几天的时间才从冻存状态下完全恢复正常生长。在细胞复苏培养第一天可能会呈现较低的细胞活力并产生一些细胞碎片。度过这一时期后，细胞会恢复并进入指数增长期。细胞培养贴士：细胞株的生长有两种状态，贴壁细胞需要附着在一个表面进行生长（贴壁依赖性），悬浮细胞可在悬浮培养状态下生长（非贴壁依赖）。在细胞单层贴壁生长货悬浮生长中，都通常遵循四个特征性阶段：迟滞期、对数或指数期、静止或平台期及衰退期。

pH计，是一种常用的仪器设备，主要用来精密测量液体介质的酸碱度值，配上相应的离子选择电极也可以测量离子电极电位MV值，pH计被广泛应用于环保、污水处理、科研、制药、发酵、化工、养殖、自来水等领域。该仪器也是食品厂、饮用水厂办QS、HACCP认证中的bi备检验设备。1 .什么是 pH标准缓冲溶液?它有哪些特点?pH缓冲溶液是一种能使pH值保持稳定的溶液。如果向这种溶液中加入少量的酸或碱，或者在溶液中的化学反应产生少量的酸或碱，以及将溶液适当稀释，这个溶液的pH值基本上稳定不变，这种能对抗少量酸碱或大或稀释，而使pH值不变化的溶液就称为缓冲溶液。pH 标准缓冲液有以下特点：(1)标准溶液的pH值是已知的，并达到规定的准确度;(2)标准溶液的pH值有良好的复现性和稳定性，具有较大的缓冲容量，较小的稀释值和较小的温度系数;(3)溶液的制备方法简单;2. 如何配制pH标准缓冲溶液?对于一般pH测量，可使用成套的pH组冲试剂(可配制250mL)，配制溶液时，应使用去离子水，并预先煮沸15～30分钟，以除去溶解的二氧化碳。剪开塑料袋将试剂倒入烧杯中，用适量去离子水使之溶解，并冲洗包装袋，再倒入250mL容量瓶中，稀释至刻度，充分摇匀即可。3. 如何正确保存和使用pH缓冲溶液?缓冲溶液配制后，应装在玻璃瓶或聚乙烯瓶中(碱性pH缓冲液，如，pH=9.18、pH=10.01、pH=12.46等，应装在聚乙烯瓶中)瓶盖严密盖紧，在冰箱中低温(5～10℃)保存，一般可使用六个月左右，如发现有混频器浊，发霉或沉淀现象，不能继续使用。使用时，应准备几个50mL的聚乙烯小瓶，将大瓶中的组冲溶液倒入小瓶中，并在环境温度下放置1～2个小时，等温度平衡后再使用。使用后不得再倒入大瓶中，以免污染，瓶中的缓冲溶液在>10℃的环境条件下可以使用2～3天，一般pH=7.00、pH=6.86、pH=14.00三种溶液使用时间可以长一些， pH=9.18和pH=10.01溶液由于吸收空气中的二氧化碳，其pH值比较容易变化。4 .pH缓冲溶液有何用途?(1)pH测量前标定校准pH计。(2)用以检定pH计的准确性，例如，用pH=6.86和pH=14.00，标定pH计后，将pH电极插入pH=9.18溶液中，检查仪器显示值和标准溶液的pH值是否一致。(3)在一般精度测量时检pH计是否需要重新标定。pH计标定并使用后也许会产生漂移或变化，因此在测试前将电极插入与被测溶液比较接近的标准缓冲液中，根据误差大小确定是否需要重新标定。(4)检测pH电极的性能。5 .pH电极为何要浸泡?如何正确浸泡pH复合电极?pH电极使用前必须浸泡，因为，pH球泡是一种特殊的玻璃膜，在玻璃膜表有一很薄的凝胶层，它只有在充分湿润的条件下才能与溶液中的氢离子有良好的影响。同时，玻璃电极经过浸泡，可以使不对称电势大大下降并趋向稳定。pH玻璃电极一般可以用蒸馏水或pH=4的缓冲溶液浸泡。通常用pH=4缓冲溶液浸泡更好上些，浸泡时间至24小时或更长，根据球泡玻璃膜厚度、电极老化程度而不同。同时，参比电极的液接界也需要浸泡。因为，如果液接界干涸会使液接界电势增大或不稳定，参比电极的浸泡液必须和参比电极的外参比溶液一致，即，3.3mol/L KCl溶液或饱和KCl溶液，浸泡时间一般几小时即可。因此，对pH复合电极而言，就必须浸泡在含KCl的pH=4缓冲液中，这样才能对玻璃球泡和液接界同时起作用。这里要特别提醒注意，因为过去人们使用单支的PH玻璃电极已习惯于用去离子水或pH=4组冲液浸泡，后来使用pH复合电极时依然采用这样的浸泡方法，甚至在一些不正确的pH复合电极的使用说明书中也会进行这种错误的指导。这种错误的浸泡方法引起的直接后果就是使一支性能良好的pH复合电极就成一支响应慢、精度差的电极，而且浸泡时间越长性能越差，因为经过长时间的浸泡，液接界内部(例如，砂芯内部)的KCl浓度已大大降低了，使液接界电势增大和不稳定。当然，只要在正确的浸泡溶液中重新浸泡数小时，电极还是会复原的。另外，pH电极也不能浸泡在中性或碱性缓冲溶液中，长期浸泡在此类溶液中会使PH玻璃膜响应迟钝。正确的 pH 电极浸泡液的配制： 取pH=4.00缓冲剂(250mL)一包，溶于250mL纯水中，再加入56克分析纯KCl，适当加热，搅拌至完全溶解即成。6 . 可充式和非可充式pH复合电极有何区别?pH复合电极外壳有塑料和玻璃的区分。可充式pH复合电极即在电极外壳上有一加液孔，当电极的外参比溶液流失后，可将加液孔打开，重新补充KCl溶液。而非可充式pH复合电极内装凝胶状KCl，不易流失也无加液孔。可充式pH复合电极的特点是参比溶液有较高的渗透速度率，液接界电位稳定重现，测量精度较高。而且当参比电极减少或受污染后可以补充或更换KCl溶液，但缺点是使用较麻烦。可充式pH复合电极使用时应将加液孔打开，以增加液体压力，加速电极响应，当电介液液面低于加液孔2厘米时，应及时补充新的电介液。非可充pH复合电极的特点是维护简单使用方便，因此，也得到广泛的应用。但作为实验室pH电极极使用时，在长期和边续的使用条件下，液接界处的KCl浓度会减少，影响测试精度。因此非可充式pH复合电极不用时，应浸在电极浸泡液中，这样下次测试时电极性能会很好，而部分实验室pH电极都不是长期和边续的测试，因此，这种结构对精度的影响是比较小的。而工业的pH复合电极由于对测试精度的要求比较低，所以使用方便就成为主要的选择。7 . 如何正确使用pH复合电极?(1) 球泡前端不应有气泡，如有气泡应用力甩去。(2) 电极从浸泡瓶中取出后，应在去离子水中晃动并甩干，不要用纸巾擦拭球泡，否则由于静电感应电荷转移到玻膜上，会延长电势稳定的时间，更好的方法是使用被测溶液冲洗电极。(3) pH复合电极插入被测溶液后，要搅拌晃动几下再静止放置，这样会加快电极的响应。尤其使用塑壳pH复合电极时，搅拌晃动要厉害一些，因为，球泡和塑壳之间会有一个小小的空腔，电极浸入溶液后有时空腔中的气体来不及排除会产生气泡，使球泡或液接界与溶液接角不良，因此必须用力搅拌晃动以排除气泡。(4) 在粘稠性试样中测试之后，电极必须用去离子水反复冲洗多次，以除去粘附在玻璃膜上的试样。有时还需先用其它试剂洗去试样，再用水洗去溶剂，浸入浸泡液中活化。(5) 避免接触强酸强碱或腐蚀性溶液，如果测试此类溶液，应尽量减少浸入时间，用后仔细清洗干净。(6) 避免在无水乙醇、浓硫酸等脱水性介质中使用，它们会损坏球泡表面的水合凝胶层。(7) 塑壳pH复合电极的外壳材料是聚碳酸酯塑料(PC)PC塑料在有些溶剂中会溶解，如四氯化碳、三氯乙烯、四氢呋喃等，如果测试中含有以上溶剂，就会电极外壳，此时应改用玻璃外壳的pH复合电极。8 .pH电极如何清洗?球泡和液接界污染后先用以下溶剂清洗，再用去离子水洗去溶剂，将电极浸入浸泡液中活化。污染物 清洗剂无机金属氧化物 低于1mol/L稀酸有机油脂类物质 稀洗涤剂(弱酸性)树脂高分子物质 稀酒精、丙酮、乙mi蛋白质血球沉淀物 酸性酶溶液(食母生片)颜料类物质 稀漂白液、过氧化氢9 .如何修复pH电极?pH 复合电 极的“损坏”，其现象是敏感梯度降低 、响应慢、读数重复性差，可能由以下三种因素引起，一般客户可以采用适当的方法予以修复：(1)电极球泡和液接界受污染，可以用细的毛刷、棉花或牙签等，仔细去除污物。有些塑壳电极头部的保护罩可以旋下，清洗就方便了，如污染严重，可按第8条的方法用清洁剂清洗。(2)外参比溶液受污染，有些电极的结构是可添加溶液的，此时，可用针筒将电极的外参比溶液抽净，配制新的3.3mol/L或饱和KCl溶液，再加进去，注意第一、二次加进去时再要抽出来，以便将电极内腔清洗净。( 3 )玻璃敏感膜老化： 将电极球泡用0.1mol/L稀盐酸(9mL盐酸用纯水稀释至100mL)浸泡24小时用纯水洗净，再用电极浸泡溶液浸泡24小时。如果钝化比较严重，也可以将电极下端浸泡在45的氢氟酸溶液中3～5秒钟(溶液配制：4mL氢氟酸用纯水稀释至100mL)，用纯水洗净，然后，在电极浸泡溶液中浸泡24小时，使其恢复性能。10 . 什么是pH计的一点校准?任何一种 pH 计都必须经过 pH 标准溶液的校准后才可测量样品的 pH 值，对于测量精度在 0.1 ， pH 以下的样品，可以采一点校准方法调整仪器，一般选用 pH=6.86 或 pH=7.00 标准缓冲溶液。有些仪器本身只 0.2pH 或 0.1pH ，因此仪器只设有一个定位调节旋扭，具体操作步聚如下：(1)测量标准缓冲液温度，查表确定该温度下的pH值，将温度补尝旋钮调节至该温度下;(2)用纯水冲洗电极并甩干;(3)将电极浸入缓冲溶液晃动后静止放置，待读数稳定后，调节定位旋钮使仪器显示该标准溶液的pH值;(4)取出电极冲洗并甩干;(5)测量样吕温度，并将pH计温度补偿旋钮调节至该温度值;(6)将电极浸入样品溶液，晃动后静止放置，显示稳定后读数。11 . 什么是pH计的二点校准?对于精密级的 pH 计，除了设 有“定位”和“温度补偿”调节外，还设电极“斜率”调节，它就需要用二种标准缓冲液进行校准。 一般先以 pH=6.86 或 pH=7.00 进 行“定位”校准，然后根据测试溶液的酸碱情况， 选用 pH=4.00 (酸性)或 pH=9.18 或 pH=10.01( 碱性 ) 缓冲溶液进行 “ 斜率校正，具体操作步聚为：(1)电极极洗净并甩干，浸入pH=6.86或pH=7.00标准溶液中，温度补偿旋钮置于溶液温度处。待示值稳定后，调节定位旋钮使仪器示值为标准溶液的pH值。(2)取出电极洗净并甩干，浸入第二种标准溶液。待示值稳定后，调节仪器斜率旋钮，使仪器的示值为第二种标准溶液的pH值。(3)电极极洗净并甩干，再浸入pH6.86或pH7.00标准溶液中，如果误差超过0.02pH，则重复第(1)，(2)步聚。直至在二种标准溶液中不需要调节旋钮都能显示正确的PH值。(4) 取出电极洗净并甩干，将pH温度补偿旋钮调节至样品温度，将电极浸入样品溶液，晃动后静止放置，显示稳定后读数。12 . 温度对pH精度测量有多大影响?对pH电极，温度影响每一个pH为0.003pH/℃，例如，一个0.2级的pH计，在30℃pH缓冲液中进行校准，然后测试60℃的溶液(假定溶液的pH范围在pH6～8之间与pH7.00相差一个pH单位)，则温度影响的最大误差就是30×0.003=0.09pH。如果是3个pH单位(在pH4～10范围内)，最大误差就是0.27pH，从中可以看出温度对pH的影响是很大的。当然，我们也可以从中得出结论，为了减少温度对 pH 测量的误差，我们该注意以下三点：(1) 尽量选择接近被测溶液pH值的缓冲溶液校准pH计。(2)尽量使校准溶液的温度与被测溶液的温度一致或接近。(3)应该选择有温度补偿的pH计。精度高于0.1pH的pH计都有温度补偿调节，而0.2级的pH计就不带有温度补偿。有些0.2级的pH计也号称有0.1级的精度，其实这是不可能的，有人是将分辨率0.1pH和精度0.1pH这二个概念进行了混淆。即使以一个pH单位来说，相隔60℃的pH误差就是0.003×60=0.18pH，因此，没有温度补偿的pH计，最高的精度也只有0.2pH。13 .温度补偿能消除所有温度引起的误差吗?必须特别指出的是，pH计上设置的温度补偿，只是补偿电极的斜率项(2.303RT/F)。受温度影响的还有玻璃电极的标准电势，液接界电势等，它们与温度并非成严格的线性关系。同时，pH电极也需要一定的时间才能达到新温度下的平衡。因此，不管是手动温度补偿还是自动温度补偿，都不是很充分的。根据pH测量的操作定义，要想得到精密的测量结果，样品溶液与标准溶液应在相同和恒定的温度下测量，这就是等温测量原理。对于一般精度要求的pH测量，样品溶液与标准溶液的温度不同时，可使用温度补偿。14 .如何判断你的pH计是否准确?有不少用户在使用pH计时都心存疑惑，这个pH计到底准不准?有人以工作经验来判断，有人以pH试纸来判断，也有人以过去使用的pH计来判断，这些都是不可靠的。其实，唯1可靠和蕞简单的方法就是以pH标准缓冲溶液来来进行检定。这是唯1的检测标准。取三个标准缓冲溶液：pH=6.86、pH=4.00、pH=9.18(最好是新鲜配制并且温度相同),以pH=6.86F进行定位校准,以pH=4.00进行斜率校准,然后测试pH=9.18，pH计是否准确，是否合格立见分晓。小结：注意事项仪器在使用前必须进行校准，即，以上4～8款操作。如果仪器不关机，可以连续测定，一旦关机就要校准。但12小时即使不关机也必须校准一次。

同位素标记 (同位素内标)较于其同种元素的未标物具有质子数相同中子数变化的特点，通过用同位素取代特定原子来标记反应物，然后使反应物进行反应，并检测中子数变化的原子，可通过反应、代谢途径或细胞跟踪同位素。同位素内标物与对应的未标物理化性质相似，通过光吸收和免疫的方法无法区分，在色谱中如果将同位素内标物与对应的未标物用同样的检测方法，其保留时间也几乎一致，无法分辨。稳定性同位素内标是质谱方法即稳定性同位素稀释法du有的，在质谱(Mass)中，如果加进同位素内标，那测出来的值较未标物有很大的差值，质谱能把同位素内标和要检测的物质区分开。可供多种稳定同位素标记的内标，包括2H (氘标 D) 、13C、15N、17O、18O、34S等，放射性的同位素内标具有较大的伤害性，一般稳定性同位素可以完成的建议优-选稳定性同位素内标物，若被检测物是稳定同位素内标物对应的未标物，那么，较被检测物而言，对应的同位素标记物只是将部分氢原子(1H)、碳原子(12C)或氮原子(14N)等被2H (氘、D)、13C、15N所取代，被检测物与对应的稳定同位素内标物理化性质基本一致，尤其在色谱中，几乎无法区分。同样是稳定同位素标记，13C、15N相对来说比2H(氘标) 更好，所以氘标(D、2H)一般也相对而言更便宜，色谱定量中，2H、13C、15N标记的差别不大，如果需要质谱(MS)或者核磁(NMR)定量，一般建议优-选13C或者15N标记。目前同位素内标广泛应用于检测中：包括维生素检测、胆汁酸检测、激素检测、儿茶酚胺检测等。

细胞因子通过结合细胞表面相应的细胞因子受体而发挥生物学作用。细胞因子与其受体集合后启动复杂的细胞内分子间的相互作用，zui终引起细胞基因转录的变化。参与免疫应答与免疫调节，调节固有免疫和适应性免疫应答；刺激造血功能；刺激细胞活化、增殖和分化；诱导或抑制细胞毒作用，诱导其凋亡。作用：1.自分泌作用。2.旁分泌作用。3.内分泌作用。细胞因子的作用特点：多效性、重叠性、协同性、拮抗性和双重性。细胞因子研究具有非常重要的理论和实用意义，它有助于阐明分子水平的免疫调节机理，有助于疾病的预防、诊断和治疗，特别是利用基因工程技术生产的重组细胞因子已用于治疗肿瘤、感染、炎症、造血功能障碍等，并收到良好疗效，具有非常广阔的应用前景。Abbkine 细胞因子正逐渐作为佐剂用于疫苗的研制，如白介素-2、IL-12等。特点：（1）绝大多数细胞因子为质量小于25kDa的糖蛋白，质量低者如IL-8仅8kDa。多数细胞因子以单体形式存在，少数细胞因子如IL-5、IL-12、M-CSF和TGF-β等以双体形式发挥生物学作用。大多数编码细胞因子的基因为单拷贝基因（IFN-α除外），并由4-5个外显子和3-4个内含子组成。（2）主要与调节机体的免疫应答、造血功能和炎症反应有关。（3）通常以旁分泌（paracrine)或自分泌（autocrine)形式作用于附近细胞或细胞因子产生细胞本身。在生理状态下，绝大多数细胞因子只有产生的局部起作用。（4）高效能作用，一般在pM(10-12M）水平即有明显的生物学作用。（5）存在于细胞表面的相应高亲和性受体数量不多，在10-10000/每个细胞。细胞因子受体的研究进展相当迅速，根据细胞因子受体基因DNA序列以及受体胞膜外区氨基酸序列、同源性和结构，可分为四个类型：免疫球蛋白超家族、造血因子受体超家族、神经生长因子受体超家族和趋化因子受体。（6）多种细胞产生，一种IL可由许多种不同的细胞在不同条件下产生，如IL-1除单核细胞、巨噬细胞或巨噬细胞系产生外，B细胞、NK细胞、成纤维细胞、内皮细胞、表皮细胞等在某些条件下均可合成和分泌IL-1。（7）多重的调节作用（multipleregulatoryaction),细胞因子不同的调节作用与其本身浓度、作用靶细胞的类型以及同时存在的其它细胞因子种类有关。有时动物种属不一，相同的细胞因子的生物学作用可有较大的差异，如人IL-5主要作用于嗜酸性粒细胞，而鼠IL-5还可作用于B细胞。（8）重叠的免疫调节作用（overlappingregulatoryaction),如IL-2、IL-4、IL-9和IL-12都能维持和促进T淋巴细胞的增殖。（9）以网络形式发挥作用，细胞因子的网络作用主要是通过以下三种方式：（1）一种细胞因子诱导或抑制另一种细胞因子的产生，如IL-1和TGF-β分别促进或抑制T细胞IL-2的产生；（2）调节同一种细胞因子受体的表达，如高剂量IL-2可诱导NK细胞表达高亲和力IL-2受体；（3）诱导或抑制其它细胞因子受体的表达，如TGF-β可降低T细胞IL-2受体的数量，而IL-6和IFN-γ可促进T细胞IL-2受体的表达。（10）与激素、神经肽、神经递质共同组成了细胞间信号分子系统。（11）自限性分泌。

MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基，也是目前使用zui普遍的植物组织培养基。MS培养基具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。由于植物的多样性和生长环境的复杂性和多变性，所以不可能有一种能够适应所有类型的植物组织和器官，满足所有植物并实现其培养材料的再生，通常需要根据材料来源、培养目的等的不同，选择不同的培养基或者对培养成分做适当的改良。MS培养基是目前使用蕞普遍的培养基。其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养还能加速愈伤组织的生长。由于配方中的离子浓度高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会影响离子间的平衡。MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。因此，一般情况下，不用再添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。和其它培养基的基本成分相比，MS培养基中的硝酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。mg/L工作液浓度 单位大量元素：NH4NO3 1650KNO3 1900CaCl2·2H2O 440MgSO4·7H2O 370KH2PO4 170微量元素：KI 0.83H3BO3 6.2MnSO4·4H2O 22.3ZnSO4·7H2O 8.6Na2MoO4·2H2O 0.25CuSO4·5H2O 0.025CoCl2·6H2O 0.025铁盐：FeSO4·7H2O（27.8）Na2-EDTA·2H2O（37.3）有机物质：肌醇100烟酸0.5盐酸吡哆醇（维生素B6） 0.5盐酸硫胺素（维生素B1） 0.1甘氨酸2.0注意：肌醇一般是要另外分开来独自配成浓缩液，因为它比较难溶，一般配成100倍， 微量元素可以配成1000倍的。注意事项：1.母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。2.母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。MS培养基中还需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6 苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0 1 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2，4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为0 1 mg/mL的母液。4.组织培养是否能够获得成功，主要取决于对培养基的选择。不同的培养基具有不同的特点，也就适合于不同的植物种类和接种材料。在开展组织培养项目时，首先要对各种培养基进行了解和分析，以便能从中选择合适的使用。组培用的培养基一般包括基础培养基和激素，但是植物激素的种类和数量，随着不同培养阶段和不同材料有变化，因此各培养基配方中均不列入植物激素。常用的基础培养基除了有MS培养基，还有B5培养基，N6培养基。

1、什么是细胞培养培养的细胞由于细胞增殖，数量增加，细胞难以继续生长繁殖，需要进行分瓶培养，将培养的细胞分散，以1:2或1:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养，一般细胞可传代10-50代2、细胞的贴壁过程3、培养细胞的一代生长过程 ①潜伏期：细胞从接种到贴壁生长繁殖的一段时间二倍体细胞系该段时间较长，大概为24-96h；连续细胞系时间短，大概10-30min②指数生长期：细胞增殖最旺盛时期，此时进行细胞实验较佳指数生长期持续3-5d后，随细胞数量不断增多，生长空间日趋减少，细胞相互接触汇合成片，呈现接触抑制。而恶性细胞则无接触抑制现象；癌细胞则由于营养成分的消耗和细胞代谢产物的影响而发生密度抑制。 ③停滞期：细胞数量达到饱和密度后，细胞与营养液的交换面积减少，代谢产物积累，ph下降细胞停止增殖，进入停滞期。此时应该进行细胞传代，但是得传1-2代细胞才能恢复。4、细胞传代的一般步骤a、悬浮细胞可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用离心法后，加入新培养基后再吹打分散进行传代b、贴壁细胞①实验准备，超净台喷洒酒精，紫外照射30min。准备好培养瓶/皿，离心管，10%dmem，0.25%胰酶，d-hanks液等，带上手套，口罩等②倒去旧培养基，用d-hanks液清洗一遍，去除沉积的死细胞等③加入2ml 0.25％胰蛋白酶消化液，消化2～3min，倒置显微镜下观察，待细胞单层收缩突起出现空隙时，倒去酶液。 ④加入1～2滴管含有血清的培养液，反复吹打细胞，使其成细胞悬液⑤以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，37℃co2培养箱培养。⑥细胞培养24h后，即可观察培养液的颜色及细胞的生长情况5注意事项①传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作

【实验目的】（1）学会正确使用微生物实验中常用的接种工具，掌握各种接种技术。（2）观察细菌的培养特征，学会判断细菌在不同培养基上的生长状况。【实验原理】1．无菌接种技术无菌接种技术是微生物研究中最基本的操作技术之一。所谓接种即把微生物纯菌种在无菌条件下移植到适宜的培养基上，经培养获得纯培养物。因此，接种一般要求在无菌室、超净工作台（图2-1）或实验室火焰旁严格按无菌操作进行。根据实验目的的不同，采用的接种方法也不同，一般可分为斜面接种、平板接种、液体接种、穿刺接种等。斜面接种：是从已生长好微生物的斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜空白斜面培养基上的接种方法。它是菌种培养的蕞常用方法之一。平板接种：是用接种环将菌种接至平板培养基上，或用移液管将一定体积的菌液移至平板培养基上，然后进行培养。它主要用于菌落形态观察、分离纯化菌种、活菌计数或其他试验。穿刺接种：是主要用于接种厌氧菌、检查细菌的运动能力或保藏菌种的一种接种方法。接种时，将沾取菌种的接种针从半固体培养基表面向下穿刺，在接近管底处，接种针再循原路抽出。液体接种：是将斜面菌种或液体菌种接种到液体培养基中的一种方法。它用于菌种的液体培养或液体培养基中生长特征的观察。2．细菌培养特征观察培养特征是指微生物在培养基上所表现的群体形态和生长情况。在一定的培养条件下，不同的微生物培养特征各不相同，这是鉴别各种微生物的依据之一。细菌培养特征一般用固体、半固体和液体培养基进行培养观察，其中固体培养基又分平板和斜面两种形式。斜面培养基上的菌苔特征：自下而上在斜面培养基上划一直线接种，经培养，不同的细菌可以呈现丝状、刺毛状、念珠状、疏松状、树枝状或假根状等不同的菌苔特征。平板培养基上的菌落特征：把细菌培养在平板上，主要观察菌落的形态、隆起及边缘等状况，例如菌落的大小，表面干湿程度，隆起、扁平或凹陷，粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明、半透明或不透明，颜色以及质地等，如图2-2所示。液体培养基中的生长特征：细菌在液体培养基中有三种生长现象。大多数细菌在液体培养基中生长繁殖后呈均匀混浊；少数链状排列的细菌（如链球菌、炭疽芽孢杆菌）等则呈沉淀生长；枯草芽孢杆菌、结核分枝杆菌和铜绿假单胞菌等专性需氧菌一般呈表面生长，常形成菌膜。半固体培养基中的生长特征：半固体培养基主要用于细菌动力学试验。有鞭毛的细菌除了沿穿刺线生长外，在穿刺线两侧也可见羽毛状或云雾状混浊生长。无鞭毛的细菌只能沿穿刺线呈明显的线状生长，穿刺线两边的培养基仍然澄清透明。【实验器材】1．菌种大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Stap hyloccocus aureus）、蕈状芽孢杆菌（Bacillus mycoides）、粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）等。2．培养基牛肉膏蛋白胨水培养基（斜面、液体、半固体）。3．仪器和用具接种环、接种针、涂棒等接种工具（图2-3）。试管、移液管、滴管、培养皿、培养箱、酒精灯等。【实验步骤】1．斜面接种1）贴标签：接种前在距试管口2～3cm位置上贴上标签，注明菌名、接种日期等。2）点燃酒精灯。3）手持试管：将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈“V”字形。4）接种环灭菌（图2-4）：用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰数次。5）拔管塞：用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并夹于手中。试管口缓缓过火灭菌，切勿烧得过烫。6）取菌种：将烧过的接种环伸入菌种管内，先将环接触一下没有长菌的培养基部分，使其冷却，再轻轻沾取少量菌体或孢子，然后将接种环移出菌种管。注意：不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使接种环通过火焰。7）接种：在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接种斜面试管。从斜面培养基的底部向上部做“之”字形密集划线。注意：切勿划破培养基。也可用接种针在斜面培养基的中央划一条直线接种，可观察不同菌种的生长特点。8）塞管塞：取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。注意：塞棉塞时，不要移动试管，以免试管在移动时纳入不洁空气。以上所述的无菌操作过程见图2-5。9）灼烧接种环：将接种环灼烧灭菌后放回原处。10）培养：将接种好的试管于37℃培养箱中培养，24h后观察生长情况。3．液体接种（1）斜面菌种接种液体培养基1）接种前的操作：同上。2）接种：用接种环取少量斜面菌种移入培养基容器（试管或三角烧瓶等）中，将接种环在液体表面振荡或与容器壁轻轻摩擦，使菌苔散开。取出接种环，塞好棉塞，再轻轻摇动液体，使菌体均匀分布在液体中。3）培养：将接种好的试管直立于37℃培养箱中培养，24h后观察生长情况。（2）液体培养物接种液体培养基1）接种前的操作：同上。2）接种：取无菌移液管（或移液器），伸入菌种管内吸取适量菌液，转接到待接种的液体培养基内。塞好棉塞，再轻轻摇动液体，使菌体均匀分布。3）培养：将接种好的试管直立于37℃培养箱中培养，24h后观察生长情况。4．穿刺接种1）手持试管：按斜面接种法握持菌种管和半固体培养基管，靠近火焰。2）取菌种：将接种针在火焰上烧灼灭菌，冷却后从菌种管中挑取少许待接菌菌苔，迅速移至半固体培养基管中。3）穿刺接种（图2-6）：将接种针从培养基中央垂直刺入管部3/4深处，然后沿原路抽回。注意：接种针不能在培养基中左右移动，只能有一条穿刺线。）塞管塞：试管口经火焰灭菌后，塞上棉塞。灼烧接种针。5）培养：将接种好的试管置于37℃培养箱中培养，24h后观察生长情况。5．平板接种（1）划线法1）倒平板（图2-7）：将融化的琼脂培养基冷却至45℃左右，在酒精灯火焰旁，用右手的无名指及小指夹持棉塞，左手打开无菌培养皿盖的一边，右手持三角烧瓶向培养皿里注入20mL左右的培养基。将培养皿稍加旋转摇动后，置于水平位置待凝。2）划线：在酒精灯火焰上灼烧接种环，待其冷却后，以无菌操作取少量菌苔或菌液，伸入皿内，在平板上的一个区域沿“之”字形来回划线（具体方法参见实验9）。划线时，使接种环在琼脂表面作轻快滑动，切勿划破表面。3）培养：划线完毕后，灼烧接种环，在皿底用记号笔注明菌种名称、日期、姓名（或学号），将培养皿倒置放入37℃恒温培养箱中培养。（2）三点接种法一般用于霉菌菌落观察的接种方法。1）倒平板：同上。2）三点接种：无菌操作下，用接种针从斜面取少量孢子，针尖垂直地点接在平板培养基表面上，点接三次，接种结果见图2-8。注意：三点呈等边三角状，三点均位于培养皿的半径之中心。3）培养：将平板保持倒置状态放入培养箱内（切忌来回翻动），适温培养1周。（3）涂布法1）倒平板：同上。2）取菌液：用1mL无菌吸管吸取经适当稀释的菌液0.2mL于平板中。3）涂布：用无菌涂棒在平板表面均匀涂布（图2-9）。4）培养：室温下静置5～10min后，倒置于37℃恒温箱中培养24～48h。【实验报告】1．实验结果观察并记录用不同接种方法培养得到的细菌菌落形态特征，并列表比较几种细菌的菌落特征。 

【实验目的】（1）了解细菌对大分子物质水解的原理和方法。（2）了解糖发酵、IMViC和H2S试验的原理和方法。（3）通过不同微生物对不同物质的利用和代谢能力，认识微生物生理类型的多样性。【实验原理】微生物代谢类型的多样性使得微生物在自然界的物质循环中起着重要作用，同时为人类开发利用微生物资源提供更多的机会与途径。微生物代谢类型多样性具体表现在生理生化反应的多样性。不同细菌具有不同的酶系统，分解糖类、氨基酸等有机物的能力各异，从而使产生的分解产物亦有不同。因此，借助各种生理生化反应可以鉴别细菌的种类，这是微生物分类鉴定的重要依据。1．大分子物质水解微生物在生长繁殖过程中需要不断地从外界环境中吸收营养物质。环境中的大分子有机物必须经微生物分泌的胞外酶将其分解为小分子有机物才能被细胞吸收利用。不同的微生物分解利用生物大分子的能力不同，只有那些能够产生并分泌胞外酶的微生物才能利用相应的大分子有机物。微生物是否具有利用某种大分子物质的能力，可通过观察细菌菌落周围的底物变化来判断，如淀粉遇碘液会产生蓝色，但在细菌水解淀粉的区域，用碘测定不再产生蓝色，表明细菌能水解淀粉。2．糖发酵试验糖发酵试验常用于鉴定细菌对葡萄糖和乳糖等单糖的利用能力。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。有些细菌产酸产气，有些细菌只产酸不产气。产酸情况一般用溴甲酚紫指示剂判别，产气情况则通过观察液体培养基中倒置的德汉氏小管是否有气泡来判断。3．IMViC和H2S试验IMViC试验是吲哚试验（indol test）、甲基红试验（methyl red test）、伏-普试验（Voges-Prokauer test）和柠檬酸盐试验（citrate test）的缩写，主要用于水的细菌学检查。吲哚试验用来检测细菌对色氨酸的利用能力。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚和丙酮酸，吲哚本身无色，不能直接观察到，当加入对二甲基氨基苯jia醛试剂时，可形成红色的玫瑰吲哚，即吲哚试验阳性。甲基红试验用来检测细菌发酵葡萄糖的产酸能力。当细菌代谢糖大量产酸时，就会使加入培养基中的甲基红指示剂由橘黄色（pH6.3）变为红色（pH4.2），即甲基红反应阳性。伏-普试验用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。如产气肠杆菌发酵葡萄糖产生的丙酮酸大量进行缩合、脱羧，生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰，二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物，即伏-普反应阳性。柠檬酸盐试验用来检测细菌利用柠檬酸的能力。有些细菌能分解柠檬酸形成CO2，同时由于培养基中钠离子的存在而形成碳酸钠，使pH升高。若用溴麝香草酚蓝作为指示剂，培养基颜色由绿色（pH6.0～7.6）变为蓝色（pH>7.6）时，即反应阳性。硫化氢试验用来检测某些细菌能否分解含硫氨基酸，生成硫化氢。硫化氢遇培养基内的铁盐或铅盐，则形成黑褐色的硫化铁或硫化铅沉淀物。黑褐色沉淀物愈多，表示生成的硫化氢量愈多。【实验器材】1．菌种枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）。2．培养基淀粉培养基、明胶培养基、糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基、柠檬酸钠斜面培养基、柠檬酸铁铵培养基。3．试剂卢戈氏碘液、甲基红试剂、40％KOH溶液、5％α-萘酚、乙mi、吲哚试剂。4．仪器和用具培养箱、超净台、接种环、接种针、无菌培养皿、试管、试管架、记号笔等。【实验步骤】1．大分子物质水解（1）淀粉水解1）制平板：将淀粉培养基溶化后冷却至50℃左右，倒入无菌平皿，冷凝制成平板。在平皿底部用记号笔将平板划为二等份（视需要定，一般至多五等份）。2）接种：将枯草芽孢杆菌和大肠杆菌分别划线接种在zhi定区域，做上记号。3）培养：将培养皿倒置于37℃恒温箱中培养24～48h。4）观察：打开皿盖，滴加少量碘液于平板上，轻轻旋转，使碘液均匀铺满整个平板。如果菌落周围出现无色透明区，则说明淀粉已被水解。（2）明胶水解明胶是一种动物蛋白，用其配制的培养基在低于20℃的温度下凝固，高于24℃的温度下自行液化。明胶在细菌产生的蛋白酶（胞外酶）作用下，可水解成为小分子物质，此时虽在低于20℃的条件下，亦不再凝固，而由原来的凝固状态变为液体状态。1）接种：用穿刺法将枯草芽孢杆菌和大肠杆菌分别接种在2支明胶培养基试管中。2）培养：20℃下培养48h。3）观察：观察培养基是否液化（图6-1）。如果细菌在此温度下不能生长，则必须在所需的蕞适温度下培养。观察结果时需将试管从恒温箱中取出，置于冰浴或冰箱中，30min后取出立即倾斜试管，如试管中培养基部分或全部呈液化状态，表明试验菌为阳性；否则为阴性。图6-1 明胶穿刺液化的观察2．糖发酵试验（1）葡萄糖发酵试验1）接种：分别将大肠杆菌和普通变形杆菌接种于葡萄糖发酵培养基试管中，另取一支相同培养基试管不接种作为空白对照。注意：接种前检查培养基，其中倒立小管应无气泡。2）培养：37℃培养，分别在24h、36h、72h时观察结果。3）观察：若糖发酵培养基中所含的葡萄糖而产酸，则指示剂使培养基由紫色（pH6.8）转变为黄色（pH5.2）；如果发酵葡萄糖时产酸兼产气，则培养基除变色外，倒置的德汉氏小管内有气泡产生。注意：应先确定细菌是否生长，若生长，则培养基变混浊。生长缓慢者需延长培养观察时间。（2）乳糖发酵试验方法同上，所用培养基为乳糖发酵培养基。3．IMViC试验和H2S试验（1）吲哚试验1）接种：分别将大肠杆菌和产气肠杆菌接种于蛋白胨水培养基试管中，另取一支不接种作为对照。2）培养：37℃培养24h。3）观察：在培养液中加入乙mi约1mL，充分振荡，使吲哚溶于乙mi中。静置片刻，待乙mi层浮于液面后形成明显的乙mi层，再沿管壁加入吲哚试剂8～10滴。如有吲哚存在，则乙mi层呈现玫瑰红色，为阳性反应；不呈现红色则为阴性反应。注意：加入吲哚试剂后试管不可再摇动，否则结果不明显。（2）甲基红试验和伏-普试验1）接种：分别将大肠杆菌和产气肠杆菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基试管中，连同空白对照置37℃培养24h。2）观察：取洁净空试管，将每支试管中培养液一分为二，分别用于甲基红试验和伏-普试验。3）甲基红试验：沿试管壁向培养液中加入甲基红试剂4～6滴，呈鲜红色者为甲基红试验阳性，呈橘黄色者为阴性。4）伏-普试验：在培养液中加入40％KOH溶液10滴，再加入等量的5％萘酚溶液，用力振荡，再放入37℃恒温箱中保温15～30min或在沸水中加热1～2min，如培养液呈红色为反应阳性。（3）柠檬酸盐试验1）接种：分别将大肠杆菌和产气肠杆菌接种于柠檬酸钠培养基斜面上，另取一支不接种作为空白对照。2）培养：37℃培养24～48h。3）观察：观察培养基颜色变化，含有溴麝香草酚蓝的斜面呈蓝色者为阳性反应，呈绿色者为阴性反应。（4）H2S试验1）接种：穿刺接种大肠杆菌和产气肠杆菌于柠檬酸铁铵培养基中。2）培养：37℃培养24h。3）观察：沿穿刺线部位呈黑褐色者为阳性，颜色不变则为阴性。【实验报告】1．实验结果将结果填入表6-1～6-3，以“＋”表示阳性反应，以“—”表示阴性反应。表6-1 糖发酵试验结果表6-2 大分子物质水解试验结果表6-3 IMViC和H2S试验结果 

微生物量的测定可以反映水生化处理系统中生物生长情况，运行是否正常。而对环境的卫生检验则反映环境污染的情况。生物量主要是直接或间接测定细菌群体的细胞数量或重量、原生质及细胞中某些代谢活动的变化等。 一、细菌活菌数的测定 1．平板菌落计数法 平板菌落计数法是根据在固体培养基上生长的菌落计数，每一个菌落由一个单细胞繁殖而成，为肉眼可见的细胞群体。根据菌落数可以计算出待测菌液中的活菌数量。 （1）取水样1ml利用无菌水按10倍数作一系列稀释，水样稀释浓度以在平板上长出的菌落数在30～300个之间为宜。稀释时应尽量使微生物细胞分散开，否则易生长出片状菌苔。稀释过程参考实验五。 （2）以无菌操作用无菌移液管吸取1ml充分混匀的水样，注入无菌平皿中，再倾入约15ml已融化并冷却到45℃的营养琼脂培养基，迅速转动，使水样与培养基充分混匀。 （3）置水平位置静止凝固后，倒置于37℃下培养24小时。每个水样取3个连续适宜稀释菌液倒平板，各倾注3个平皿，同时做不加水样空白对照。 （4）待菌落生长好取出平皿计数，统计出同一稀释度一个平皿上菌落的平均数。根据以下公式计算：每毫升菌液中活菌总数＝同一稀释度的菌落平均数×稀释倍数。 （5）菌落计数原则：先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平皿有较大片状的菌苔生长时，则不宜采用，而应以无片菌苔的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，可将此一半平皿计数后乘2以代表全皿菌落数。 shou先选择平均菌落数在30～300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落符合此范围时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数报告之（表10-1中例1）。 若有两个稀释度，其平均菌落数均在30～300之间，应按两者菌落总数之比值来决定。若其比例小于2应报告两者的平均数，若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数（表10-1中例2、例3）。 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度蕞高的平均菌落数乘以稀释倍数（表10-1中例4）。若所有稀释度的平均数均小于30，则应按稀释度蕞低的平均菌落数乘以稀释倍数（表10-1中例5）。 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以蕞接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（表10-1中例6）。 菌落计数报告，菌落数在100以内按实有数报告，大于100时采用两位有效数字，在两位有效数字后面的值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示（表10-1中“报告方式”栏）。在报告“菌落无法计数”时，应注明水样的稀释倍数。 表10-1 计算细菌菌落总数方法的示例 （6）细菌总数测定方法的改进。依上述方法观察计数，但深层较小菌落容易遗漏，造成计数上误差较大。由于多数细菌具有脱氢酶，在培养皿中产生脱氢作用，遇到氯化三苯基四氮唑（TTC）在平板上显现深浅不同红色小点或红色片状物均为细菌。TTC的投加量以0.01％及0.04％为宜，切忌TTC浓度过高，否则对细菌具有抑制作用。 使用该改进方法时，要注意如下情况：①要注意选择好倒平板的稀释度，一般以3个稀释度中的第二稀释度倒平板所出现的平均菌落数在50个左右为蕞好；②由3个稀释度（10－4、10－5、10－6）计算出的每毫升菌液中总活菌数应很接近，如相差较大，表示试验不准确，应重做。 2．液体稀释法（MPN法） 此法也可进行活菌数计算，由于某些微生物在琼脂平板上不易生长，故不适用平板菌落计数，但在液体培养基中生长易于检查。因此，根据某些稀释菌液接种培养后所生长微生物的试管数，用统计数学方法计算出原样品的含菌量，此法也称为蕞或然数技术或蕞大可能数量法，简称MPN法。反硝化细菌、氨化细菌、类大肠杆菌及紫色非硫光合细菌均可利用此法计数。 操作时先将样品作一系列的10倍稀释，至蕞后一级稀释液接种后，不出现菌的生长为临界级数。取后5种稀释液接种于无菌的液体培养基中，一般需做3～5管平行实验。适温培养，根据生长菌试管数，确定数据指标，查出菌的近似值，再行计算。 下面以5管平行实验为例来介绍检验方法。其他3管、4管平行实验同理依次查表计算，一般要根据实验度要求选择管数，一般用3管平行实验即可。 （1）取1ml样品，按10倍作一系列稀释至10－10。 （2）利用无菌移液管分别从不同浓度稀释液中各取1ml，分别接种到5支已灭菌液体培养基试管中。适温培养2～14天，记录每个稀释液出现细菌生长的试管数来确定数量指标。注意每种稀释度必须换一支移液管。 （3）数量指标的确定，不论重复系数多少均取3位数字。 1）如果生长情况如下： 表10-2 生长情况表一 取各重复管数都有菌生长的蕞高稀释度的生长管数，为数量指标的个数字，其后两个稀释度的生长管数作为其他的个数。就上例4个重复生长的有10－3及10－4两个稀释度，取其中高稀释度10－4，其中生长管数“4”作为数量指标的位数字；10－5为3及10－6为1，因此所得数量指标为4、3、1。 2）如果生长情况如下： 表10-3 生长情况表二 依原则1）数量指标数字应取10－4的4，其后两个数字是“2”和“1”，可是高稀释度10－7中还有1管生长，因而需将这个管加在第三个数上，所以数量指标数为4、2、2。 3）如果生长情况如下： 表10-4 生长情况表三 所取数量指标应使有生长菌的管数位于中间。 确定数量指标后查附表1得出菌近似值。 （4）计算方法。利用以下公式计算原菌液的蕞大可能数。 1ml（g）样品中的菌数＝菌近似值×数量指标位数的稀释倍数。 3．滤膜过滤计数法 当单位体积水样中所含微生物数量较少时，可通过超滤膜过滤浓集后，再进行培养计数。 （1）滤膜主要是由硝化纤维制成的白色薄膜，根据实验要求可选择不同大小的孔径及直径。使用前应先经灭菌处理，将滤膜放入装有蒸馏水的烧杯中，置于沸水浴中煮沸灭菌3次，每次15分钟。前两次煮沸后需换水洗涤3次，以除去残留溶剂。 （2）利用无菌镊子取滤膜，安装于过滤器上，将过滤器装于抽滤瓶上，并与真空泵相连接。 （3）取适量水样放入过滤器漏斗内过滤，若水样量少应加无菌水稀释、混匀过滤，过滤水样多少根据漏斗直径决定。开动真空泵抽滤，使水样中微生物被截留在滤膜上。待水样全部滤完，立即停止抽滤。 （4）打开滤器，利用无菌镊子取下滤膜，过滤面向上放于平板培养基上，使滤膜与培养基之间贴紧，不可留有气泡。盖好培养皿盖，倒置适温培养，若培养时间较长可将小培养皿放于铺有湿脱脂棉的大培养皿内，以保持皿内湿度。每个水样做3个平皿培养。计算膜上菌落数，取平均值，计算出每毫升水样的含菌数

荧光定量PCR 因操作方便、运行速度快、实验结果准确，受到越来越多的分子生物学研究者青睐。在实验技术成熟的今天，也许对你来说，最难得不是实验技术上的问题——而是选择哪一种荧光定量PCR仪——你要征询实验室成员的意见、分析实验室目前乃至将来的需求、平衡实验室的预算，更要详细研究各种极富诱惑力的宣传资料。面对各种不同性能的产品，您又该如何选择呢?　　shou先建议大家走出认识荧光定量PCR的两个误区：　　误区一：仪器通道越多越好　　随着PCR技术的成熟运用，多重扩增越来越热闹，荧光定量PCR仪也不能幸免。从最初ABI公司推出的单通道荧光定量PCR仪发展到如今各个厂家都推出4通道、5通道甚至6通道荧光定量PCR仪，眼花缭乱的选择让人无所适从，就有人一不小心走进了“通道越多越好”的误区。　　在使用有些厂家5通道的荧光定量仪时，为了确保实验结果的精确性和准确性都要在实验中使用ROX(一种荧光染料)或专用的Reference dye ，这些荧光染料都必须单独使用一个检测通道。这样以来，真正能检测多重PCR荧光信号的有效通道只有4个，而且使用校正染料可能会增加后期的使用成本。有的荧光定量PCR的检测通道是只为自已厂家的专用的荧光染料或试剂开放的，有效检测通道也绝非像宣传资料中宣称的那么多。在购买前确认荧光定量PCR仪器的有效检测通道尤为重要，不能单单只听宣传。　　考虑多重荧光定量PCR的通道数的时候也应该从实验室实际情况出发，多重PCR并非人人适用、人人可用，因为它使实验复杂化了。　　误区二：real-time PCR仪无需梯度功能　　对于使用染料法的定量PCR反应，虽然有各种各样的PCR引物设计软件或者经验公式计算熔解温度(Tm值)，但运用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差异会很大。引物的熔解温度决定了退火温度。而且模版中碱基的组合千变万化，对于特殊片断，经验公式得到的数据不一定能得出准确的结果，退火温度细微的差异对结果都可能产生决定性的影响，因而“摸条件”一度是让人很头疼的问题。梯度PCR的出现部分解决了一些问题——在反应过程中每个孔的温度控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应条件。　　不单退火温度，连变性温度和延伸温度都可以优化——对于多种聚合酶混合酶扩增如Invitrogen、Clontech、Promega的多数高保真Taq酶来说这个非常重要，因为Taq和校正酶的最佳反应温度可能有显着差异，优化延伸温度就显得很重要。　　使用有梯度功能的荧光定量PCR可以一次完成以往多次实验才能完成的优化过程，简化了摸索 PCR反应条件的繁琐实验，既节省实验时间提高效率，又节省实验成本。　　当我们走出误区，想要选择一款最适合自己需求的荧光定量PCR仪时我们又该关注些什么呢?　　1、 仪器的检测通量　　在购买定量PCR仪的时候要根据实验实的需要来选择不同通量的仪器。目前市面上的荧光定量PCR的检测通量小到16个多到384个。如果进行一般的基因表达研究或病原体检测，实在不必购买昂贵的仪器，96孔的通量足够用;需要寻找要新药靶点和疾病标记的实验室可以考虑购买384孔板的仪器。假如经费有限无法购买384孔板仪器的实验室，可以考虑购买运行速度快(带有FAST模块)的96孔板荧光定量PCR仪。有了高通量的仪器，你会发现样品的制备和小体系、多样本的PCR体系构建成为限制实验速度和结果的颈瓶。2、 硬件设计特点　　荧光定量PCR仪主要有传统的96孔板式、创新的离心式等，每种设计都有它的独到之处但也都有无法避免的缺憾。　　传统的96孔板的荧光定量PCR可以容纳的样本量大，而且无需特殊的耗材。有些传统的96孔板的仪器采用卤钨灯激发、CCD检测，这些光学结构在96孔板的顶部，每个样品孔距光源和检测器的光程各不相同——边缘效应，对结果产生影响。为了保证精确、准确的实验结果，这类仪器在实验过程中通常会使用ROX(一种荧光染料)或专用的Reference dye作为参照校正实验结果。卤钨灯的使用寿命短、更换成本较高已经成为很多用户头痛的问题。在实验过程中卤钨灯作为一种热光源，产生较多热能对实验结果有一定的影响。CCD最大的优点就是可以同时扫描所有样品中的荧光信号，但是灵敏度较低，而且同时检测样品间的荧光信号存在干扰。3、 运行速度　　在荧光定量PCR仪的众多技术参数中，升降温速度也是厂家喜欢大力宣传的指标。更快的升降温，可以缩短反应进行的时间，而且缩短了可能的非特异性结合、反应的时间，提高PCR的特异性。4、 灵活性　　大规模繁忙的实验室设备固然让人羡慕，但是常规实验室同样可以有精彩的选择。现在的仪器供应商拥有众多技术专家，有的还能提供整个分子生物学的基础研究平台，不但了解、满足您现在的需求，而且还考虑到了你可能变化的需求——升级和更换模块。

在PCR仪上完成一个PCR反应所需要的时间决定于以下几个因素：1、模块升温和降温时间2、模块与PCR管内温度平衡时间3、延伸时间4、循环次数下面就以上几点做一点分析，以便大家了解快速PCR技术与快速PCR仪的区别。1、模块升温和降温度时间PCR仪一般会标明升温速度和降温速度，但标的大多是zui大变温速度，也就是说是瞬间达到的速度。而与实验相关的平均升降温速度只有极少量厂家标明。以平均2度和4度（能做到平均升降温4度的仪器极少）来计算，从95度降到55度，分别是20秒和10秒，每一个循环差20秒钟。以一般35个循环来计算，影响实验时间700秒，也就是不到12分钟。实际还要考虑过冲问题，影响时间还会少些。2、模块与PCR管内温度平衡时间模块温度达到后，PCR管内的温度远没有达到（塑料和水的导热系数比铝块差300倍以上），需要时间来使二者达到平衡。一般有四种办法来减少这一时间，一是让模块温度过冲，在管内温度快达到时降到目标温度，但太高的过冲可能造成实际温度过冲，影响PCR反应结果；二是减少PCR反应液的体积，但体积变小时PCR反应的可靠性会降低；三是降低PCR管的厚度，但太薄时强度不够；四是增加PCR管与模块贴附程度。3、延伸时间延伸时间与PCR产物的长度和DNA聚合酶的合成速度有关。如果PCR产物长度少于100bp时，可能考虑将延伸时间变为0（即两步法）；采用高速的DNA聚合酶也是常用的方法，但并不是所有PCR实验都可以用高速的DNA聚合酶。4、循环次数循环次数与模板量及检测要求相关。所谓快速PCR技术是将快速PCR仪与超薄管（或特殊贴附技术）以及高速DNA聚合酶等技术整合在一起，可达到较短时间完成PCR反应。而一些厂家在向用户推xiao PCR仪时，不去说明快速PCR技术，只强调PCR仪速度快（大都用zui大升降温速度来HuYou用户）。好像买了快速PCR仪后，原来1个半小时的扩增时间变会缩短成半小时似的。而用户采购了快速PCR仪后才发现并不那么回事。有不少用户采用快速模式根本就做不出好的实验结果。特别是进行多重PCR扩增的用户，如*系统用于身份鉴定的试剂。快速PCR技术与快速PCR仪是两回事。快速PCR仪zui多只能缩短PCR反应时间10分钟左右，要实现真正的快速PCR反应，还需要其他一些努力。大多数用户根本就不需要快速PCR技术。

PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些蕞好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应 固定不宜随意更改。酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单位。②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul，应用多大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。有时还有必要用标准的温度计，检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度，这也是PCR失败的原因之一。靶序列变异：如靶序列发生突变或缺失，影响引物与模板特异性结合，或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列，其PCR扩增是不会成功的。假阳性出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行PCR扩增时，扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个基因组或大片段的交叉污染，导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决：操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。除酶及不能耐高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及样进枪头等均应一次性使用。必要时，在加标本前，反应管和试剂用紫外线照射，以破坏存在的核酸。二是空气中的小片段核酸污染，这些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。可互相拼接，与引物互补后，可扩增出PCR产物，而导致假阳性的产生，可用巢式PCR方法来减轻或消除。出现非特异性扩增带PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。其对策有：必要时重新设计引物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量，适当增加模板量，减少循环次数。适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。出现片状拖带或涂抹带PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。其对策有：减少酶量，或调换另一来源的酶。减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓度。增加模板量，减少循环次数。克隆PCR产物1)克隆PCR产物的蕞优条件是什么？蕞佳插入片段：载体比需实验确定。1：1（插入片段：载体）常为蕞佳比，摩尔数比1：8或8：1也行。应测定比值范围。连接用5ul2X连接液,50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶，插入片段共10ul。室温保温1小时，或4℃过夜。在这2种温度下，缺T-凸出端的载体会自连，产生蓝斑。室温保温1小时能满足大多数克隆要求，为提高连接效率，需4℃过夜。2)PCR产物是否需要用凝胶纯化？如凝胶分析扩增产物只有一条带，不需要用凝胶纯化。如可见其他杂带，可能是积累了大量引物的二聚体。少量的引物二聚体的摩尔数也很高，这会产生高比例的带有引物二聚体的克隆，而非目的插入片段。为此需在克隆前做凝胶纯化。3)如果没有回收到目的片段，还需要作什么对照实验？A）涂布未转化的感受态细胞。如有菌落，表明氨苄失效，或污染上带有氨苄抗型的质粒，或产生氨苄抗型的菌落。B）转化完整质粒，计算菌落生长数，测定转化效率。例如，将1ug/ul质粒1:100稀释,1ul用于100ul感受态细胞转化。用SOC稀释到1000ul后，用100ul铺板。培养过夜，产生1000个菌落。转化率为：产生菌落的总数/铺板DNA的总量。铺板DNA的总量是转化反应所用的量除以稀释倍数。具体而言转化用10ng DNA，用SOC稀释到1000u后含10 ngDNA，用1/10铺板，共用1 ng DNA。转化率为：1000克隆X10（3次方） ng /铺板1 ng DNA ug=10（6次方）cfu/ ug转化pGEM-T应用10（8次方）cfu/ ug感受态细胞。如没有菌落或少有菌落，感受态细胞的转化率太低。C）如用pGEM-T正对照，或PCR产物，产生>20-40蓝斑（用zhi定步骤10（8次方）cfu/ug感受态细胞），表明载体失去T。可能是连接酶污染了核酸酶。T4DNA连接酶（M1801，M1804，M1794）质量标准好无核酸酶污染，不应用其它来源的T4 DNA连接酶替换。D）用pGEM-T或pGEM-TEasy载体，连接pGEM-T正对照，转化高频率感受态细胞（10（8次方）cfu/ug）,按照zhi定的实验步骤，可得100个菌落，其中60%应为白斑，如产生>20-40蓝斑,没有菌落或少有菌落，连接有问题。4)对照实验结果好，却没有回收到目的片段，实验出了什么问题？A）连接用室温保温1小时，能满足大多数克隆，为提高效率，需4℃过夜。B）插入片段带有污染，使3`-T缺失，或抑制连接，抑制转化。为此，将插入片段和pGEM-T正对照混合，再连接。如降低了对照的菌落数，插入片段需纯化，或重新制备。如产生大量的蓝斑，插入片段污染有核酸酶，使pGEM-T或pGEM-TEasy载体3`-T缺失。C）插入片段不适于连接。用凝胶纯化的插入片段，因受UV过度照射，时有发生。UV过度照射会产生嘧啶二聚体，不利于连接，DNA必需重新纯化。D）带有修复功能的耐热DNA聚合酶的扩增产物末端无A，后者是pGEM-T或pGEM-T Easy载体克隆所需。加TaqDNA聚合酶和核苷酸可在末端加A。详情查pGEM-T pGEM-T Easy载体技术资料（TM042）。E）高度重复序列可能会不稳定，在扩增中产生缺失和重排，如发现插入片段高频率地产生缺失和重排，需用重组缺陷大肠杆菌菌株，如SURE细胞PCR反应体系与反应条件标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液 　 10ul4种dNTP混合物 　 各200umol/L引物 　　　　 　 各10～100pmol模板DNA 　　　 　0.1～2ugTaq DNA聚合酶 　 2.5uMg2+　　　　　　 1.5mmol/L加双或三蒸水至 　100ulPCR反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+引物： 引物是PCR特异性反应的关键，PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC蕞好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。⑤引物3'端的碱基，特别是蕞末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列蕞好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以蕞di引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。酶及其浓度　目前有两种Taq DNA聚合酶供应，一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量减少。dNTP的质量与浓度　dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系，dNTP粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1MNaOH或1M Tris。HCL的缓冲液将其PH调节到7.0～7.5，小量分装，-20℃冰冻保存。多次冻融会使dNTP降解。在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等(等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。模板(靶基因)核酸　模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是：溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀；蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。Mg2+浓度　Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显着的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增，浓度过低会降低TaqDNA聚合酶的活性，使反应产物减少。

　　蛋白质与水之间的作用力主要是蛋白质中的肽键（偶极-偶极相互作用或氢键），或氨基酸的侧链（解离的、极性甚至非极性基团）同水分子之间发生了相互作用。　　影响蛋白质水溶性的应素很多：　　（1）pH>pI 时，蛋白质带负电荷，pH=pI 时，蛋白质不带电荷，pH 时，蛋白质带正电荷。溶液的pH 低于或高于蛋白质的pI 都有利于蛋白质水溶性的增加，一方面是加强了蛋白质与水分子的相互作用，另一方面蛋白质链之间的相互排斥作用。等电沉淀。　　（2）离子强度：μ=0.5ΣCiZi2，Ci 表示离子强度，Zi 表示离子价数。　　盐溶：当溶液中的中性盐浓度在0.5mol/L 时，可增加蛋白质的溶解性，盐作用减弱蛋白质分子之间的相互作用。　　盐析：当溶液中的中性盐的浓度大于1mol/L 时，蛋白质会沉淀析出，这是盐与蛋白质竞争水分的结果。　　不同盐类对蛋白质的盐析作用强弱不同。将这种强弱顺序称为感胶离子序：　　（3）非水溶剂：有些有机溶剂可引起蛋白质变性沉淀，主要是有机溶剂降低了水的介电常数，蛋白质之间的静电斥力降低。　　（4）温度：温度低于40-50℃时，随温度的增大水溶性增大，当温度大于50℃，随温度的增大，水溶性降低。　　根据蛋白质的溶解性对蛋白质分类：　　（1）清蛋白：可溶于pH6.6 的水中，血清清蛋白，卵清蛋白，α-乳清蛋白；　　（2）球蛋白：能溶于pH7 的稀碱溶液，β-乳球蛋白；　　（3）醇溶蛋白：能溶于70%的乙醇，玉米醇溶蛋白；（4）谷蛋白：在上述溶剂中都不溶解，但可溶于酸（pH2）或碱（pH12）。

在培养细胞时，人们常常关注细菌和真菌的污染，认为它们是细胞培养的主要干扰因素。但其实，更严重的是支原体 的感染，它的发生率非常高，而且不易被发现。远慕生物为您分析污染细胞的支原体从哪里来。不仅普通光镜下无法发现支原体，而且培养基也不容易变色。但支原体对细胞的各种干扰却是不容忽视的。它不仅导致细胞状态不佳，生长速度慢，而且会使细胞内DNA、RNA及蛋白表达发生改变，严重影响实验结果。因此，在预防和治疗支原体污染之前，有必要去了解细胞被支原体污染的可能途径。支原体可以通过顶部的细胞器特异性和宿主细胞结合。这些顶部的细胞器含有高浓度的粘附蛋白，可粘附到真核细胞并穿入到细胞内部。支原体缺乏细胞壁，它们的胞膜可和宿主的细胞膜融合并交换其胞膜和胞浆成分。支原体污染的频率和污染来源细胞培养中有几种支原体污染与人、牛和猪有关。实验室的工作人员是口腔支原体、发酵支原体和人型支原体的主要来源。这三种支原体占细胞培养中支原体污染的一半以上，它们主要存在于人的口咽部。精氨酸支原体和无胆甾原体是另两类细胞培养中的支原体，它们来自胎牛血清和新生牛血清。胰酶如果是猪来源的，那么也可能存在猪鼻支原体。支原体在实验室内的扩散来源McGarrity设计了一个模型，来发现支原体是如何在超净台里的细胞传代过程中发生传播的。他先故意用支原体感染细胞。在超净台中，用胰蛋白酶消化该污染的细胞后发现，活的支原体可从细胞培养瓶外的细胞计数板、移液器、废弃盘中被技术员分离出来。即使过了四至六天，活的支原体仍然可以存在于超净台表面，可被成功恢复。在超净台里，传代完被支原体污染的细胞后，再传代干净的不含支原体的细胞，结果仍然在6周后被检测出支原体阳性。这些结果表明，支原体的传播是多么的快速和容易！它也警告我们，要zui大限度的避免支原体的污染，因为一瓶细胞发生污染，就会带来支原体传播的可能。未真正消毒的耗材、培养基和溶液不恰当的消毒导致污染的另一个原因。高压锅或干热烤箱中堆积太多的物品造成加热不均，使一小部分耗材未得到消毒。灭菌循环时间过短是另一个消毒上犯的错误，特别是对于超过500ml的液体，或者是包含固体成分的溶液，或胶体物质如琼脂、淀粉等。为了实现无菌，灭菌材料的尺寸、质量、性质和体积必须始终考虑。在无菌和无昆虫区域存放消毒好的物品，使防止再次污染的前提。良好的无菌操作也是至关重要的。实验室人员在因人导致的细胞支原体污染中，口腔支原体发生率zui高，它主要存在人的口咽部。发酵支原体和唾液支原体也在污染的细胞培养液中被检测出来，不过发生率更低。被支原体污染的细胞实验室内细胞支原体的相互传染，有必要对于从外源获得的新的细胞系进行支原体检测。一瓶细胞中的单个支原体的存在足以威胁到其他培养的细胞。支原体的污染能通过细胞操作产生的气溶胶或液滴传播。所以，应一次只操作一种细胞，为每种细胞系配置单独的培养基和试剂，这能避免支原体的污染。细胞培养的正确操作和对新培养的细胞定期检查，可以减少支原体污染的机会。

1、大肠菌群大肠菌群，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。大肠菌群都是直接或间接地来自人和温血动物的粪便。一般食品中大肠菌群超标，表示食品受动温血动物的粪便污染，其中典型大肠杆菌为粪便近期污染，其他菌属则可能为粪便的陈旧污染。人吃了大肠菌群超标的食物可能会导致：肠道传染病、食物中毒等。2、霉菌霉菌，是丝状真菌的俗称，意即"发霉的真菌"，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不像蘑菇那样产生大型的子实体。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。霉菌在我们的生活中无处不在，它比较青睐于温暖潮湿的环境，一有合适的环境就会大量的繁殖，必须采取措施来阻止霉菌的繁殖或切断其传播途径，就可以摆脱霉菌的污染。霉菌对食物的污染，降低食品的食用品质外，还会产生霉菌毒素。霉菌毒素对人主要毒性表现在神经和内分泌紊乱、免疫抑制、致癌致畸、肝肾损伤、繁殖障碍等。3、酵母酵母是一些单细胞真菌，并非系统演化分类的单元。是子囊菌、担子菌等几科单细胞真菌的通称，一般泛指能发酵糖类的各种单细胞真菌，有的对食品加工有益，如发酵粉、酿酒酵母，有的为致病菌。空气中、人体中都存在一定数量的酵母菌，只要在合适的环境就会快速繁殖。吃了致病性酵母菌污染的食品易造成食物中毒，有些免疫力低的人群亦可能发生酵母菌感染。4、金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此，食品受到污染的机会很多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。5、沙门氏菌沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌。沙门氏菌属有的专对人类致病，有的只对动物致病，也有对人和动物都致病。沙门氏菌病是指由各种类型沙门氏菌所引起的对人类、家畜以及野生qin兽不同形式的总称。感染沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染食品，可使人发生食物中毒。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜shou。沙门氏菌主要污染肉类食品，鱼、禽、奶、蛋类食品也可受此菌污染。沙门氏菌食物中毒全年都可发生，吃了未煮透的病、死牲畜肉或在屠宰后其他环节污染的牲畜肉是引起沙门氏菌食物中毒的最主要原因。由沙门氏菌引起的食品中毒症状主要有e心、呕吐、腹痛、头痛、畏寒和腹泻等，还伴有乏力、肌肉酸痛、视觉模糊、中等程度发热、躁动不安和嗜睡，延续时问2～3d，平均致死率为4.1%。6、志贺氏菌志贺氏菌即通称的痢疾杆菌。痢疾贺志贺氏菌是导致典型细菌痢疾的病原菌，在敏感人群中很少数量的个体就可以致病。志贺氏菌食物中毒是指由志贺氏菌引起的细菌性食物中毒。引起食物中毒的志贺氏菌主要是宋内氏志贺菌。主要发生在夏秋季，引起中毒的食品主要是热肉制品等。志贺氏菌侵入肠粘膜组织并释放内毒素引起症状。潜伏期一般10-14h。症状为剧烈腹痛、腹泻（水样便，可带血和粘液）、发热、里急后重显着。严重者出现痉挛和休克。7、溶血性链球菌溶血性链球菌又称沙培林,对热和化学清毒剂均敏感，常引起扁桃体、咽部、中耳等感染。亦为肾盂肾炎、产褥热、猩红热的病原体。一般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品：①食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食品的污染；②食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染；③熟食制品因包装不善而使食品受到污染。溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变tai反应。8、李斯特菌李斯特菌，又名单核球增多性李斯特菌、李氏菌，是一种兼性厌氧细菌，为李斯特菌症的病原体。李斯特菌是革兰氏阳性菌，属厚壁菌门，取名自约瑟夫?李斯特。它主要以食物为传染媒介，是最致命的食源性病原体之一。李斯特菌在环境中无处不在，在绝大多数食品中都能找到李斯特菌。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都已被证实是李斯特菌的感染源。李斯特菌是嗜冷菌，在冰箱冷藏温度、沙拉中均能生长繁殖。李斯特菌感染后健康成人个体可出现轻微类似流感症状，新生儿、孕妇、免疫缺陷患者表现为呼吸急促、呕吐、出血性皮疹、化脓性结膜炎、发热、抽搐、昏迷、自然流产、脑膜炎、败血症直至死亡。9、大肠埃希菌大肠埃希菌是人和动物肠道中的正常栖居菌。大肠埃希菌的致病物质之一是血浆凝固酶。根据致病性的不同，致泻性大肠埃希菌被分为产肠毒素性大肠埃希菌、肠道侵袭性大肠埃希菌、肠道致病性大肠埃希菌、肠集聚性黏附性大肠埃希菌和肠出血性大肠埃希菌5种。常见中毒食品为各类熟肉制品、冷荤、牛肉、生牛奶，其次为蛋及蛋制品、乳酪及蔬菜、水果、饮料等食品。中毒原因主要是受污染的食品食用前未经彻底加热。中毒多发生在3-9月。不同的致泻性大肠埃希菌引起的中毒，症状各不相同。10、副溶血性弧菌副溶血性弧菌，为革兰氏阴性杆菌，呈弧状、杆状、丝状等多种形状，无牙孢。进食含有该菌的食物可致食物中毒，也称嗜盐菌食物中毒。临床上以急性起病、腹痛、呕吐、腹泻及水样便为主要症状。副溶血性弧菌是一种海洋细菌，主要来源于鱼、虾、蟹、贝类和海藻等海产品。此菌对酸敏感，在普通食醋中5分钟即可杀死；对热的抵抗力较弱。11、肉毒杆菌肉毒杆菌是一种生长在缺氧环境下的细菌，在罐头食品及密封腌渍食物中具有极强的生存能力，是毒性最强的细菌之一。肉毒杆菌是一种致命病菌，在繁殖过程中分泌肉毒毒素，该种毒素是目前已知的最剧毒物，可抑制胆碱能神经末梢释放乙酰胆碱，导致肌肉松弛型麻痹。肉毒杆菌在自然界分布广泛，土壤中常可检出，偶亦存在于动物粪便中。人体的胃肠道是一个良好的缺氧环境，适于肉毒杆菌居住。肉毒杆菌属于厌氧菌，严格厌氧，在胃肠道内既能分解葡萄糖、麦芽糖及果糖，产酸产气，又能消化分解肉渣，使之变黑，fu败恶臭。在厌氧环境中，此菌能分泌强烈的肉毒毒素，能引起特殊的神经中毒症状，致残率、病死率极高。摄食肉毒杆菌的食品可引发食物中毒，如pH>4.6的低酸性罐头食品(含铁罐，玻璃罐)或香肠、火腿。人感染肉毒杆菌后会出现视觉模糊、呼吸困难、肌肉乏力等症状，如病情严重可能导致死亡。12、霍乱弧菌霍乱弧菌是人类霍乱的病原体,霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界上引起多次大流行，主要表现为剧烈的呕吐，腹泻，失水，死亡率甚高。属于国际检疫传染病。人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯1易感者，传播途径主要是通过污染的水源或未煮熟的食物如海产品、蔬菜经口摄入。居住拥挤，卫生状况差，特别是公用水源是造成暴发流行的重要因素。生产中的控制主要是严格审核原材料的来源，以及生产工序中的灭菌处理。13、变形杆菌变形杆菌是人和动物的寄生菌和病原菌。广泛分布在自然界中，如土壤、水、垃圾、fu败有机物及人或动物的肠道内。可引起多种感染。中毒食品主要以动物性食品为主，其次为豆制品和凉拌菜，发病季节多在夏、秋，中毒原因为被污染食品在食用前未彻底加热，变形杆菌食物中毒是我国常见的食物中毒之一。进食后2~30小时出现上腹部刀绞样痛和急性腹泻，伴有e心、呕吐、头痛、发热。病程较短，一般1~3天可恢复，很少有死亡。14、空肠弯曲菌空肠弯曲菌菌体轻度弯曲似逗点状，在暗视野镜下观察似飞蝇。有荚膜，不形成芽胞。最适温度为37～42℃。在正常大气或无氧环境中均不能生长。空肠弯曲菌是多种动物如牛、羊、狗及禽类的正常寄居菌。在它们的生殖道或肠道有大量细菌，故可通过分娩或排泄物污染食物和饮水。人群普遍易感，5岁以下儿童的发病率最高，夏秋季多见。苍蝇亦起重要的媒介作用。亦可经接触感染。感染的产妇可在分娩时传染给胎儿。空肠弯曲菌有内毒素能侵袭小肠和大肠粘膜引起急性肠炎，亦可引起腹泻的暴发流行或集体食物中毒。该菌有时可通过肠粘膜入血流引起败血症和其他脏器感染，如脑膜炎、关节炎、肾盂肾炎等。孕妇感染本菌可导致流产，早产，而且可使新生儿受染。15、蜡样芽孢杆菌芽胞杆菌属中的一种。菌体细胞杆状，末端方，成短或长链，革兰氏阳性。蜡样芽胞杆菌与少数食物中毒有关(约2–5%)，包括一些严重的e心、呕吐以及腹痛。大概来说，杆菌性食物中毒是由于错误地烹调方法造成细菌孢子残留在食物上，更糟糕的是食物被不及时冷冻而让孢子发芽，细菌繁殖的结果是产生肠毒素，人食用含毒素的食物后会产生呕吐、腹泻等不良症状。16、平酸菌平酸菌是引起罐头食品酸败变质而又不胖听（即产酸不产气）的微生物，在罐头工业上称为平酸菌。它是兼性厌氧芽胞杆菌。其广泛分布于土壤，灰尘和各种变质食品中。误食平酸菌导致变质的罐头会造成食物中毒，有腹泻、呕吐等症状。17、耶尔森氏菌耶尔森菌属于肠杆菌科，包括鼠疫耶氏菌、小肠结肠炎耶氏菌与假结核耶氏菌等十余个菌种，这是一类革兰阴性小杆菌。其鼠疫耶氏菌、小肠结肠炎耶氏菌与假结核耶氏菌对人类的致病性已明确，其中鼠疫耶氏菌具有F1、V/W、Pgm、Pst1等重要的毒力因子，毒力很强，少量细菌即可使人致病。本属细菌通常先引起啮齿动物、家畜和鸟类等动物感染，人类通过接触已感染的动物、食入污染食物或节肢动物叮咬等途径而被感染。18、阪崎肠杆菌阪崎肠杆菌是乳制品中近几年新发现的一种致病菌。阪崎肠杆菌能引起严重的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和菌血症，死亡率高达50%以上。目前，微生物学家尚不清楚阪崎肠杆菌的污染来源，但许多病例报告表明婴儿配方粉是目前发现的主要感染渠道。19、蛔虫卵蛔虫卵是通过有虫卵的粪便污染水和食物，人吃喝了这种被污染而未经煮死的虫卵的饮水和食物就会得蛔虫病。控制措施一方面是严控生产工序，另一方面是生活中吃生鲜瓜果时一定要清洗干净。结语由上可见，食用了任何一种上述微生物污染的食品，轻则腹痛、腹泻，重则一命呜呼，可见食品安全无小事。因此，作为生产商，不管是严管原料来源，还是控制生产工序，都容不得我们有半点马虎。

实验室分析结果的可靠性和可信性是一个基本的期望和要求，以反映实验室的实际工作。实验记录要想变得可靠和信赖，必须符合以下条件：1、易读性除了记载宝藏地图的四十二章经和用来记载武功的圣火令上的蝌蚪文，实验记录不得采用人类失传或只有世外高人才能懂的语言书写。不能被读出或理解的记录没有价值并且可能被当废纸扔掉。所有实验记录应当遵循一致的语法规则。坚决避免采用俚语、暗号、吐火文等不易于理解的语言记录。这也是实验记录要引入第二个人进行见证的原因，见证人在这里要行使监督权。2、可归属性任何一份实验记录的创建都要能归属到具体的作者，对于纸质记录而言由个人签署并注明签署日期。你得明白你签署的是一份具有法律效力的文件，也许这份文件在法庭上作为呈堂证供，你应该清楚你的签名和含义。3、实时性所有记录必须在具体活动发生的时间进行撰写。延迟撰写将不可避免地影响到记录的准确性，有人会遗忘一些细节，而有人会产生错误的回忆。4、原始性所有记录必须是第一手的记录，而不能是二次记录。该规定的目的主要是避免在誊抄时引入错误。5、准确性实验室记录必须反映实际发生的事情。任何更改都不应该擦除原始信息，采用修正液进行涂改是绝不允许的。对记录进行修改必须有修改人员的签名和修改日期，及修改理由。6、完整性数据的完整性对于不同的实验类型来说具有不一样的内涵。数据的来源和数据的类型都会对完整性的保持提出不一样的挑战。通常，我们最易于在分析实验室遭遇数据完整性问题，对于样品分析来说，除了样品本身的分析结果，还需要系统适用性测试报告、进样序列、数据处理方法、样品制备过程等。如果样品存在重复进样或重复分析，这些数据也要保留，否则将大大降低样品分析结果的可信度。永远记住"没有记录就等于没有发生"。7、逻辑连贯性这里的逻辑连贯性是指实验室发生的一些列活动应该具有时间上的逻辑性，包括时间上的顺序，空间上顺序。具体到样品分析实验来说，必须有合乎逻辑的先后发生顺序。例如，HPLC的运行在时间上不可能发生在样品准备之前，样品的称量时间与色谱的进样时间应该有几个小时的时间差，以备充足的时间准备样品。因此，所有的日期/时间签署应该符合逻辑，这也是现场核查时专家经常检查的地方。8、不可删除性不可删除性有两方面的意思，一是在记录的生命周期内都要保持清晰可读，二是一旦创建就不能删除。手写记录输入应该用水笔书写，而不是铅笔。如果记录是在热敏纸上打印出来的，随着时间的推移记录会变暗，这时就需要及时地影印，并能确保与原件一致，将影印件附在原件后面。我们在实验室经常看到实验记录本里会粘贴很多打印件，那么在粘贴打印件时也要注意以下两点：使用无酸胶水或工业级的透明胶带签名和日期时应该采用骑缝的方式，即字迹跨越粘贴件和记录本页面。9、可用性所有记录应随时可供检查，审计。如果监管机构要求审核某个文件，我们应做到三十分钟内就能呈递。因此，实验室应当建立归档系统。记录应封存并以保持其完整性，如限制访问的安全设施、有效的防火措施、防止受潮等等。

 实验安全是实验当中永远的主题，实验的操作规则并不是教条，而是真正为了你实验安全设计的一些规定。只有很好的遵守规定，按照规则行事才不会有遗憾之处，整理一些小技巧给大家参考。一、有关实验的操作：固体需匙或纸槽，手贴标签再倾倒。读数要与切面平，仰视偏低俯视高。 试纸测液先剪小，玻棒沾液测蕞hao。试纸测气先湿润，粘在棒上向气靠。 酒灯加热用外燃，三分之二为界限。硫酸入水搅不停，慢慢注入防沸溅。 实验先查气密性，隔网加热杯和瓶。排水集气完毕后，先撤导管后移灯。解释：1、固体需匙或纸槽：意思是说在向试管里装固体时，为了避免药品沾在管口和试管壁上，可试试管倾斜，把盛有药品的药匙（或用小纸条折叠成的纸槽）小心地送入试管的底部，然后使试管直立起来，让药品全部滑落到底部。2、手贴标签再倾倒：意思是说取液体药品时应将瓶上的标签贴着手心后再倾倒（以免倒完药品后，残留在瓶口的药液流下来腐蚀标签）。3、读数要与切面平：仰视偏低俯视高：这句的意思是说取一定量的液体时，可用量筒或移液管（有时，也可以用滴定管），在读数时，应该使视线刻度与液体凹面蕞di点的切线处于同一平面上。否则，如果仰视则结果偏低，俯视则结果偏高。 4、试纸测液先剪小，玻棒沾液测蕞hao：“玻棒”指玻璃棒。意思是说在用试纸检验溶液的性质时，蕞hao先将试纸剪下一小块放在表面皿或玻璃片上，用沾有待测液的玻璃棒点试纸的中部，试纸就会被湿润，观察是否改变颜色，由此，就可以判断溶液的二、过滤操作实验：斗架烧杯玻璃棒，滤纸漏斗角一样。过滤之前要静置，三靠两低不要忘。解释1、斗架烧杯玻璃棒，滤纸漏斗角一样：“斗”指漏斗；“架”指漏斗架。这两句说明了过滤操作实验所需要的仪器：漏斗、漏斗架、烧杯、玻璃棒、滤纸、并且强调滤纸折叠的角度要与漏斗的角度一样（这样可以是滤纸紧贴在漏斗壁上）。2、过滤之前要静置：意思是说在过滤之前须将液体静置一会儿，使固体和液体充分分离。3、三靠两低不要忘：意思是说在过滤时不要忘记了三靠两低。“三靠”的意思是指漏斗颈的末端要靠在承接滤液的烧杯壁上，要使玻璃棒靠在滤纸上，盛过滤液的烧杯嘴要靠在玻璃棒上；“两低”的意思是说滤纸边缘应略低于漏斗的边缘，所倒入的滤液的液面应略低于滤纸的边缘。三、蒸馏操作实验：隔网加热冷管倾，上缘下缘两相平。需加碎瓷防暴沸，热气冷水逆向行。解释1、隔网加热冷管倾：“冷管即冷凝管。意思是说：加热蒸馏烧瓶时要隔石棉网（防止蒸馏烧瓶因受热不均匀而破裂），在安装冷凝管时要向下倾斜。2、上缘下缘两相平：意思是说温度计的水银球的上缘要恰好与蒸馏瓶支管接口的下缘在同一水平线上。四、萃取操作实验：萃剂原液互不溶，质溶程度不相同；充分振荡再静置，下放上倒切分明。解释1、萃剂原液互不溶，质溶程度不相同：“萃剂”指萃取剂；“质”指溶质。这两句的意思是说在萃取操作实验中，选萃取剂的原则是：萃取剂和溶液中的溶剂要互不相溶，溶质在萃取剂和原溶剂中的溶解度要不相同（在萃取剂中的溶解度要大于在原溶液中的溶解度）。2、充分振荡再静置：意思是说在萃取过程中要充分震荡，使萃取充分，然后静置使溶液分层。3、下放上倒切分明：这句的意思是说分液漏斗的下层液从漏斗脚放出，而上层液要从漏斗口倒出。五、中和滴定：水液洗器切分明，查漏赶气再调零。待测液中加试剂，左手控制右手动。瓶下垫纸眼观色，读数要与切面平，酚酞示剂常相识，强酸弱碱甲基橙。使用酸式滴定管，不盛碱液切记清。解释1、水液洗器切分明：“水”在此有两种含义，既表示自来水，又表示蒸馏水；“液”在此也有两种含义，既表示标准溶液，又表示待测液。这句的意思是说在做中和滴定实验时，必须先对各种仪器进行清洗，而何时用自来水，何时用蒸馏水，何时用标准液，何时用待测液一定要分清分明。联想：滴定管依次用自来水、蒸馏水、标准溶液洗涤；移液管依次用自来水、蒸馏水、待测液洗涤；锥形瓶先用自来水，然后用蒸馏水洗涤即可，切不可用待测液洗涤！2、查漏赶气再调零：意思是说滴定前应首先检查滴定管是否漏液，然后检查滴定管下端是否有气泡，若有应赶掉它，蕞后调节液面至“0”位。联想：①查漏的方法是在洗净的滴定管中加少量标准溶液。若漏液，对于酸式滴定管应在活塞上涂适量的凡士林，对于碱式滴定管应更换一下玻璃球；②必须赶掉气泡，是因为如果滴定管尖嘴部分有气泡没有赶掉，滴定后气泡消失，则使测定结果偏高；③每次滴定蕞hao都从零位开始，这样可以减少误差。3、待测液中加试剂：“示剂”指指示剂。意思是说在滴定之前要向盛待测液的锥形瓶中加2-3滴指示剂（其作用是借它的颜色的变化，来指示反应的终点）。 4、左手控制右手动：意思是说在滴定时，必须左手控制滴定管，右手持锥形瓶不断摇动。 5、瓶下垫纸眼观色：“瓶下垫纸”的意思是说为了清楚地观察颜色的变化，可以在锥形瓶底下垫一张白纸；“眼观色”的意思是说在滴定过程中要目不转睛地注视着溶液颜色的变化，不要看滴定管的刻度。 6、读数要与切面平：解释参见“化学实验基本操作”。 7、酚酞示剂常相识，强酸弱碱甲基橙：这句的意思是说中和滴定常用酚酞做指示剂，只有强酸滴定弱碱（如，盐酸滴定氨水）时，才能用甲基橙。 8、使用酸式滴定管，不盛碱液切记清：这句的意思是说不能用酸式滴定管盛放碱溶液（因为碱液和玻璃中的SiO2反应生成Na2SiO3而使活塞和滴定管粘在一起）。六、醛的氧化实验 氨水量宜试管净，水浴温热出银镜。液稀碱多升温慢，喜观液中沉淀红。解释 1、氨水量宜试管净，水浴温热出银镜：这句的意思是说明了关于银镜反应实验应注意的问题。“氨水量宜”的意思是说在配制银氨溶液的时候，氨水不能过量，以沉淀恰好溶解为宜；“试管净”的意思是说做银镜反应的试管一定要洁净，否则将不能产生银镜，仅出现黑色絮状沉淀，为此在实验前须用10%的氢氧化钠溶液煮沸处理试管，然后，依次用自来水和蒸馏水洗净；“水浴温热”的意思是说做银镜反应的试管必须放在水浴中温热，切不可直接放在酒精灯上加热。联想：去掉试管上的银镜可用硝酸，这样既可除掉银镜，又可回收银。 2、液稀碱多升温慢，喜观液中沉淀红：这两句说明了用新制的氢氧化铜氧化醛的实验应注意的问题。“液稀”的意思是说所用的硫酸铜溶液、氢氧化钠溶液、乙醛溶液一定要稀；“碱多”的意思是说该实验中碱（氢氧化钠）要过量，而所用的硫酸铜的量一定要少。否则，将得不到红色沉淀，而是得到暗褐色沉淀。这是因为硫酸铜过量，则生成大量的氢氧化铜，过量的氢氧化铜将受热分解生成黑色的氧化铜，而黑色的氧化铜和红色的氧化亚铜的混合色即是暗褐色。七、重要演示实验 氢在氯中苍白焰，磷在氯中烟雾漫；甲烷氢气氯相混，强光照射太危险； 二氧碳中镁条燃，两酸遇氨冒白烟；氯化铵热象升华，碘遇淀粉即变蓝； 硫氢甲烷一氧碳，五者燃烧火焰蓝；铜丝伸入硫气中，硫铁混热黑物生； 热铜热铁遇氯气，烟色相似皆为棕。解释1、氢在氯中苍白焰：意思是说氢气在氯气中燃烧火焰呈苍白色（瓶口产生大量的酸雾）。 2、磷在氯中烟雾漫：意思是说磷在氯气中燃烧产生白色烟雾，白色烟雾是生成的无色液体三氯hua磷和白色固体五氯hua磷的混合物。3、甲烷氢气氯相混，强光照射太危险：这两句的意思是说甲烷与氯气混合或氢气与氯气混合在强光的照射下会发生危险。 4、二氧碳中镁条燃：“二氧碳”指二氧化碳：意思是说镁条可以在二氧化碳中燃烧。将点燃的镁条放入盛有二氧化碳的集气瓶里，镁条剧烈燃烧，生成白色氧化镁粉末，同时析出炭黑附着在集气瓶内壁上，反应式是：2Mg+CO2=2MgO+C。 5、两酸遇氨冒白烟：“两酸”指浓盐酸和浓硝酸。意思是说浓盐酸和浓硝酸与氨相遇将产生白烟。这白烟是氨跟浓盐酸（浓硝酸）挥发出来的氯化氢（硝酸）化合生成的微小的氯化铵（硝酸an）晶体。反应式为：NH3+HCI=NH4CI，NH3+HNO3=NH4NO3。 6、氯化铵热象升华：意思是说在试管里加热氯化铵晶体，则氯化铵分解为氨和氯化氢气体，在管口冷却时又重新结合生成氯化铵固体，这个现象表面上象升华，但本质上不是升华。因为升华是物理变化，而氯化铵在分解结晶过程中发生的却是化学变化。 7、碘遇淀粉即变蓝：意思是说碘遇到淀粉就变成蓝色，常用此性质鉴别微量的碘或淀粉。 8、硫氢甲烷一氧碳，五者燃烧火焰蓝：“硫氢”在此有三种含义：指硫、氢气和硫化氢；“一氧碳”指一氧化碳。这句的意思是说硫、氢气、硫化氢、甲烷和一氧化碳这五种物质燃烧时都产生淡蓝色的火焰。联想：氢气、甲烷、一氧化碳的鉴别。虽然，它们都是无色气体，而且点燃火焰都是淡蓝色，但是可以根据不同的化学性质进行区别开来。方法是在火焰的上方罩一个烧杯，然后将烧杯倒转过来加入澄清的石灰水。只有水珠生成但不能使石灰水变混浊的是氢气；不仅有水珠生成，而且能使澄清的石灰水变混浊的是甲烷；没有水生成，能使石灰水变混浊的是一氧化碳；没有水珠生成不能使石灰水变混浊，而生成的气体有刺激性气味的则是硫化氢。9、铜丝伸入硫气中，硫铁混热黑物生：这句的意思是说将铜丝伸入热的硫蒸气中，硫粉和铁粉混合加热都发生反应生成黑色物质（Cu2S和FeS）。 10、热铜热铁遇氯气，烟色相似皆为棕：这两句的意思是说把一束灼热的铜丝和铁丝放进盛有氯气的集气瓶里，可以看到红热的铜丝或铁丝在氯气中燃烧起来，集气瓶里充满了棕色的烟，这是氯化铜或氯化铁晶体颗粒。联想：待集气瓶冷却后加入蒸馏水，产生绿色溶液的是氯化铜，产生棕色溶液的是氯化铁。八、卤族元素及其化合物 氯气有毒刺激性，闻氯用手轻扇动。热铜热铁遇氯气，烟色相似皆为棕。氢在氯中苍白焰，磷在氯中烟雾漫。甲烷氢气氯相混，强光照射太危险。氯水消毒又漂白，作用原理次氯酸。消石灰氯漂白粉，用时常通二氧碳，二氧化锰盐酸逢，隔网热瓶氯气生。盐水硫酸除杂质，吸收通入火碱中。 硫酸食盐瓶中热，漏斗吸收氯化氢。 工业电解食盐水，阴阳产物化合成。 烧瓶干燥气密好，气体充满切记牢。 挤压胶头要迅速，红色喷泉多妖娆。 氟氯溴碘四元素，颜色渐深气变固。 半径密度渐递增，溶点沸点亦上升。 固碘加热能升华，有机剂中溴碘溶。 四位皆求水和氢，条件程度各不同。 上边可把下边换，碘遇淀粉即变蓝。 卤素氧化亚硫酸，硫化氢中把硫换。 莹石硫酸氟化氢，切记应在铅皿中。 氢溴碘酸真刁难，不用硫酸用磷酸。 氯溴碘和磷酸根，加酸再加硝酸银。 卤化银光易分解，照相降雨铭记心。                    解释1、氯气有毒刺激性，闻氯用手轻扇动：这两句的意思是说氯气有毒，有剧烈的刺激性（吸入少量氯气会使鼻和喉头的粘膜受到刺激，引起胸部疼痛和咳嗽，吸入大量氯气会中毒而死），闻氯气的时候，必须十分小心，应该用手轻轻地在瓶口扇动，仅使极少量的氯气飘进鼻孔。2、氯水消毒又漂白，作用原理次氯酸：这两句的意思是说氯气能溶解于水（1体积的水能溶解约2体积的氯气），氯气的水溶液叫氯水，氯气能跟水发生化学反应，生成盐酸和次氯酸（CI2+ H2O = HCI +HCIO），次氯酸是一种强氧化剂，能杀死水里的病菌，所以自来水常用氯气（1升水里约通入0.002克氯气）来杀菌消毒。次氯酸能使染料和有机色质退色，可用作漂白剂。 3、消石灰氯漂白粉：意思是说消石灰和氯气反应可制成漂白粉（漂白粉是次氯酸钙和氯化钙的混合物，它的有效成分是次氯酸钙），反应式为：2Ca（OH）2+2Cl2=Ca（ClO）2+CaCl2+2H2O。 4、用时常通二氧碳：“二氧碳”指二氧化碳，意思是说用漂白粉漂白的时候常通入空气里的二氧化碳和水蒸气，反应式为Ca（ClO）2+CO2+H2O=CaCO3↓+2HClO。联想：次氯酸是弱酸，比它强的酸都能把它从盐中置换出来，如，Ca（ClO）2+2HCl=CaCl2 +2HClO。 5、硫酸食盐瓶中热，漏斗吸收氯化氢：这两句的意思是说在实验室中是用浓硫酸跟食盐在烧瓶中加热的方法制取氯化氢。吸收氯化氢要在水面倒扣一个漏斗，既可以使氯化氢被充分吸收，又不会发生倒吸现象。 6、氟氯溴碘四元素，颜色渐深气变固：意思是说这四种元素的单质的颜色是逐渐变深的，状态是由气态变到固态（氟是淡黄绿色气体、氯是黄绿色气体、溴是红棕色液体、碘是紫黑色固体）。7、半径密度渐递增，溶点沸点亦上升：意思是说这四种元素的的原子半径、离子半径、及其单质的密度是逐渐增大的，熔点和沸点也逐渐升高。联想：组成和结构相似的物质随着分子量的增大，分子间的作用力也增大，表现在熔点和沸点的升高上，如有机物中的同系物。 8、固碘加热能升华：意思是说固体碘在加热时能发生升华现象。联想：常利用碘的这个特性把碘从其它物质中分离出来。9、有机剂中溴碘溶：意思是说溴和碘易溶解于有机溶剂中，如：汽油、苯、四氯化碳、酒精等。 联想：①医疗上用的碘酒就是碘的酒精溶液；②利用这个性质还可以把溴和碘从其它物质中萃取出来。 10、四位皆求水和氢，条件程度各不同：这两句的意思是说氟氯溴碘都能跟水和氢气反应，但是需要的条件和反应的程度各不相同。 11、上边可把下边换：意思是说卤族元素中，排在上边的能把排在下边的从盐中置换出来，如：2NaCl+F2=2NaF，2NaBr+Cl2=2NaCl+Br2，2NaI+Br2=2NaBr+I2。 12、碘遇淀粉即变蓝：意思是说碘遇到淀粉就变成蓝色，常用此性质鉴别微量的碘或淀粉。 13、卤素氧化亚硫酸，硫化氢中把硫换：意思是说卤素（X2）都能把亚硫酸氧化成硫酸，都能置换出硫化氢中的硫。反应式为：H2SO3+X2+H2O=H2SO4+2HX，H2S+X2=2HX+S。14、莹石硫酸氟化氢，切记应在铅皿中：意思是说在实验室中是用莹石跟硫酸在铅皿中反应制取氟化氢，反应式为：CaF2+H2SO4=CaSO4+2HF↑联想：不能用玻璃仪器，是因为氟化氢能腐蚀玻璃：4HF+SiF4=SiF4+2H2O。 15、氢溴碘酸真刁难，不用硫酸用磷酸：意思是说制备qin溴酸和氢dian酸时，不能用浓硫酸，而必须用磷酸，反应式为：NaBr+H3PO4=HBr↑+NaH2PO4；NaI+H3PO4=HI↑+NaH2PO4联想：因为，浓硫酸具有强氧化性，可把生成的HBr和HI氧化Br2和I2；反应式为：2HBr+H2SO4=SO2↑+Br2+2H2O，2HI+H2SO4=SO2↑+I2+2H2O。 16、氯溴碘和磷酸根，加酸再加硝酸银：“氯溴碘”在此指CI-、Br-、I-。这两句的意思是说CI-、Br-、I-和PO43-的鉴别方法是分别加稀硝酸然后再加硝酸银。有白色沉淀生成者则是CI-、有淡黄色沉淀生成者则是Br-、有黄色沉淀生成者I-、无沉淀生成者为PO43-（这是因为PO43-和Ag+也能生成类似AgI的黄色沉淀Ag3PO4，但是它可溶解于稀硝酸中）。 17、卤化银光易分解，照相降雨铭记心：意思是说：卤化银见光都易分解，故有两大用途：一是在照相业做感光材料；二是用于人工降雨。九、烷烃的命名碳链蕞长称某烷，靠近支链把号编。简单在前同相并，其间应划一短线。             解释1、碳链蕞长称某烷：意思是说选定分子里蕞长的碳链做主链并按主链上碳原子数目称为“某烷”。 2、靠近支链把号编：意思是说把主链里离支链较近的一端作为起点，用1、2、3。。。等数字给主链的各碳原子编号定位以确定支链的位置。 3、简单在前同相并，其间应划一短线：这两句的意思是说把支链作为取代基，把取代基的名称写在烷烃名称的前面，在取代基的前面用阿拉伯数字注明它在烷烃主链上的位置，而且简单的取代基要写在复杂的取代基前面，如果有相同的取代基，则要合并起来用二、三等数字表示，但是表示相同的取代基位置的阿拉伯数字要用逗号隔开，并在号数后面连一短线，中间用“-”隔开。例如，2，4-二甲基-3-乙基庚烷，2-甲基丁烷；十、乙烯硫酸乙醇三比一，温计入液一百七；迅速升温防碳化，碱灰除杂蕞合适。乙烯分子含双键，氧化加成皆不难；高锰酸钾紫红去，卤素氢气氢卤酸。乙烯聚合好塑料，燃焰明亮出黑烟；乙烯水化制乙醇，氧化得醛又得酸。解释：1、乙烯分子含双键，氧化加成皆不难：这两句的意思是说因为乙烯中含有双键，所以易被氧化，也都能发生加成反应。2、高锰酸钾紫红去：意思是说乙烯可以使酸化的高锰酸钾溶液退色。3、卤素氢气氢卤酸：意思是说乙烯可以跟卤素、氢气、氢卤酸发生加成反应。4、乙烯聚合好塑料：意思是说乙烯聚合，可得到好的塑料聚乙烯。5、燃焰明亮出黑烟：意思是说乙烯燃烧火焰明亮而且产生黑烟。6、乙烯水化制乙醇：意思是说乙烯在一定条件下跟水反应生成乙醇。7、氧化得醛又得酸：意思是说乙烯在催化剂作用下被氧化得到乙醛，乙醛进一步被氧化又得到乙酸。十一、常见化学药品的贮存硝酸固碘硝酸银，低温避光棕色瓶；液溴氨水易挥发，阴凉保存要密封。白磷存放需冷水，钾钠钙钡煤油中；碱瓶需用橡皮塞，塑铅存放氟化氢。易变质药放时短，易燃易爆避火源；实验室中干燥剂，蜡封保存心坦然。解释：1、硝酸固碘硝酸银，低温避光棕色瓶：意思是说硝酸、固体碘和硝酸银都属于受热见光易分解的物质，所以必须存放在棕色瓶里，并放在阴凉处。2、碱瓶需用橡皮塞：意思是说盛放碱液的试剂瓶要用橡皮塞。3、塑铅存放氟化氢：意思是说氟化氢（氢氟酸）易腐蚀玻璃，因而必须存放在塑料或铅制器皿中。4、易变质药放时短：意思是说易变质的药品存放时间较短，即，不能长久贮存，蕞hao现用现配制。联想：常见易变质的药品有：①  氢硫酸放久了，则大部分将挥发，部分被空气氧化；②  氯水长期存放将因慢慢分解而失效；③  亚铁盐长期存放，则易被氧化为铁盐；④酸化的高锰酸钾溶液长期存放则慢慢退色。5、易燃易爆避火源：意思是说易燃物质（如，二硫化碳、酒精、丙酮、苯、硫、磷、镁粉等）和易爆炸的物质（如，lv酸钾、硝酸an等）存放时要远离火源。6、实验室中干燥剂，蜡封保存心坦然：意思是说实验室中用的干燥剂极易吸水，因而要用蜡封保存。

危险化学品的安全要求1.使用危险化学品的单位，其使用条件（包括工艺）应当符合法律、行政法规的规定和国家标准、行业标准的要求，并根据所使用的危险化学品的种类、危险特性以及使用量和使用方式，建立、健全使用危险化学品的安全管理规章制度和安全操作规程，保证危险化学品的安全使用。2.使用危险化学品从事生产并且使用量达到规定数量的化工企业，应当取得危险化学品安全使用许可证。危险化学品使用量的数量标准，由国务院安全生产监督管理部门会同国务院公安部门、农业主管部门确定并公布。3.申请危险化学品安全使用许可证的化工企业，应当具备下列条件：（1）有与所使用的危险化学品相适应的专业技术人员；（2）有安全管理机构和专职安全管理人员；（3）有符合国家规定的危险化学品事故应急预案和必要的应急救援器材、设备；（4）依法进行了安全评价。3.申请危险化学品安全使用许可证的化工企业，应当向所在地设区的市级人民政府安全生产监督管理部门提出申请，并提交证明材料。设区的市级人民政府安全生产监督管理部门应当依法进行审查，自收到证明材料之日起45日内作出批准或者不予批准的决定。予以批准的，颁发危险化学品安全使用许可证；不予批准的，书面通知申请人并说明理由。安全生产监督管理部门应当将其颁发危险化学品安全使用许可证的情况及时向同级环境保护主管部门和公安机关通报。对于实验室来讲，主要是使用要求，具体的大家可以参考《危险化学品安全管理条例》

培养基为什么出现沉淀？自己购买干粉培养基配制后，总是会出现沉淀的现象。现总结可能是以下几种原因。一、称量错误天平称量不准确、计算称量错误导致配制培养基的浓度不正确，都有可能导致岀现部分沉淀。二、水质不佳多数培养基的制备需要使用纯化水、去离子水配制，而天然水中含有含有较多的矿物盐离子，若错误的使用了自来水，矿泉水配制，或使用的纯化水离子未除净，都有可能导致培养基灭菌后岀现浑浊现象或沉淀（磷酸盐含量高的培养基更易出现此类问题。三、培养基pH不正确偏酸或偏碱的pH有可能使培养基中的部分金属离子产生沉淀。四、容器不干净新开封的容器或容器清洗不干净，内壁留有杂质，都会导致灭菌后的培养基中有杂质出现。五、培养基本身有沉淀培养基配方中无机盐成分较多，或培养基本身含有不溶性成分，灭菌后会有沉淀存在，此为正常现象，不影响使用。例如MC、TTB、BS等，配方中含有不溶物，灭菌后有沉淀。六、溶解不充分培养基灭菌前应充分搅拌热至完全溶解，方可进行灭菌。若灭菌前未将培养基溶解完全就进行灭菌处理，灭菌后易出现絮状或团块状沉淀，如 Fraser培养基含有大量磷酸盐，若灭菌前未进行充分溶解，灭菌过程中磷酸盐易结成块灭菌后不溶解。七、灭菌方式不正确或灭菌过度含有不耐热成分的培养基，若灭菌过度或加热过度，都有可能导致灭菌后的培养基颜色不正确或岀现沉淀。如亚硒-酸氢钠胱氨酸増菌液(SC)，正常制备好的培养基应为淡黄色透明液体，澄凊无沉淀，若加热过度则培养基中亚硒-酸氢钠分最终制备的培养基会出现红色沉淀。八、添加剂加入时温度不正确卵黄、血液等对温度敏感的添加成分，若加入时温度过高或温差过大，易岀现凝块或絮状沉淀。

生物安全柜在致病菌检测过程中起着至关重要的作用，本文为大家提供了生物安全柜操作规程的制定思路，希望对大家工作有所帮助！1、安全柜应放置于十万级以下的初级净化间。操作前应打开紫外灯，照射30min，后将本次操作所需的全部物品移入安全柜，避免双臂频繁穿过气幕破坏气流；并且在移入前用75%酒精擦拭物品表面消毒，以去除污染。2、打开风机10min，待柜内空气净化并气流稳定后再进行实验操作。将双臂缓缓伸入安全柜内，至少静止2min，使柜内气流稳定后再进行操作。3、生物安全柜内不放与本次实验无关的物品。物品应尽量靠后放置，不得挡住气道口，以免干扰气流正常流动。4、操作时应避免交叉污染。为防止可能溅出的液滴，应准备好75%的酒精棉球或用消毒剂浸泡的小块纱布，避免用物品覆盖住安全柜的格栅。5、在实验操作时，不可完全打开玻璃视窗，应保证操作人员的脸部在工作窗口之上。在柜内操作时动作应轻柔、舒缓，防止影响柜内气流。6、安全柜应定期进行检测与保养，以保证其正常工作。工作中一旦发现安全柜工作异常，应立即停止工作，采取相应处理措施，并通知质量部经理。7 、检验完成后，关闭玻璃视窗，保持风机继续运转10min，同时打开紫外灯，照射30min。8、安全柜应定期进行清洁消毒，可用75%酒精或0.2%新洁尔灭溶液擦拭工作台面及柜体外表面；每次检验工作完成后应全面消毒。9、柜内使用的物品应在消毒缸消毒后再取出，以防止将标准菌株残留带出而污染环境，造成生物危害。10、使用方法：10.1安全柜采用LED液晶面板控制，控制面板包括的功能键有：电源开关键、杀菌灯键、风挡键（快速、慢速、无风）、照明键。10.2插上220V交流电源后，按下控制面板上的所示电源开关开启即可使用；需要灭菌时，按灭菌灯键；风挡键有三级（快速、慢速、无风）循环，默认为无风，按一次为慢速，再按为快速，第三次则回到无风，如此循环；平时操作照明，只需按照明键即可。11 设备的维护保养：11.1每次检验操作后用75%的酒精（其他杀菌剂视用户使用的材料而定）彻底对安全柜内部工作区域表面、侧壁、后壁、窗户进行表面净化。切勿使用含有氯的杀菌剂，因为它可能对安全柜的不锈钢结构造成损坏。同时对紫外灯和电源输出口表面进行清洁。当清洁安全柜内部区域时，操作人员除了手放以外，身体的其他任何部位不能进入安全柜。11.2长时间未实验时也得每两周进行清洁维护，按5.1进行，定期清洁不锈钢表面会使之保持表面的光滑美观。11.3每月用湿布对安全柜外部表面进行擦拭，尤其是安全柜的前面和上部，把堆积的灰尘打扫干净。并检查所有的维护配件的合理使用情况。11.4根据实际情况，每个季度或者半年检查安全柜的任何物理异常或故障，如有异常及时报修；将初效过滤器拆下清洗，防止积尘将导致进风量不足，而降低洁净效果。11.5每年请具备资格的认证技术人员对安全柜进行性能认证，依据紫外灯使用寿命效果，进行紫外灯的更换；当正常调节或清洗初效空气过滤器后，仍达不到理想的截面风速时，则应调节风机的工作电压（旋动旋钮），从而达到理想的均匀风速（将调节风速旋钮从左向右，从低速向高速缓慢调节，新工作台不应调至最高风速）。11.6在使用十八个月后当风机工作电压调整至最高点时，仍不能达到理想风速时，则说明高效空气过滤器积尘过多（滤料上滤孔已基本被堵，要及时更新），一般高效空气过滤器的使用期限为十八个月；更换高效空气过滤器时，应注意型号规格尺寸（原生产厂家配置），按箭头风向装置，并注意过滤器的周边密封，绝对无渗漏现象发生。

一、目的：建立培养基适用性检查操作规程，保证培养基的质量，确保检验结果的准确性。二、适用范围：本规程规定了培养基适用性检查方法和操作要求，适用于微生物实验室计数用培养基、控制菌检查用培养基的适用性检查。三、内容：1、简述1.1 培养基适用性检查试验可用于确定实验室所使用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基、按处方自行配制培养基所用不同批次的原材料等)、制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查要求。1.2 计数用培养基适用性检查包括需氧菌、霉菌及酵母菌总数计数。1.3 控制菌检查用培养基适用性检查包括促生长能力、抑制能力及指示特性的检查。2 计数用培养基适用性检查微生物限度检查中计数用培养基有5种，胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、R2A琼脂培养基、平板计数培养基。2.1 培养基及配制2.1.1 培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂对照培养基；沙氏葡萄糖琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂对照培养基；R2A琼脂培养基、R2A琼脂对照培养基；平板计数培养基。2.1.2 配制：照《培养基配制标准操作规程》配制。2.2 试剂及稀释剂配制2.2.1 试剂：pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、聚山梨酯80、氯化钠。2.2.2 稀释剂配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：称取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液14.63g,加水1000mL溶解，分装，灭菌（121℃、15min）。0.05％（mL/mL）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取已经灭菌好的聚山梨酯80（1mL），加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，摇匀，即得。0.9％无菌氯化钠溶液：称取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000mL，分装，灭菌（121℃、15min）。3 试剂及消毒液配制3.1 试剂新洁尔灭溶液、84消毒液、苯酚、75％医用消毒酒精。3.2 消毒液配制3.2.1 84消毒液：取84消毒液1ml，加水60ml(1：60)，摇匀即得。3.2.2 0.1％新洁尔灭溶液：取新洁尔灭溶液20.4ml，加水至1000ml，摇匀，即得。3.2.3 5％的苯酚溶液：称取苯酚5g，加水至100ml,摇匀，即得。3.2.4 75％酒精棉球：取灭菌脱脂棉撕成小块并揉捏成团，置于广口瓶内，加入75% 医用消毒酒精，充分浸润，即得。4 试验用菌株及菌液制备4.1 试验用菌株金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）［CMCC(B)26003］铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）［CMCC(B)10104］枯草芽孢杆菌（Bacillus s aureus）［CMCC(B)63501］白色念珠菌（Candida albicans）［CMCC(F)98001］黑曲霉（Aspergillus niger）［CMCC(F)98003］4.2 菌液制备4.2.1 仪器与用具仪器：生化培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（20～25℃）、恒温水浴锅。?用具：酒精灯、打火机、吸耳球、试管架、大试管（20×200mm、15×200mm）、锥形瓶、硅胶塞、刻度吸管（1mL、2mL、5mL/10mL）、吸管桶、接种环、培养皿（90mm）、不锈钢培养皿桶、不锈钢吸管桶、玻璃专用笔。5 菌液制备方法5.1 金黄色葡萄球菌菌液制备方法5.1.1 用无菌接种取金黄色葡萄球菌斜面中底部菌落一环，在装有pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10mL的试管内壁上轻轻摩擦，使环上的菌苔全部洗于溶液中，振摇混匀。5.1.2 用1ml无菌吸管吸取上述均匀菌液0.1mL加入装有9.9mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的试管中，混匀，作为10-1级。5.1.3 以此类推，10倍递增稀释至每1ml含菌数不大于100cfu的菌悬液，备用。5.2 枯草芽孢杆菌菌液制备方法照金黄色葡萄球菌菌液制备方法同法操作。5.3铜绿假单胞菌菌液制备方法照金黄色葡萄球菌菌液制备方法同法操作。5.4 白色念珠菌菌液制备方法。5.4.1 用无菌接种取白色念珠菌斜面中底部菌落一环，在装有pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml的试管内壁上轻轻摩擦，使环上的菌苔全部洗于溶液中，振摇混匀。5.4.2 用1ml无菌吸管吸取上述均匀菌液0.1ml加入装有9.9ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的试管中，混匀，作为10-1级。5.4.3 以此类推，10倍递增稀释至每1ml含菌数不大于100cfu的菌悬液，备用。5.5 黑曲霉液制备方法5.5.1 取黑曲霉的斜面一支，加入20ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液于上述斜面培养物中，将孢子洗脱。5.5.2 用管口带有薄的无菌棉花的无菌吸管吸出全部孢子悬液，装入另外一支无菌试管中，混匀，作为原液。5.5.3 用1ml无菌吸管从试管中吸取0.1ml至另一支装有9.9mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的试管中，混匀，作为10-1级。5.5.4 以此类推，10倍递增稀释至每1ml含菌数不大于100cfu的孢子悬液，备用。5.6 注意事项5.6.1 每一稀释级，均需制备2个菌数计数平皿。（每一稀释级取2个无菌平皿，每皿接种1ml菌液，铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固后于30～35℃培养箱培养18～24h，计数；白色念珠菌、黑曲霉倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基中，混匀，凝固后于20～25℃培养箱培养96h，计数。5.6.2 每递增一稀释级，必须另换一支吸管。5.6.3 稀释时，吸管插入上一级试管内不低于液面2.5cm，反复吸吹数次。5.6.4 吸液时，应先吸至高于吸管刻度上部少许，然后提起吸管，贴于试管内壁调整液量至刻度，吸管移至下一稀释试管的内壁近液面处（切勿接触液面）缓慢地放出全部试液。5.6.5 所用稀释菌液吸管均需放入装有5％苯酚溶液的消毒缸内，24小时后才能洗涤。5.6.6 菌悬液制备后，若在室温下放置应在2h内使用，若在2～8℃冰箱保存的菌悬液可以在24h内使用。黑曲霉孢子悬液可在2～8℃冰箱保存，在验证过的贮存期内使用。6 计数用培养基的适用性检查6.1 实验操作6.1.1 胰酪大豆胨琼脂培养基接种方法分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌悬液于无菌平皿中，倾注约20ml胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，轻轻摇匀。用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述实验。适用性检查将接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养皿、对照培养皿于30～35℃培养不超过3天；将接种白色念珠菌、黑曲霉的培养皿、对照培养皿于20～25℃培养不超过5天。6.1.2 沙氏葡萄糖琼脂培养基接种方法分别接种不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉的菌悬液于无菌平皿中，倾注约20ml沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，轻轻摇匀。用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述实验。适用性检查将接种白色念珠菌、黑曲霉培养皿、对照培养皿于20～25℃培养不大于5天。6.1.3 R2A琼脂培养基接种方法分别接种不大于100cfu的铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌悬液于无菌平皿中，倾注约20mlR2A琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平板，轻轻摇匀。用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述实验。适用性检查将接种铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养皿、对照培养皿于30～35℃培养不大于3天。6.1.5 平板计数琼脂培养基接种方法分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌悬液于无菌平皿中，倾注约15ml该培养基，每株试验菌平行制备2个平板，轻轻摇匀。用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述实验。适用性检查将接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养皿、对照培养皿于30～35℃培养不超过3天；将接种白色念珠菌、黑曲霉的培养皿、对照培养皿于30～35℃培养不超过5天6.2 观察与计算观察被检培养基上铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌落形态、大小与对照培养基上铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌落形态、大小是否一致。依次计算被检培养基上铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌落平均数与对照培养基上铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆、白色念珠菌、黑曲霉的菌落平均数的比值。6.3 结果与判断若被检固体上的菌落数平均数与对照培养基菌落数平均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致，各菌适用性检查符合规定。若被检固体上的菌落数平均数与对照培养基菌落数平均数的比值低于0.5～2范围，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落不一致，则判断该培养基的适用性查不符合规定。7 控制菌检查用培养基适用性检查控制菌检查用培养基有液体培养基和固体培养基。7.1 培养基及制备培养基：脱水培养基、对照用培养基。制备：照培养基配制规程新鲜配制。7.2 试验用菌株及菌液制备试验用菌株大肠埃希菌（Escherichia coli）［CMCC(B)44102］金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）［CMCC(B)26003］枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCCB(B)63501]铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）［CMCC(B)10104］沙门菌（Salmonella paratyphi B）［CMCC(B)50094］白色念珠菌（Candida albicans）［CMCC(F)98001］7.3 控制菌检查用培养基需要测试的能力及判断指标7.3.1 液体培养基促生长能力检查取不大于100CFU的试验菌分别接种于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度（30～35℃）或（42～44℃）及最短培养基时间下培养。与对照培养基比较，被检培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基变浑浊。指示特性检查取不大于100CFU的试验菌分别接种于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度（30～35℃）或（42～44℃）及最短培养基时间下培养。与对照培养基管比较，被检培养基中试验菌生长情况/指示剂反映情况应与对照培养基一致。抑制能力检查取不大于100CFU的试验菌分别接种于被检培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度（30～35℃）或（42～44℃）及最长培养基时间下培养，试验菌应不得生长。7.3.2 固体培养基促生长能力检查取试验菌液（含菌数不大于100CFU）分别接种于被检培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养温度（30～35℃或（42～44℃））及最短培养基时间下培养。与对照培养基比较，被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。指示特性检查取试验菌液（含菌数不大于100CFU）分别接种于被检培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养温度（30～35℃）或（42～44℃）及最短培养基时间下培养。被检培养基上试验菌的菌落形态特征、菌落颜色及指示剂反应情况应与对照培养基一致。抑制能力检查取试验菌液（含菌数不少于100CFU）分别接种于被检培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养温度（30～35℃）或（42～44℃）及最长培养基时间下培养，试验菌应不得生长。7.4 培养基能力测试列表控制菌检查用培养基适用性检查项目、菌株及判断指标7.5 实验操作7.5.1 胰酪大豆胨液体培养基促生长能力检查接种方法：分别接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌悬液于该培养基中，接种量不大于100cfu，摇匀，培养。用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述实验。适用性检查：30～35℃培养不超过3天。7.5.2 沙氏葡萄糖液体培养基促生长能力检查接种方法：接种白色念珠菌于该培养基中，接种量不大于100cfu，摇匀，培养。用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述实验。适用性检查：20～25℃培养不超过3天。7.5.3 RV沙门菌增菌液体培养基促生长能力检查接种方法：分别接种不大于100cfu的沙门菌于被检培养基和对照培养基中。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h，与对照培养基管比较。抑制能力检查接种方法：分别接种不少于100cfu的金黄色葡萄球菌于被检培养基和对照培养基中。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h，并将被检培养基与对照培养基管比较。7.5.4 麦康凯液体培养基适用性检查促生长能力检查接种方法：分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基中。适用性检查：在42～44℃条件下培养18～24h，与对照培养基管比较。抑制能力检查接种方法：分别接种不少于100cfu的金黄色葡萄球菌于被检培养基和对照培养基中。适用性检查：在42～44℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较。7.5.5 麦康凯琼脂培养基适用性检查促生长能力+指示特性的检查接种方法：用涂布法分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基平板上。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h。7.5.6 木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基促生长能力+指示特性的检查接种方法：用涂布法分别接种不大于100cfu的沙门菌于被检培养基和对照培养基平板上。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h。7.5.7 三糖铁琼脂培养基、指示能力接种方法：用涂布法分别接种不大于100cfu的沙门菌于被检培养基和对照培养基高层斜面上，便进行穿刺。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h。7.5.8 甘露醇氯化钠琼脂培养基促生长能力+指示特性的检查接种方法：用涂布法分别接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌于被检培养基和对照培养基平板上。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h。抑制能力检查接种方法：用涂布法分别接种不少于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基平板上。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h，并将被检培养基与对照培养基比较。7.5.9 溴化十六烷基3甲铵琼脂培养基促生长能力检查接种方法：用涂布法接种不大于100cfu的铜绿假单胞菌于被检培养基和对照培养基平板上。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h，与对照培养基比较。抑制能力检查接种方法：用涂布法分别接种不少于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基平板上。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h，并将被检培养基与对照培养基比较。7.5.10 肠道菌增菌液体培养促生长能力检查接种方法：分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌、铜绿假单胞菌于被检培养基和对照培养基中。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h，与对照培养基管比较。抑制能力检查接种方法：分别接种不少于100cfu的金黄色葡萄球菌于被检培养基和对照培养基中。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h，并将被检培养基与对照培养基管比较。7.5.12 平板计数琼脂培养基促生长能力检查接种方法：用涂布法分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基平板上。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h，并将被检培养基与对照培养基比较。抑制能力检查接种方法：用涂布法分别接种不少于100cfu的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌于被检培养基和对照培养基平板上。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h，并将被检培养基对照培养基比较。7.5.13 念珠菌显色培养基促生长能力检查接种方法：用涂布法分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基平板上。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h，并将被检培养基与对照培养基比较。抑制能力检查接种方法：用涂布法分别接种不少于100cfu的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌于被检培养基和对照培养基平板上。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h，并将被检培养基对照培养基比较。7.5.14 MUG培养基促生长能力+指示特性的检查接种方法：分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基平板中。适用性检查：在30～35℃条件下培养18～24h。8 注意事项8.1 培养基的配制方法和灭菌程序发生变更时，应再次对培养基进行适用性检查。8.2 培养基批号发生变更时，应再次对培养基进行适用性检查。8.3 培养基供应商发生变更时，应再次对培养基进行适用性检查。9 记录每一次进行培养基的适用性检查后在《培养基适应性验证记录》上记录。

标准品（对照品）使用中常见问题，主要包括：1）.对照品含量，2）.储存运输温度，3）.新老批次，4）.产品稳定性5）.残留溶剂对照选择6）.剧毒对照品7）.对照品质量标准和复测一、1.1EP对照品含量问题：Q:我在哪里可以找到测定中使用的化学参考标准的指定含量？A:CRS分析的指定内容在我们的在线目录中提供的说明书中提供，用于定性分析（HPLC，TLC），因此您无法找到标准纯度的信息。其他CRS用于定量分析（测定确定），在这种情况下，标准纯度被公布。如果CRS没有定量内容，则在任何情况下都不应将其解释为含量为100％。 对于含量测定，必须明确指明含量，在任何情况下，用户都不应将其视为100％。但是，当一个杂质对照品用于相关物质检测或控制相应杂质时，如果没有指明含量，则为了估算，则视其为100％。Q:为啥有时候EDQM（EP）对照品的双标签？A：EDQM将要把当前所有标准品的外包装瓶上帖上双层标签，目前已经有大部分产品被换成双层标签了，但还有少数部分还没被贴到，还是单层标签。贴双层标签的目的是为了便于使用者在做实验（特别是做申报）时，把外面的一层标签揭下来贴在所写的实验记录中，以证实这个产品的来源（这里有部分客户看着是双标签误以为是贴牌啥的，这是误解）。Q:EDQM（EP）对照品瓶子和报告批次不完全一致？A：1、EP小批次的情况--在具体情况下，由于填装和贴标等原因，小批次均是由同一批次的大包装原料药提出来的（比如实物瓶子上的批次信息是batch1.1,1.2,1.3等，但是随货COA却是batch 1.0，2.0，3.0，其实是一样的，之前有多次遇到客户提及，故作说明）。二、储存，运输温度差异标准品（对照品）的储存，运输温度有何差异？A：常见的标准品的保存方法有：1.常温保存：通常用于化学性质比较稳定的标准品，建议保存于干燥阴凉的地方。2.+4度冷藏：用于常温下不是很稳定的物质，保存于实验室冷藏箱中（可控温度）。3.-20度冷冻：用于化学性质不稳定，常温下容易分解的物质。4.-80度保存：一些具有生物活性的物质，需要保存于特定的-80度的冰箱。运输条件：相对于长期保存的条件，运输过程由于时间比较短，所以运输条件相对来说要求没有保存条件那么严格。长期保存条件为常温和+4度的标准品都可以在常温条件下运输，-20度保存的标准品在运输时可以放入冰袋来降低温度，而-80度保存的物质则需要在运输时加入干冰。但是干冰的有效时间只能维持1天左右，所以这类型的物质不适合于长途运输。三、标准品（对照品）的新老批次变更：药典标准品如何保证在效期内使用？A:大部分国家药品标准物质不设有效期，而是对现行有效的在售批次进行持续的质量稳定性监测。一旦发现量值不适用，将立即发布停用通知。某品种现售批次的前一批次标准物质，若官方没有发布停用通知或公布有效使用期限，按说明书规定的条件保存，中检院一般在6个月内可以正常使用； EP的可以参考EP在线标准品数据库； USP的通常是在当前批次售完后的3-12个月。对于法定标准品，都建议用户随用随买或根据生产和检验计划来购买，不要事先大量囤积，因为一旦新批号开始对外供应了，将不再对老批号进行质量监测，用户如若继续使用，其特性量值及适用性请自行验证。Q:新批出来了，是不是旧批就不能用了？原则上是，中检院对仓储的在售标准物质进行质量监测，一旦发现量值不适用，将立即在中检院网站发布停用通知。某品种现售批次的前一批次标准物质，若中检院没有发布停用通知或公布有效使用期限，按说明书规定的条件保存，一般在6个月内可以正常使用。建议用户随用随买或根据生产和检验计划来购买，不要事先大量囤积，因为一旦新批号开始对外供应了，我院将不再对老批号进行质量监测，用户如若继续使用，其特性量值及适用性请自行验证。四、标准品（对照品）的稳定性：Q：由于对照品包装规格大，需要反复使用多次才能用完，如何确保产品的稳定性？A：对照品的稳定性，一般而言，来源于监管当局认可机构的对照品，只要是能够按照提供者推荐的贮存条件保存，无需再开展稳定性研究。对于其他来源的对照品，应考虑开展稳定性研究，包括质量标准中对照品使用时需要配制成的溶液稳定性。根据稳定性研究结果及其他研究数据，确认对照品的包装、保存条件、复验期(有效期)；明确是否对包装进行必要的处理，如充氮、密封等；说明对照品使用时特别进行的操作，如是否需要干燥处理及处理条件、可否多次使用等。五、如何选择残留溶剂用对照品？Q：残留溶剂有哪些，怎么确定和分类？A：1.具体可以参考《化学药物有机溶剂残留量研究技术指导原则》[附录] 药物中常见的残留溶剂及限度。2.一般主要从原料药制备工艺（路线，后续溶剂和中间体）和制剂及其临床应用（剂型和给药途径，处方工艺，适应症，剂量和用药周期）来确定溶残。3.目前大致分4类，第一类溶剂（致癌物、疑为人体致癌物或环境危害物的）；第二类溶剂是指有非遗传毒性致癌（动物实验）、或可能导致其他不可逆毒性（如神经毒性或致畸性）、或可能具有其他严重的但可逆毒性的有机溶剂；第三类溶剂是GMP或其他质量要求限制使用，对人体低毒的溶剂；第四类溶剂是指在药物的生产过程中可能会使用到，但目前尚无足够的毒理学资料的溶剂。关于对照品的选择，目前对于溶残对照并未形成普遍的共识，就当前遇到的客户对于溶残对照的认可和采购顺序做个总结：1.药典级对照品（中检所，EP，USP等）2.食品级（主要是食品环境类厂家包括：Dr.E,sigma,accustand,cfw,坛墨，振翔等）3.还有医药杂质对照品厂家（TLC,QCC等）4.蕞后就是一些高纯试剂（TCI，阿拉丁，百灵威，麦克林，泰坦等）六、致突变杂质用剧毒对照品如何购买？Q：致突变杂质用剧毒对照品如何购买？A:1.首先致突变杂质，我们狭义理解为基因毒性杂质，在EDQM有关文献报告里面提到了30多种结构，存在基因毒性可能，其中蕞常见的是N-亚硝胺类和甲基磺酸酯类（明细详见文献）。2.剧毒类对照品首先是化学品，所以应该归属到危险化学品，危险化学品有单独的采购程序，具体参照《危险化学品安全管理条例》。3. 依法取得危险化学品安全生产许可证、危险化学品安全使用许可证、危险化学品经营许可证的企业，凭相应的许可证件购买剧毒化学品、易制爆危险化学品。4.危险化学品生产企业、经营企业销售剧毒化学品、易制爆危险化学品，应当如实记录购买单位的名称、地址、经办人的姓名、身份证号码以及所购买的剧毒化学品、易制爆危险化学品的品种、数量、用途。销售记录以及经办人的身份证明复印件、相关许可证件复印件或者证明文件的保存期限不得少于1年。剧毒化学品、易制爆危险化学品的销售企业、购买单位应当在销售、购买后5日内，将所销售、购买的剧毒化学品、易制爆危险化学品的品种、数量以及流向信息报所在地县级人民政府公安机关备案，并输入计算机系统。简言之：先备案，再找有资质的企业采购，合法合规，规避风险。七、对照品能提供质量标准并定期复检吗？Q：对照品能否提供质量标准？A：对于这个质量标准我们分两部分看，一是药典对照品，参考标准就是各国药典各论。第二就是一些对照品厂家提供的对照，目前来看还没有厂家能提供产品的质量标准，因为目前我们接触的这些对照品，准确的定义叫化学对照品，还不是真正意义上的标准物质，所以大部分厂家现在能做到的就是提供产品的检测方法和条件。Q：对照品会定期复检吗？A：会，一般的复检都是安排在产品效期截止前半年。但是目前很多我们涉及的杂质对照品，经常产品效期还没到，厂家就卖完了，所以基本上很少看到同一个批次有多个复测报告。其次还有一个问题是有些客户采购了杂质对照品，直到效期过了都还没使用完，但是厂家已经卖完了，涉及到产品还能否继续使用的问题同时也反馈了厂家的产品稳定性研究工作的问题。

微生物培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，微生物培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。为了达到特定要求的研究，需要进行培养基配制和灭菌，那么微生物培养基该如何配制与灭菌呢?1.配制溶液向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分，对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。2.调节pH值用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。3.过滤用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。4.分装已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升(1/4～1/3试管高度)，如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。5.加棉塞分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。6.制作斜面培养基和平板培养基培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条,厚度为1厘米左右，将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。

微生物菌种菌剂有很多种分类，按微生物菌种菌剂中特定的微生物大致可以分为细菌、放线菌（比如抗生菌）、真菌（如菌根真菌类）、固氮蓝藻菌等。当然，还可以按微生物菌种菌剂的作用机理等进行分类。微生物菌种菌剂是一种含有活微生物的特定制品，以微生物生命活动的过程和产物来改善作物营养件，发挥土壤潜在肥力，刺激作物生长发育，抵抗各种病虫害，从而提高作物产量和品质。它并不像一般的肥料那样，可以直接给作物提供养料物质。1、按微生物菌种菌剂制品内含物可分为单纯的微生物菌剂和复合(或复混)微生物菌剂等.例如,鹤壁人元生物微生物菌剂属于真菌菌剂,固氮类菌剂和复合微生物菌剂。2、按微生物菌种菌剂制品中特定的微生物种类分为细菌菌剂、放线菌菌剂(如抗生菌类)、真菌菌剂(如菌根真菌类)、固氮蓝藻菌剂等；3、按微生物菌种菌剂作用机理分为根瘤菌类菌剂、固氮菌类菌剂、解磷菌类菌剂、解钾菌类菌剂；微生物菌剂的作用主要是与营养元素的来源和有效性有关,或与作物吸收营养、水分和抗病有关,总的来说以下几个方面：1、增进土壤肥力：这是微生物菌剂的主要功效，可以改善土壤团粒结构，增强土壤的物理性能和保护植物根免受病原微生物的入侵和土壤颗粒的损失。2、制造和协助农作物吸收营养。3、增强植物抗病和抗旱能力。微生物菌种菌剂在作物生长所需的养分有着举足轻重的地位，不仅为作物提供了生长所需的各种养分，微生物菌种菌剂也起到了抵抗病虫害的作用。

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。鉴于HPLC在全行业运用越来越广泛，因此每一个实验室分析人员都应该熟练掌握并应用HPLC，对于一些常见的故障分析应该做到游刃有余，才能在运行故障的时候即使解决问题，提高工作效率。为此小编整理了常见HPLC故障及对策分析方案，不要错过哦。1、保留时间发生漂移或快速变化原因？关于漂移问题：① 温度控制不好，解决方法是采用恒温装置， 保持柱温恒定；② 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 ；③ 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。关于快速变化问题① 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定；② 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出；③ 流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。2、出现拖尾或双峰的原因？① 筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子；② 存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子；改换流动相或更换选择性好的柱子 ；③ 可能柱超载，减少进样量。3、HPLC柱验收测试时柱压过高为什么？柱压过高是HPLC柱用户蕞常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。① 拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保 护柱的问题，若柱压仍高，再检查；② 把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降， 否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；③ 将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查；只用于使用过的柱子。④ 更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。4、为何出现鬼峰？①进样阀残余峰－－每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗；②样品中未知物－－处理样品；③柱未平衡－－重新平衡柱,用流动相作样品溶剂（尤其是离子对色谱）；④三氟乙酸（TFA）氧化－－每天新配,用抗氧化剂 ；⑤水污染（反相）－－通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水 。5、为何出现峰拖尾？①柱超载——降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相 ；②峰干扰——清洁样品,调整流动相；③硅羟基作用——加三乙胺,用碱致钝化柱,增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值,纯化样品 ；④柱内烧结不锈钢失效——更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品 ；⑤柱塌陷或形成短路通道——更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件；⑥死体积或柱外体积过大——连接点降至蕞低,对所有连接点作合适调整,尽可能采用细内径的连接管 ；⑦柱效下降——用较低腐蚀条件,更换柱,采用保护柱。6、除了流速外，还有哪些因素能引起压力改变？改变流动相组成和温度；改变柱长、柱内径和填料粒度；柱突然阻塞压力升高（正常情况下其它条件不变柱压都是逐渐升高的）。7、怎样才会使峰位发生重排？在分析多组分样品时，仅改变流动相的强度（组成百分比）而不改变其组成，一般仅仅改变所有组分的保留时间，不会发生峰位的重排。下列条件改变可能发生峰位重排：流动相中换了强溶剂；PH值的改变；柱填料的改变；柱温的改变；流动相的组成改变（如加入离子对试剂三乙基胺等）。8、除了在线脱气，常用的实验室脱气方式还有哪些？加热回流脱气，脱气效果蕞佳，但无法保持；氦脱气，此方法脱气效果佳，能除去百分之九十以上的空气，但氦气价格太贵，所以用的不多；真空脱气，效果仅次于氦脱气，但脱气过程中容易造成样品溶液挥发损失；超声脱气，只能脱去约百分之三十的空气，但在实验室中蕞常用。目前还是尽量争取用在线脱气，方便且效果好。

在药物行业中，关于对照品和标准品我们并不陌生，但有些文献中常常会混淆对照品和标准品，认为对照品等同于标准品，其实不然，它们是两种不同的概念，那么接下来我们先来了解一下对照品和标准品的含义吧！一、定义标准品——一般是用于生物测定、抗生素或者生物类药品进行含量测定、检测的标准物质。对照品——从字面上来看，就是鉴别、检查以及含量测定、修正检定仪器性能的标准物质。当同种药物所需测定方法不同，那么选择的对照品还是标准品就会有所不同，比如非那西丁需要借助熔点来校准物质时，就会选择熔点标准品，而测定含量时，选择使用的就是对照品，故而同一物质需要对照品还是标准品，是由测定需求所决定的。二、标准品、对照品种类生物制品标准物质分为二类：国家生物标准品系指用国际标准品标定的，或我国自行研制的用于定量测定某一制品效价或毒性的标准物质，其生物活性以国际单位(IU)或以单位(U)表示。国家生物参考品系指用国际参考品标定的，或我国自行研制的用于微生物(或其产物)的定性鉴定或疾病诊断的生物试剂、生物材料或特异性抗血清或指用于定量检测某些制品的生物效价的参考物质，如用于麻疹活疫苗滴度或类毒素絮状单位测定的参考品，其效价以特定活性单位表示，不以(IU)表示。三、对照品和标准品能否混用？一般情况下，对照品和标准品测量的方向不同，所以会进行区分测定，但在现实生活中，对于对照品和标准品混用是药物检验中也是常有的事情，因为同一批对照品不同标定方法的含量有很好的相关性，也并不完全相同，有时差别会很大。那么什么情况下会存在对照品和标准品混用呢？情况一：在日常科研中几乎找不到相应的对照品，故而科研人员会选择标准品替代对照品，长此以往自然而然就混淆了对照品和标准品。情况二：卫生部所提供不够详尽的对照品说明书，尤其是在关键部分并没有提出对对照品质量要求以及标定方法的介绍，令人们在使用标准品和对照品出现了混淆的情况。情况三：使用对照品或标准品的人们对于它们并没有正确的认识，在不充分了解的情况下容易导致出现混用对照品和标准品。情况四：中国药典正文中也存在对照品混用的情况，比如含量测定的标准品或对照品用来检查溶出度，而含量测定的方法和溶出度分析方法又不同，所以容易引起混用。