相同之处：（1）都需生成翻译起始复合物；（2）都需多种起始因子参加；（3）翻译起始的第一步都需核糖体的大、小亚基先分开；（4）都需要mRNA和氨 酰- tRNA结合到核糖体的小亚基上；（5）mRNA在小亚基上就位都需一定的结构成分协助。（6）小亚基结合mRNA和起始者tRNA后，才能与大亚基结 合。（7）都需要消耗能量。不同之处：（1）真核生物核糖体是80S（40S+60S）；eIF种类多（10多种）；起始氨酰- tRNA是met- tRNA（不需甲酰化），mRNA没有SD序列；mRNA在小亚基上就位需5′端帽子结构和帽结合蛋白以及eIF2；mRNA先于met-tRNA结合到 小亚基上。（2）原核生物核糖体是70S（30S+50S）；IF种类少（3种）；起始氨酰- tRNA是fmet- tRNA（需甲酰化）；需SD序列与16S-tRNA配对结合，rps-1辩认识别序列；小亚基与起始氨酰-tRNA结合后，才与mRNA结合。

分析方法无法重现主要是有下列几个原因：1.测试环境因素；测试环境主要是有温度、湿度、震动等方面。最为常见的实例就是一些校正因子，南北方往往做出来的结果不同。当然这些影响需要结合我们供试品性质具体分析了，找出关键影响因素2.关键试剂；目前市场上试剂的质量参差不齐，不同品牌的试剂同一条件做出来的实验结果不同，这种案例太多了。例如很多进口试剂做液相方法走出来的干扰峰少。3.仪器设备影响；不同仪器的精度和检测范围有差别，所以做出来的结果也会有差异。例如安捷伦低压四元泵和高压二元泵对于某些化合物的分离度会有区别。4.检测参数差异；对于色谱分析，这个参数影响比较大的是色谱柱。很多文献仅提供了色谱柱的填料类型没具体规定具体厂家、填料键合相、规格等具体信息，所以造成很多方法无法重现。5.操作人员水平；操作人员熟练程度不同、操作方式不同、个人习惯不同都会导致方法无法重现。例如：①液相分析对于等度条件，流动相泵混合和手动混合方式不同做出来的结果也会有差异；②配制混合流动相混合和抽滤顺序不同也会造成实验结果不同。6.供试品性质不同。很多文献我们查询的被测物的工艺和我们供试品的不同，所以供试品体系也会有差异，这样也会造成分析方法无法重现。

霉菌平板计数法的样品稀释分为固体，半固体，液体样品三种状态，稀释流程如下：1.固体和半固体样品：称取25g样品，加入225ml无菌稀释液(蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液)，充分振摇，或用拍击式均质器拍打1min~2min，制成1∶10的样品匀液。2.液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL无菌稀释液(蒸馏水或生理盐水或磷酸盐缓冲液)的适宜容器内(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)或无菌均质袋中，充分振摇或用拍击式均质器拍打lmin~2min，制成1∶10的样品匀液。3.取1mL，1∶10样品匀液注入含有9mL无菌稀释液的试管中，另换一支1mI无菌吸管反复吹吸，或在旋涡混合器上混匀，此液为1∶100的样品匀液。4.按3操作，制备10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1支lmL无菌吸管。5.根据对样品污染状况的估计，选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)，在进行10倍递增稀释的同时，每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取lmL无菌稀释液加入2个无菌平皿作空白对照。6.及时将20mL~25mL冷却至46℃的马铃薯葡萄糖琼脂或孟加拉红琼脂(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。置水平台面待培养基完全凝固。稀释以后，开始培养琼脂凝固后，正置平板，置28℃±1℃培养箱中培养，观察并记录培养至第5d的结果。

质控样，一般是实验室用来检验曲线做的是否标准用的，他是一个已知浓度的样品且浓度有正负误差，比如砷质控样浓度为3.240±0.012毫克/升。你将他带入你的曲线进行分析，看得出的数据是否在质控样浓度误差范围内，如果在范围内，则可以说明你的曲线没有问题，相应的其他数据也正确。如下图质控样在检测活动中的重要性检测过程中涉及到很多流程或者叫做步骤吧，或多多少会遇到一些不确定的因素，最终影响着我们的检测结果的准确性，那么如何确保我们的检测是在可控范围内，换句话说，如何保证我们的检测结果的有效性和可比性？这就需要质控样了，说到质控样大家一定不陌生吧也就是我们通常说的QC样，那么质控样都有哪些呢？我认为主要有三种：空白样、标准溶液（物质）、重复样。下面我就这三种来说说它们的在检测过程中的重要性吧。先来说空白样（BLK），但凡我们看到的标准方法都有这么一句：随样品做空白，有的还要做2个呢。为什么要做空白，做空白的意义何在呢？空白样品可以检验整个样品处理过程是否受到污染，试剂有无需要检测的成分，有多少含量，检测过程中仪器的检出限和基体干扰的扣除。接下来我们说说标准物质STD（溶液），标准物质一般我们会选择跟需要检测的样品基体相同或者相近的，所含元素含量或者组分含量一高一低的2个，通常一个放在空白样后面，另一个位置随机放置，购买质控样和标准溶液就到国家标准品网处理过程和样品一样。在前处理过程中，标准物质主要是用来监控处理过程有无异常，处理的是否充分、彻底；而在仪器检测过程中，主要是检验仪器测试状态是否正常，工作曲线是否偏差很大等。最后我们来说说重复样（DUP），重复样就是需要检测的样品的另一份取样，从同一个样品中取得的，前处理和样品一样。重复样的作用主要是检验样品的均匀性、代表性，如果你检测结果显示相差很远，你就要寻找原因了，是不是弄错样品了，还是样品的均匀性不好造成的？总结：看似很不起眼的质控样，其实在我们检测活动中起着很大的作用，监视着整个检测过程的质量，也为我们找寻和分析质量问题提供线索和依据。很多人不重视它，等到出了问题找原因就无从下手了。规范的实验室一般都要求加质控样的。

1、酸性品红：酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容於水，略溶於酒精（0.3%）。是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。它跟甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。2、刚果红：刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶於水喝酒精，遇酸呈蓝色。它能作染料，也用作指示剂。它在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由於它能溶於水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速3、甲基蓝：甲基蓝是弱酸性染料，能溶於水和酒精。甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。它跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。它的水溶液是原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化，因此用它染色后不能长-久保存。4、固绿：固绿是酸性染料，能溶於水（溶解度为4%）和酒精（溶解度为9%）。固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广。它和苏木精、番红并列为植物组织学上三中蕞常用的染料。它和苏木精、番红并列为植物组织学上三中蕞常用的染料。5.苯胺蓝：是一种混合酸性染料，平常所用很难有一定的标准。此染料一般很难溶於水，也不易溶於酒精（1.5%）。植物制片中可与番红合用，作为组织染色；也可作藻类植物染色。因为这种染料的成分很不一致，染色效果不易掌握。6、苏丹Ⅲ：苏丹Ⅲ是弱酸性染料，不溶解於水，呈红色粉末状，易溶於脂肪和酒精（溶解度为0.15%）。常用70%酒精中的饱和溶液。苏丹Ⅲ是脂肪染色剂。7、苏丹Ⅳ：苏丹Ⅳ是弱酸性染料，也是很好的染脂肪染料，现在多用以代替苏丹Ⅲ，可染树脂、乳汁管、蜡质以及角质等结构，也可使叶绿体染成暗红色。8、伊红：这类染料种类很多。常用的伊红Y，是酸性染料，呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状，溶於水（15摄氏度是溶解度达44%）和酒精（溶於无水酒精的溶解度为2%）。伊红在动物制片中广泛应用医学教|育网搜集整理，是很好的细胞质染料，常用作苏木精的衬染剂。9、碱性品（复）红：碱性品红是碱性染料，呈暗红色粉末或结晶状，能溶於水（溶解度1%）和酒精（溶解度8%）。碱性品红在生物学制片中用途很广，可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁，又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学制片中，长用来鉴别结核杆菌。在尔根氏回应中用作组织化学试剂，已核查脱氧核糖核酸。10、结晶紫：结晶紫是碱性染料，能溶於水（溶解度9%）和酒精（溶解度8.75%）。结晶紫在细胞学、组织学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。它是细胞核染色常用的，用来显示染色体的中心体，并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时，用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色，染色体染成红色，纺锤丝染成紫色，所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛，效果也很好。用结晶紫染色的切片，缺点是不易长-久储存。11、龙胆紫：龙胆紫是混合的碱性染料，主要是结晶紫和甲基紫的混合物。在必要是，龙胆紫能跟结晶紫互相替用。医药上用的紫药水，主要成分是甲基紫，需要时能代替龙胆紫和结晶紫12、中性红：中性红是弱碱性染料，呈红色粉末状，能溶於水（溶解度4%）医学教|育网搜集整理和酒精（溶解度1.8%）。它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，所以能用作指示剂。中性红无毒，常做活体染色的染料，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液，用作显示尼尔体的常用染料。13、番红：番红是碱性染料，能溶於水和酒精。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料，能染细胞核、染色体和植物蛋白质，示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织，还能染孢子囊。14、亚甲蓝或美蓝：亚甲蓝或美蓝是碱性染料，呈蓝色粉末状，能溶於水（溶解度9.5%）和酒精（溶解度6%）。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料，其优点是染色不会过深。15、甲基绿：甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状，能溶於水（溶解度8%）和酒精（溶解度3%）。甲基绿是最有价值的细胞和染色剂，细胞学上常用来染染色质，跟酸性品红一起可作植物木质部的染色

按照中华人民共和国GB15346-94化学试剂包装标准规定： 第9.1.1.M规定：要求注明有效期的必须注明有效期;生产日期或生产批号。我国化学试剂的分类：优级纯(GR，绿标签)：主成分含量很高、纯度很高，适用于精确分析和研究工作，有的可作为基准物质。分析纯(AR，红标签)：主成分含量很高、纯度较高，干扰杂质很低，适用于工业分析及化学实验。化学纯(CP，蓝标签)：主成分含量高、纯度较高，存在干扰杂质，适用于化学实验和合成制备。实验纯(LR，黄标签)：主成分含量高，纯度较差，杂质含量不做选择，只适用于一般化学实验和合成制备。指示剂和染色剂(ID或SR，紫标签)：要求有特有的灵敏度。指定级(ZD)：按照用户要求的质量控制指标，为特定用户订做的化学试剂。电子纯(MOS)：适用于电子产品生产中，电性杂质含量极低。当量试剂(3N、4N、5N)：主成分含量分别为99.9%、99.99%、99.999%以上。化学试剂有效期 :化学试剂在贮存、运输和销售过程中会受到温度、光辐照、空气和水份等外在因素的影响，容易发生潮解、霉素、变色、聚合、氧化、挥发、升华和分解等物理化学变化，使其失效而无法使用。因此要采用合理的包装，适当的贮存条件和运输方式，保证化学试剂在贮存、运输和销售过程中不变质。对一些对贮存和运输有特殊要求的应按特殊要求办理。有些化学试剂有一定的保质期，使用时一定要注意。化学试剂的有效期随着化学品的化学性质的改变，有着很大的区别。一般情况下，化学性质稳定的物质，保存有效期就越长，保存条件也简单。初步判断一个物质的稳定性，可遵循以下几个原则：无机化合物，只要妥善保管，包装完好无损，可以长期使用。但是，那些容易氧化、容易潮解的物质，在避光、荫凉、干燥的条件下，只能短时间(1～5年)内保存，具体要看包装和储存条件是否合乎规定。有机小分子量化合物一般挥发性较强，包装的密闭性要好，可以长时间保存。但容易氧化、受热分解、容易聚合、光敏性物质等，在避光、荫凉、干燥的条件下，只能短时间(1～5年)内保存，具体要看包装和储存条件是否合乎规定。有机高分子，尤其是油脂、多糖、蛋白、酶、多肽等生命材料，极易受到微生物、温度、光照的影响，而失去活性，或变质**，故此，要冷藏(冻)保存，而且时间也较短。基准物质、标准物质和高纯物质，原则上要严格按照保存规定来保存，确保包装完好无损，避免受到化学环境的影响，而且保存时间不宜过长。一般情况下，基准物质必须在有效期内使用。

标准溶液是什么？标准溶液的配制方法又是什么？本篇贤集网小编来为大家介绍一下标准溶液的配制方法、标准溶液的配制步骤、标准溶液的定义、标准溶液的浓度标定及标准溶液的标签，大家一起来看看吧。标准溶液的配制方法、步骤、定义、浓度标定及标签标准溶液的配制方法标准溶液的配制方法有两种：1、直接配制法在分析天平上准确称取一定量已干燥的基准物溶于水后，转入已校正的容量瓶中用水稀释至刻度，摇匀，即可算出其准确浓度。2、标定法很多物质不符合基准物生物条件，不能直接配制标准溶液。一般先将这些物质配成近似所需浓度溶液，再用基准物测定其准确浓度。标定的方法有直接标定和间接标定两种，间接标定的系统误差比直接标定要大些。标准溶液的配制步骤配制溶液步骤因配置的溶液不同而有所不同。现举两个例子：举例1：配置0.05mol/L，400mLNaOH溶液的步骤：要准确配置氢氧化钠的浓度，则要用容量瓶定容的。实验室没有400毫升的容量瓶，则选用500毫升的容量瓶。1、计算需要氢氧化钠的质量。0.5L*0.05mol/L*40.01=1.000克2、称1.000克氢氧化钠于烧杯中，加少量水溶解，然后倒入500毫升容量瓶里，分3次洗烧杯，将溶液全部倒入容量瓶里，最后用水稀释至刻度线。摇匀，即得到0.05mol/L的氢氧化钠溶液。如果不需要很准确的话，可以直接用量筒量400毫升，称的时候只要称0.8克就可以了。举例二：配置1.5mol/l的稀硫酸200ml的步骤：第一部计算：根据c1V1=c2V2,计算需要浓硫酸的体积。第二步：量取，利用刻度吸管吸取需要浓硫酸的体积。第三步：稀释，将浓硫酸转移到小烧杯中，加少量水稀释。第四步：转移，待溶液温度降低后，将烧杯中的硫酸转移到200ml容量瓶中。第五步，洗涤，洗涤小烧杯，和转移的时候用到的玻璃棒，至少三次，将洗涤的水一并转移到容量瓶中。第六步：定容，加水定容到刻度线，在距离刻度线一厘米左右改用胶头滴管定容。第七步：摇匀，将溶液摇匀，如果液面下降也不可再加水定容。第八步：将配得的溶液转移至试剂瓶中，贴好标签。标准溶液的定义标准溶液指的是具有准确已知浓度的试剂溶液，在滴定分析中常用滴定剂。在其他的分析方法中用标准溶液绘制工作曲线或作计算标准。标准溶液的浓度标定标准溶液的浓度标定因配置溶液不同而有所不同

基准试剂（Primarystandards）是纯度高、杂质少、稳定性好、化学组分恒定的化合物。在基准试剂中有容量分析、pH测定、热值测定等等分类。每一分类中均有第一基准 和工作基准之分。凡第一基准都必须由国家计量科学院检定，生产单位则利用第一基准作为工作基准产品的测定标准。目前，商业经营的基准试剂主要是指容量分析 类中的容量分析工作基准[含量范围为99.95%~100.05%（重量滴定）分析化学中用于直接配制标准溶液或标定滴定分析中操作溶液浓度的物质。标准物质（Standardsubstance）是用于化学分析、仪器分析中作对比的化学物品，或是用于校准仪器的化学品。其化学组分、含量、理化性质及所含杂质必须已知，并符合规定或得公认。是具有一种或多种足够均匀和很好地确定了的特性，用以校准测量装置、评价测量方法或给材料赋值的一种材料或物质。用于统一量值的标准物质，包括化学成分分析标准物质、物理特性与物理化学特性测量标准物质和工程技术特性测量标准物质。其化学组分、含量、理化性质及所含杂质必须已知，并符合规 定或得公认。微量分析试剂微量分析试剂（Micro-analytical reagent）适用于被测定物质的许可量仅为常量百分之一（重量约为1~15毫克，体积约为0.01~2毫升）的微量分析用的试剂。基准试剂和标准物质概念区分不是太明确。标准物质不一定都是基准物质，因为标准物质只是含量已知，纯度未必达到99.9%，标准物质多数是由资质的单位定值的，有些还有统一的编号。基准试剂是本身纯度足够高，且性质稳定。可以直接配制溶液和标定未知溶液的浓度。

 一、缓冲液的概念缓冲液（Buffer solution）通常是由弱酸及其共轭碱或弱碱及其共轭酸缓冲对所组成的溶液，能够在加入一定量其他物质时减缓pH的改变。以生物实验中蕞常用的一种缓冲液PBS为例，是由Na2HPO4、KH2PO4组成的缓冲对，在PH5.8-8.0范围内有较强的缓冲能力。二、缓冲液的作用缓冲溶液的作用是在有限的范围内调整溶液的pH值，使待测溶液的酸度符合分析方法所规定的范围。例如，苯酚在碱性介质及铁qing化钾存在下，可与4-氨基安替比林反应生成橙红色的安替比林染料，为了防止芳香胺类的干扰以pH在10士0.2时最为适宜。为此，就需要在待测溶液中加入氨一氯化钱缓冲溶液调整和控制待测溶液的pH为10.0士0.2。三、缓冲液使用中的注意事项在实际工作中有些分析人员由于不大了解缓冲溶液的作用机理，当所配制和使用的缓冲溶液与规定的数值不相符时，为使缓冲溶液达到要求，就用盐酸或氢氧化钠等强酸、强碱进行调节, 以为这样做可以使缓冲溶液尽快达到所需要的pH值，然而，结果却适得其反，这样的溶液pH值虽然调对了，可是它的缓冲体系却被破坏了，作用也就失去了，缓冲溶液一般都是由弱酸及其弱酸盐或是弱碱及其弱碱盐组成的一对共轭体。使用缓冲溶液的注意事项：不少缓冲溶液都含有易挥发组分，如，氨-氯化铵中的氨酷酸-醋酸钠中的醋酸。现在，不少实验室引入了定量加液器，用定量加液器加试剂，具有简便准确误差恒定的特点，特别是在做成批样品时更显出它的优越性，不少同志也喜欢用它来加缓冲液，但是，应注意缓冲液不能长久存放在定量加液器中，因该器皿不密闭，易造成氨的挥发（醋酸-醋酸钠缓冲液中的醋酸也同理），从而，导致溶液失效，正确的做法是缓冲液应适量配制，使用后及时密闭并置于低温中保存。

实验时经常用到PBS缓冲液，但是很多文献里面也用到了Hanks缓冲液，不知道这两种缓冲液在细胞培养方面有什么区别?也就是说它分别适合于哪些情况?PBS ：磷酸缓冲盐溶液——具有pH缓冲作用的等渗盐溶液。PBS溶液又称磷酸盐缓冲溶液，一般选择K2HPO4和KH2PO4配制，因为钠盐溶解的较慢。根据不同pH的溶液，称量不同质量的磷酸盐，也可以用pH计调溶液的pH。PBS一般用作支持电解质。其配置方法如下：采用去离子水、KH2PO4和Na2HPO4·2H2O配制PBS溶液，按以下步骤进行：(1) 配制1/15mol/L KH2PO4，即每升水中溶解9.078克KH2PO4;(2) 配制1/15mol/LNa2HPO4·2H2O，即每升水中溶解11.876克Na2HPO4·2H2O;(3) 将18.2%(体积分数)KH2PO4溶液和81.8%Na2HPO4·2H2O混合;最终 测定PBS液的PH值约为7.4。其作用接近于生理盐水，但是在实验室内比生理盐水的用途要广泛。Hanks：平衡盐溶液——无机盐和葡萄糖浓度接近大部分动植物 细胞的水平，可作为动植物细胞短期培养(保存)。 Hank's配方:NaCl 8.01;KCl 0.4;CaCl2 0.14; NaHCO3 0.35;KH2PO 4 0.06;Glucose 0.34(g/l); D-Hank' s:不含钙离子、镁离子、葡萄糖。( T7 e# L7 e, K2 N相比较而言，hanks液中盐成分较PBS复杂，且有葡萄糖，可为细胞提供简单的营养，而pbs中只有磷酸根，钠，钾，氯离子，只是蕞简单的盐平衡缓冲液，不能为细胞提供暂时的营养 。关键要看你用这些液体来洗细胞还是存储细胞了PBS 、hanks各都有两种，一种是含钙镁的，另一种是不含钙镁的：DPBS,DHANKS。 r) u7 n6 e3 R% Phanks比PBS成分稍微复杂点，一般细胞培养时用DPBS就够，Dhanks一般用到原代细胞消化分离操作实验中,一般培养用PBS就够了，感觉DHANKS上场的实验比较高级点哎，对于保护细胞活力等很有好处。HANKS对细胞略好， 不过一般洗涤等用PBS足够了。 分离时，两者皆可， 多数推荐HANKS，实际上差不多。如果分离时消化时间较长， 建议HANKS。

生物缓冲液通常由共轭碱和弱酸或共轭酸和弱碱组成，其中我司主要生产的有Tris、Hepes、Mops等等。缓冲液是一种有助于维持稳定的pH值的溶液，一项成功的研究必然有着选择使用了正确的缓冲液。在下文，将给大家介绍选择生物缓冲液时需要考虑的五个方面。1、pKa值由于大多数生物反应都会在6-8的pH值之间发生，因此选择具有正确pKa值的缓冲液非常重要。在选择缓冲液之前，有必要弄清楚该实验适合的pH值水平。如果在实验过程中pH值可能会降低或升高，则重要的是选择pKa高于或低于任何实验开始时的最佳值的缓冲液。每个缓冲液都具有一定的pH范围，在该范围内它具有足够的缓冲能力。缓冲液的pKa值应在所需pH值的一个pH范围内。2、水溶性缓冲液的溶解度非常重要。大多数缓冲剂必须高度溶于水。并且还需要使它们在大多数有机溶剂中的溶解度降至最低。这很重要，因为大多数生物系统都会自然使用水作为溶剂。缓冲液的水溶性越大，则制备浓缩原液就越容易。重要的是要注意稀释后，储备溶液的pH值可能会改变。3、盐的影响盐会严重影响实验的结果，因为大多数生物系统都容易受到盐的影响。科学描述了良好缓冲液的许多属性，包括zui小化盐效应的必要性。盐可能会产生反应，从而引起并发症并可能影响研究结果。但是，有时会在实验过程中添加盐以进行调整，以提高化合物的缓冲能力。4、渗透渗透是选择生物缓冲液时的关键因素。缓冲液不应穿过任何细胞膜。如果缓冲区在单元格内堆积，则实际上可以更改单元格。这有可能改变研究结果。良好的缓冲液不会在任何细胞器中积累。5、离子强度离子强度是一个需要认真考虑的因素。生物系统在缓冲液中具有很高的离子强度，可能会遭受严重的并发症。根据专业文献得知，离子强度是一个重要方面，因为缓冲液在实验中不会对离子浓度产生重大影响。

在实验室操作中，每天都会使用到各种化学药品、化学试剂、生物试剂、仪器设备，某些实验条件下，还会遭受诸如：高温、低温、高压、真空和辐射源的伤害，若缺乏必要的安全防护知识，会造成生命和财产的巨大损失。不管是仪器还是试剂、药品，都有一定的使用禁忌不得不知，如何才能有效预防及避免？让我们一起来了解吧!实验室常见安全隐患有哪些?(一)、化学品危害主要是指根据化学品的性质所引起的中毒、易燃、易爆、易腐蚀情况的发生。(二)、生物病菌危害主要是指由于实验室在科学研究、开发、生产和应用中(比如新型病毒的预防疫苗研究)造成对人类健康、生存环境和社会生活有害的影响。(三)、仪器设备危害在某些特定的仪器如带放射性物质仪器的辐射危害，一些仪器运行过程中产生的噪声危害等。(四)、其他潜在危害使用气体时，对气体存储安置不当，如平放或倒置气瓶、气体阀门长时间不检修造成气体泄漏所引起的毒害，爆炸等潜在危险情况。又如，烘箱高温烫伤、液氮使用不当，溅到到皮肤上造成的冻伤。谨记：实验室“四防”(一)、防毒大多数化学药品都有不同程度的毒性。有毒化学药品可通过呼吸道、消化道和皮肤进入人体而发生中毒现象。如氟化氢 HF 侵入人体，将会损伤牙齿、骨骼、造血和神经系统;烃、醇、醚等有机物对人体有不同程度的麻醉作用;三氧化二砷、氰化物、氯化高汞等是剧毒品，吸入少量会致死。防毒注意事项实验前应了解所用药品的毒性、性能和防护措施;使用有毒气体(如硫化氢H2S, 氯气Cl2,溴气 Br2, 二氧化氮NO2, 氯化氢HCl, 氟化氢HF)应在通风橱中进行操作;苯、四氯化碳、乙醚、硝基苯等蒸汽经常久吸会使人嗅觉减弱，必须高度警惕;有机溶剂能穿过皮肤进入人体，应避免直接与皮肤接触;剧毒药品如汞盐、镉盐、铅盐等应妥善保管;实验操作要规范，离开实验室要洗手。(二)防火防止煤气管、煤气灯漏气，使用煤气后一定要把阀门关好;乙醚、酒精、丙酮、二硫化碳、苯等有机溶剂易燃，实验室不得存放过多，切不可倒入下水道，以免集聚引起火灾;金属钠、钾、铝粉、电石、黄磷以及金属氢化物要注意使用和存放，尤其不宜与水直接接触;万一着火，应冷静判断情况，采取适当措施灭火;可根据不同情况，选用水、沙、泡沫、二氧化碳 或 四氯化碳灭火器灭火。(三)、防爆化学药品的爆炸分为支链爆炸和热爆炸氢、乙烯、乙炔、苯、乙醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯、一氧化碳、水煤气和氨气等可燃性气体与空气混合至爆炸极限，一旦有一热源诱发，极易发生支链爆炸;过氧化物、高氯酸盐、叠氮铅、乙炔铜、三硝基甲苯等易爆物质，受震或受热可能发生热爆炸。防爆措施：对于防止支链爆炸，主要是防止可燃性气体或蒸气散失在室内空气中，保持室内通风良好。当大量使用可燃性气体时，应严禁使用明火和可能产生电火花的电器;对于预防热爆炸，强氧化剂和强还原剂必须分开存放，使用时轻拿轻放，远离热源。(四)防灼伤除了高温以外，液氮、强酸、强碱、强氧化剂、溴、磷、钠、钾、苯酚、醋酸等物质都会灼伤皮肤;应注意不要让皮肤与之接触，尤其防止溅入眼中。特别提醒：使用高压容器的安全防护高压气瓶的安全使用：气瓶应专瓶专用，不能随意改装;化学实验常用到高压储气钢瓶和一般受压的玻璃仪器，使用不当，会导致爆炸，需掌握有关常识和操作规程气体钢瓶的识别(颜色相同的要看气体名称)氧气瓶：天蓝色; 氢气瓶：深绿色;氮气瓶：黑色; 纯氩气瓶： 灰色;氦气瓶;棕色; 压缩空气; 黑色;氨气瓶：黄色; 二氧化碳气瓶：黑色。气瓶应存放在阴凉、干燥、远离热源的地方，易燃气体气瓶与明火距离不小于 5 米;氢气瓶最好隔离;气瓶搬运要轻要稳，放置要牢靠;各种气压表一般不得混用;氧气瓶严禁油污，注意手、扳手或衣服上的油污;瓶内气体不可用尽，以防倒灌;开启气门时应站在气压表的一侧，不准将头或身体对准气瓶总阀，以防万一阀门或气压表冲出伤人。我们需要怎么做?如果我们掌握并熟知试剂、化学品、仪器相关的使用禁忌以及实验室安全知识，可以尽可能的减少和避免实验室里安全事故的发生，即使在发生紧急事故时，也能够不慌不乱，把伤害和损失减少到最少程度。1.实验时根据实验性质进行必要的防护。根据试验可能发生的危险事故佩戴必要的防护工具，例如穿好试验服，戴橡胶手套，防护面具，防毒面具等。实验前，要注意清理试验场周围的安全隐患。检查试验装置、药品和相关物品是否有不符合要求的情况等。2.遵循化学药品的性质和化学反应的规律，不盲目蛮干和主观臆测化学反应的过程。应根据化学反应的性质和过程选择匹配的反应装置，不可图省事省去必要的安全措施。3.对实验的危险性预估实验事故虽不可预测，但其危险性的大小是可以估计到的。即使对不大了解的实验，也必须推测其危险程度而制订相应的预防措施。比如下面这类实验，必须十分注意，以确保万无一失。①不了解的反应及操作;②存在多种危险性的实验(如发生火灾、毒气等);③在严酷的反应条件(如高温、高压等)下进行的实验。4.做好预防措施并加以检查。平时注意熟悉需要关闭的主要龙头、电气开关，灭火器的位置及操作方法，避免发生事故时才四处寻找应急的物品。5.实验后处理。实验的后处理工作，亦属实验过程的组成部份。值得一提的是，不可忽略回收溶剂和废液、废弃物等的处理。以上实验室的化学药品、化学试剂、生物试剂、仪器设备的使用禁忌介绍！希望能给大家带来帮助。

化学试剂按照形态的差异分为固体、液体、粉末、颗粒等不同种类，针对不同的试剂需要选用符合其特性的试剂瓶，所以试剂在取用时也会有所差别。为了防止试剂洒出来，同时避免试剂挥发，液体试剂主要存放在瓶口较小的细口瓶中，取用时遵循以下规则：1、用少量液体试剂时，常使用胶头滴管吸取，用量较多时则采用倾泻法。2、从细口瓶中将液体倾入容器时，把试剂瓶上贴有标签的一面握在手心，另一手将容器斜持、并使瓶口与容器口相接触，逐渐倾斜试剂瓶，倒出试剂。3、试剂应该沿着容器壁流入容器，或沿着洁净的玻棒将液体试剂引流入细口或平底容器内。4、取出所需量后，逐渐竖起试剂瓶，把瓶口剩余的液滴碰入容器中去，以免液滴沿着试剂瓶外壁流下。5、若实验中无规定剂量时，一般取用1至2 mL。定量使用时，则可根据要求选用量倚、滴定管或移液管。6、取多的试剂也不能倒回原试剂瓶，更不能随意废弃，可倒入指定容器内供他人使用。尤其在取用有毒试剂时，应严格遵照规则取用。化学试剂常具有危险性，如易燃易爆、易挥发、剧毒、易变质、易氧化等，在取用试剂时需要特别注意，熟知各种试剂的特性及取用规则，可以确保实验的安全性，避免发生危险事故。

谈到标准物质或者标准品，相信大多数人都不是很了解，简单的介绍一下，标准物质的是技术基础中的基础部分和核心，也是分析测量结果质量的重要保证，随着科学技术的发展，在分析测量的重要作用不断加深的情况下，分析测量结果的质量、结果的可靠性和有效性与标准物质的依存度将更为显着。小编带大家来了解一下，在选择、购买标准物质时应考虑的要素：(1)特性量的种类及定值方法：某些标准物质可能只适用某一特定方法或专属领域的应用，;(2)特性量水平：标准物质的特性量水平应与日常测量样品的水平匹配;(3)可接受的不确定度水平：标准物质特性量的相关不确定度水平应与日常测量中的精密度和正确度限度要求匹配;(4)基体及可能的干扰：基体应与日常测量样品基体尽可能接近;(5)形式：标准物质可制备成不同的形式，选购前应充分调研;(6)最小取样量：选购时应考虑最小取样量是否能满足测量方法要求;在测量中进行控制工作时是需要将标准物质作为参考标准的，测量结束后对结果的评价过程中也需要将标准物质作为参考标准，如此看来，标准物质的作用好似一把尺子，在各种测量的工作中，将涉及到的物理、化学、生物等多种特征性质或者成分量作为衡量的对象。远慕生物提供了大量的标准物质的基本信息，方便大家在选购、测量时进行参考。所以，在选购标准物质前，要认真考虑上面提到的这些要素，做到工作的准确无误。

在标准溶液的提取上有两种方法，主要是基准物质直接配制和已知准确浓度的标准溶液进行标定进行提取，标准溶液的浓度准确与否直接关系检测结果的精密度、准确度有直接的关系，其配制条件有着十分严格的要求。下面小编来给大家分享下自行配制的标准溶液必须具备8个基本要求。自行配制的标准溶液必须具备8个基本要求：1、应采用具有高纯度的溶质或基准物质(如金属、金属氧化物或金属化合物;酸、碱、金属有机化合物、适宜的盐类、有机溶剂等)。2、为确保配制标准溶液的可靠性、准确性,实验室的设备、环境设施均应满足其要求,(应有监测、控制和记录环境条件。特别对灰尘、电磁干扰、放射、温度、湿度、供电等)。3、具有符合称量要求器具、应有正确称量的电子分析天平,并通过周期性的检定,有质检部门检定的证书。4、要有配制标准溶液的纯度高的溶剂(采用双重蒸馏去离子水、高纯浓度的酸、碱或有机溶液)。5、配制所用的器皿用具,必须根据所测项目要求,分类对器皿进行洁净的处理,且符合特定洁净的要求,保证所配的标准溶液无污染,对检测不产生不良影响。6、应采用洁净的优质硬玻璃容量瓶作最终体积的容器。7、根据所配标准溶液对盛放容器的要求,必须选用适当质料的洁净器皿存放标准溶液,并按规定要求(如避光、通风、阴凉、冷藏等条件)放置配制好的标准溶液。8、必须作好配制标准溶液的原始记录的登记,标准溶液标签填写完整(如标准溶液名称、浓度mg/ml或mol/ml,配制人,配制日期、有效期等),并将标签贴在试剂瓶上。

滴定分析标准溶液：已知准确浓度的、经过均匀性和稳定性研究的、有不间断溯源链的用于滴定分析的溶液。滴定分析标准溶液制备方法有两种： 一、直接配制法具体操作步骤：准确称取一定量的纯物质，溶解并稀释到准确体积，根据计算求出该溶液的准确浓度。例如：重铬酸钾标准滴定溶液、lv化钠标准滴定溶液制备等。直接配制法配制标准溶液的物质必须具备：1.必须有足够的纯度，含量≥99.9%，其杂质含量应少于容量分析所允许的误差程度。例如：制备重铬酸钾标准滴定溶液使用的基准物质是国家二级标准物质重铬酸钾，其含量为99.99%。2.物质组成与化学分子式应完全相符。若含结晶水，其含量也应与化学分子式相符。3. 物理性质或化学性质稳定。二、间接配制法具体操作步骤：粗略称取一定量物质或量取一定体积溶液，配制成接近于所需要浓度的溶液，再用基准物质或已知浓度的标准溶液来确定其标准浓度。例如：高锰酸钾标准滴定溶液、盐酸标准滴定溶液、氢氧化钠标准滴定溶液、硝酸银标准滴定溶液等。间接法制备需要的基准物质的选择要求：1.摩尔质量大摩尔质量大的基准物质可以减小天平的精度原因造成的称重误差，最终减小标定滴定溶液的误差。例如：标定氢氧化钠滴定分析标准溶液选择邻苯二甲酸氢钾作为基准物质，而不选用草酸。2.易溶解标准滴定溶液的标定一般都在溶液间进行，液体状态反应比较快速。容易溶解的物质能够保证标定过程的正常进行，减少反应过慢、环境等因素的影响。3.性质稳定基准物质需要稳定性高、不吸湿、不风化的性质。例如：标定盐酸标准滴定溶液选择稳定性更高的无水碳酸钠作为基准物质，而不选用硼砂。4.能产生准确的当量反应与滴定分析标准溶液之间发生化学反应的关系越简单，就越容易对参与反应的物质进行定量，通过计算得到的标准溶液的浓度数值越准确。5.反应终点易判断标准溶液标定一般采用指示剂法或电位滴定法，使用的基准物质要方便反应终点的判断，基准物质的颜色不能影响反应终点的判断。

在实验室的监控项目中，不同实验室对温湿度都有要求，大部分实验都是在明确的温湿度环境中展开。在医药、生化、仪器校准、农业、建筑与电器等领域中，实验室环境条件直接影响着各种实验或检测结果，每项实验的进行都需要精确可靠的监测仪器提供准确的环境参数数据。实验室要求适宜的温度和湿度。室内的小气候，包括气温、湿度和气流速度等，对在实验室工作的人员和仪器设备有影响。夏季的适宜温度应是18～28℃，冬季为16～20℃，湿度最好在30%(冬季)～70%(夏季)之间。除了特殊实验室外，温湿度对大多数理化实验影响不大，但是天平室和精密仪器室应根据需要对温湿度进行控制。小编带你一起制定实验室环境温湿度控制范围：shou先，识别各项工作对环境温湿度的要求：主要识别仪器的需要、试剂的需要、实验程序的需要，以及实验室员工的人性化考虑（人体在温度18～25℃，相对湿度在35～80%范围内总体感觉舒适，并且从医学角度看环境干燥和喉咙的炎症存在一定的因果关系）四个方面要素综合考虑，列出对温湿度控制范围要求的清单。第二：选择并制定有效的环境温湿度控制范围：从以上各要素所有要求清单中摘取最窄范围作为该实验室环境控制的允许范围，制定环境条件控制方面的管理程序，并依据该科室实际情况制定合理有效的SOP第三：保持和监控：通过各项措施保证环境的温湿度在控制的范围内，并对环境温湿度进行监控和做好监控的记录，超过允许范围及时采取措施，开空调调节温度，开除湿机控制湿度。某实验室温湿度控制标准（仅供参考）：三楼实验室监控房间：试剂室      温度10～30℃，湿度35～80%样品存放室  温度10～30℃，湿度35～80%天平室      温度10～30℃，湿度35～80%水分室      温度10～30℃，湿度35～65%红外室      温度10～30℃，湿度35～60%中心实验室  温度10～30℃，湿度35～80%留样室      温度10～25℃，湿度35～70%实验室的标准温度为20℃，一般检测间及试验间的温度应在20±5℃，线值计量标准间为20±2℃，电工与无线电专业的标准间和线值计量的计量检测仪器间为20±3℃，实验室内的相对湿度一般应保持在50～70％。实验室温湿度控制要求环境条件温湿度的控制方面考虑的要素就是保证实验操作的环境温湿度是能够满足实验程序各个过程的需要。我们主要从以下几个方面来制定实验室环境温湿度控制范围。首先，识别各项工作对环境温湿度的要求。主要识别仪器的需要、试剂的需要、实验程序的需要，以及实验室员工的人性化考虑（人体在温度18～25℃相对湿度在35～80%范围内总体感觉舒适，并且从医学角度老看环境干燥和喉咙的炎症存在一定的因果关系）。小结：普通的化学实验一般只控制温度，实验室温度控制在20～25℃，湿度一般在80%以下就可以了。常温留样室温度是10℃～30℃，阴凉留样室是温度不高于20℃，湿度应该是45～75%。

Folin—酚试剂法(Lowry法)(一)实验原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一.过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(现在已可以订购),近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代.此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了检测蛋白质的灵敏度.这两种显色反应产生深兰色的原因是:在碱性条件下,蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物.Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原,产生深兰色(钼兰和钨兰的混合物).在一定的条件下,兰色深度与蛋白的量成正比.Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤.以后在生物化学领域得到广泛的应用.这个测定法的优点是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多,缺点是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多.对双缩脲反应发生干扰的离子,同样容易干扰Lowry反应.而且对后者的影响还要大得多.酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用.浓度较低的尿素(0.5%),硫酸纳(1%),硝酸纳(1%),三氯乙酸(0.5%),乙醇(5%),乙醚(5%),丙酮(0.5%)等溶液对显色无影响,但这些物质浓度高时,必须作校正曲线.含硫酸铵的溶液,只须加浓碳酸钠—氢氧化钠溶液,即可显色测定.若样品酸度较高,显色后会色浅,则必须提高碳酸钠—氢氧化钠溶液的浓度1~2倍.进行测定时,加F olin—酚试剂时要特别小心,因为该试剂仅在酸性pH条件下稳定,但上述还原反应只在pH=10的情况下发生,故当Folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时,必须立即混匀,以便在磷钼酸—磷钨酸试剂 被破坏之前,还原反应即能发生.此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定.此法可检测的最低蛋白质量达5mg.通常测定范围是20~250mg.(二)试剂与器材1.试剂(1)试剂甲：(A) 10克 Na2CO3,2克 NaOH和0.25克酒石酸钾钠 (KNaC4H4O6·4H2O).溶解于500毫升蒸馏水中.(B) 0.5克硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶解于100毫升蒸馏水中,每次使用前,将50份(A)与1份(B)混合,即为试剂甲.(2)试剂乙：在2升磨口回流瓶中,加入100克钨酸钠(Na2WO4·2H2O),25克钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)及700毫升蒸馏水,再加50毫升 85%磷酸,100毫升浓盐酸,充分混合,接上回流管,以小火回流10小时,回流结束时,加入150克 硫 酸锂(Li2SO4),50毫升蒸馏水及数滴液体溴,开口继续沸腾15分钟,以便驱除过量的溴.冷却后溶液呈黄色(如仍呈绿色,须再重复滴加液体溴的步骤).稀释至1升,过滤,滤液置于棕色试剂瓶中保存.使用时用标准NaOH滴定,酚酞作指示剂,然后适当稀释,约加水1倍,使最终的酸浓度为1N左右.(3)标准蛋白质溶液:精确称取结晶牛血清清蛋白或 g—球蛋白,溶于蒸馏水,浓度为250 mg/ml左右.牛血清清蛋白溶于水若混浊,可改用0.9 % NaCl溶液.2. 器材(1)可见光分光光度计(2)旋涡混合器(3)秒表(4)试管16支(三)操作方法1. 标准曲线的测定：取16支大试管,1支作空白,3支留作未知样品,其余试管分成两组,分别加入0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0毫升标准蛋白质溶液(浓度为250mg/ml).用水补足到1.0毫升,然后每支试管加入5毫升试剂甲,在旋涡混合器上迅速混合,于室温(20～25℃)放置 10分钟.再逐管加入0.5毫升试剂乙(Folin—酚试剂),同样立即混匀.这一步混合速度要快,否则会使显色程度减弱.然后在室温下放置30分钟,以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照,于700nm处测定各管中溶液的吸光度值.以蛋白质的量为横座标,吸光度值为纵座标,绘制出标准曲线.注意：因Lowry反应的显色随时间不断加深,因此各项操作必须精确控制时间,即第1支试管加入5毫升试剂甲后,开始计时,1分钟后,第2支试管加入5毫升试剂甲,2分钟后加第3支试管,余此类推.全部试管加完试剂甲后若已超过10分钟,则第1支试管可立即加入0.5毫升试剂乙,1分钟后第2支试管加入0.5毫升试剂乙,2分钟后加第3支试管,余此类推.待最后一支试管加完试剂后,再放置30分钟,然后开始测定光吸收.每分钟测一个样品.进行多试管操作时,为了防止出错,每位学生都必须在实验记录本上预先画好下面的表格.表中是每个试管要加入的量(毫升),并按由左至右,由上至下的顺序,逐管加入.最下面两排是计算出的每管中蛋白质的量(微克)和测得的吸光度值.Folin—酚试剂法实验表格：管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标准蛋白质 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0(250mg/ml)未知蛋白质 0.2 0.4 0.6(约250mg/ml)蒸馏水 1.0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0 0.8 0.6 0.4试剂甲 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0试剂乙 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5每管中蛋白质的量(ug)吸光度值(A700)2. 样品的测定：取1毫升样品溶液(其中约含蛋白质20~250微克),按上述方法进行操作,取1毫升蒸馏水代替样品作为空白对照.通常样品的测定也可与标准曲线的测定放在一起,同时进行.即在标准曲线测定的各试管后面,再增加3个试管.如上表中的8、9、10试管.根据所测样品的吸光度值,在标准曲线上查出相应的蛋白质量,从而计算出样品溶液的蛋白质浓度.注意,由于各种蛋白质含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸,显色的深浅往往随不同的蛋白质而变化.因而本测定法通常只适用于测定蛋白质的相对浓度(相对于标准蛋白质).

清洁的实验器皿是实验得到正确结果的先决条件，因此，实验器皿的清洗是实验前的一项重要准备工作。下面远慕生物就为大家分享一下如何正确清洗实验器皿，希望对大家有帮助。01、常规洗涤法（一般容器）1.清洗实验器皿前先用肥皂洗手。2.先用自来水冲去灰尘，再用毛刷蘸洗涤剂、液仔细刷净内外表面，之后边刷边用水冲至无洗涤剂、液。3.再用自来水冲洗3～5次，去离子水冲洗3次。4.不便刷洗的实验器皿先用洗涤剂、液浸泡后用水冲洗。洗净的玻璃器皿内外不挂水珠，器壁上残留的水用指示剂检查为中性。5.去污粉不得用于洗涤刻度器皿和玻璃仪器内壁，以防划伤玻璃。02、不同材质器皿的洗涤1.银、镍和铁质器皿用NaOH熔融，也可用1：3稀HCl短时间浸泡后用水冲洗。2.玛瑙器皿不宜浸洗，要先用洗涤剂洗后用水冲洗倒置架空晾干，不可烘干。3.塑料、瓷质和玻璃器皿用稀HCl浸泡后冲洗。03、特殊器皿洗涤1.砂芯漏斗用热HCl或铬酸洗液边抽滤边清洗，再依次用自来水、蒸馏水抽洗。用后的砂芯漏斗应针对不同的沉淀物，采用适当的洗涤剂先溶解后抽洗。洗净后可在干燥箱中120℃烘干，但烘干前要除去水滴，以免滤片烘裂。洗净的砂芯漏斗要特别注意防尘。2.成套组合玻璃器皿用常规洗净安装后，使用前应用水蒸气洗涤一段时间。用于微量、痕量分析的玻璃容器要用1：1～1：9HNO3浸泡后用常规方法洗涤。3.污垢较重器皿的洗涤首次一般均需用HNO3浸泡进行预处理；洗液确定后增加浸泡时间和加温浸煮能强化洗涤效果；用超声波清洗器清洗。04、特殊污垢的清洗1.铁锈水垢用稀HCl或稀HNO3清洗；2.盛高锰酸钾的器皿，用氯化亚锡的盐酸液或含草酸的硫酸溶液清洗；3.难溶的银盐用硫代硫酸钠或氨水洗涤；4.铝盐、磷钼酸喹啉、白色MoO3用稀NaOH溶液清洗；5.四苯硼钾用丙酮清洗；6.有脂肪性污物的器皿用汽油、甲苯、丙酮、酒精、二氯甲烷等有机溶剂擦洗或浸泡。05、有毒有害物质器皿的洗涤1.对分析致癌性物质或氰化物等剧毒物质容器洗涤时，为防止对人体的危害，在洗涤之前，要使用对这些有害物质有破坏作用的洗涤液进行浸泡，然后再进行洗涤。2.分析氰化物的容器可用3%NaOH溶液浸泡消毒，然后用常规方法清洗。3.分析苯并芘的玻璃容器用20%HNO3溶液浸泡24h，取出后用自来水冲去残留酸液，再按常规方法清洗。06、不同项目取样容器的洗涤处理1.用于检测重金属的水样的容器用1：4HNO3浸泡24h以上，取出后常规方法清洗；2.检测微量有机物的水样的容器用铬酸洗液洗净烘干后，再用纯化过的己烷振摇除去器壁表面沾污的有机物，也可用高锰酸钾洗液浸洗后再用自来水和纯水冲洗干净；3.检测阴离子表面活性剂水样的容器要用洗涤剂刷洗后，再用甲醇振摇1min，再依次用自来水、纯水冲洗干净；检测微生物水样的容器，用常规洗涤后，将玻璃器皿放置于高压灭菌锅中加热至121℃保持15min，予以灭菌。塑料容器浸泡在0.5%过氧乙酸溶液中10min或在环氧乙烷气体中进行低温灭菌。4.聚丙烯耐热塑料容器可用高压灭菌锅121℃高压蒸汽灭菌15min；5.测汞的水样容器要用1：3HNO3充分荡洗并浸置数小时，然后用自来水和超纯水冲洗干净；测微量硫酸盐水样的容器不能使用含硫酸的洗液洗涤；6.测铬水样的容器不能用盐酸或重铬酸钾的洗液洗涤；7.测磷酸盐的水样的容器不能用含磷的洗液洗涤；8.测氨和凯氏氮水样的容器最后要用无氨水涮洗。07、器皿的干燥玻璃器皿可采取控干、烘干、吹干、烤干等方法干燥处理。注意事项1.任何量器均不得用烘干法干燥；2.烤干时需注意由底到口，防止瓶口水滴回滴致玻璃炸裂；3.烤干法只适用于硬质玻璃器皿，有些玻璃器皿，如，比色皿、比色管、称量瓶、试剂瓶等绝对不允许用烤干法；4.干净的玻璃器皿倒置于器皿柜中，柜的隔板上衬垫清洁滤纸，关紧柜门防灰尘。

如何确定试剂有效期试剂的有效日期是影响实验结果准确性的重要因素。在实际使用过程中，人们总是习惯于用生产日期来判断化学试剂的有效性，其实这是不对的。化学试剂不像食品和药品有严格的保质期， 化学试剂一般没有保质期的具体要求和界限， 这与化学试剂的保质期受多方面因素影响有关；要根据化学性质、保存条件等， 再结合工作的实际情况判断试剂是否出现变质、 能否继续使用。试剂的性质对有效期的影响化学试剂一般没有注明保质期， 确定试剂是否变质主要是凭经验和做新旧试剂对比试验。化学试剂的有效期随着化学品的化学性质的改变，有着很大的区别。一般情况下，化学性质稳定的物质，保存有效期就越长，保存条件也简单。一般遵循以下几个原则（一般原则，不是绝对原则）：1无机化合物，只要妥善保管，包装完好无损，理论上可以长期使用。但是容易氧化（如亚硫酸盐、苯酚、亚铁盐、碘化物、硫化物等应将其固体或晶体密封保存，不宜长期存放；水溶液亚硫酸、 氢硫酸溶液要密封存放；钾、钠、白磷更要采用液封形式） 、容易潮解的物质，在避光、阴凉、干燥的条件下，只能短时间（1～5 年）内保存，具体要看包装和储存条件是否符合规定。2有机小分子量化合物一般挥发性较强， 包装的密闭性要好，可以长时间保存（3～5 年） 。但容易氧化、受热分解、容易聚合、光敏性物质等，在避光、阴凉、干燥的条件下，只能短时间（1～5 年）内保存，具体要看包装和储存条件是否符合规定。3有机高分子，尤其是油脂、多糖、蛋白、酶、多肽等生命材料，极易受到微生物、温度、光照的影响，而失去活性，或变质fu败，故此，要冷藏（冻）保存，而且时间也较短。4基准物质、标准物质和高纯物质，原则上要严格按照保存规定来保存，确保包装完好无损，避免受到化学环境的影响，而且保存时间不宜过长。一般情况下，基准物质必须在有效期内使用。在常温（15?C~25?C）下保存时间一般不超过 2个月。超过两个月要重新标定或检查之后再用。5培养基：按规定配制并消毒好培养基，冷至室温，保存在阴暗处（尽可能贮藏在冰箱内） ，配制好的培养基应在1个月内用完。6除另有规定外、试液、缓冲液、指示剂（液）的有效期均为半年。液相用的流动相、纯化水有效期为 15 天。7除另有规定外，液体试剂开启后一年内有效，固体试剂开启后三年内有效。环境条件对有效期影响空气的影响空气中的氧易使还原性试剂氧化而破坏。强碱性试剂易吸收二氧化碳而变成碳酸盐，水分可以使某些试剂潮解、结块；纤维、灰尘能使某些试剂还原、变色等。温度的影响温度的影响：试剂变质的速度与温度有关。夏季高温会加快不稳定试剂的分解；冬季严寒则促使甲醛聚合而沉淀变质。光的影响日光中的紫外线能加速某些试剂的化学反应而使其变质（例如银盐、汞盐、溴和碘的钾、钠、铵盐和某些酚类试剂） 。杂质的影响不稳定试剂的纯净与否、对其变质情况的影响不容忽视。例如纯净的溴hua汞实际上不受光的影响，而含有微量溴化亚汞或有机物杂质的溴hua汞遇光易变黑。贮存期的影响不稳定试剂在长期贮存后可能发生歧化聚合，分解或沉淀等变化。在贮存期和有效期内液体如发现有分层、浑浊、变色、发霉等异常现象，流动相用于样品检测时，样品的保留时间或相对保留时间发生明显变化，固体如发现吸潮、变色等异常现象则应停止使用。使用对有效期影响依据使用的要求对化学试剂的有效期做出判断，最重要的一点是判断试剂对结果是否有影响，有影响需要缩短有效期，甚至是报废。

实验室的玻璃器皿各种各样，尤其是化学实验室，每天都要跟这些瓶瓶罐罐打交道，使用它们该注意些什么呢？ shou先将化学实验室仪器按是否可以加热简单归一下类： A.不能加热：量筒、集气瓶、漏斗、温度计、滴瓶、表面皿、广口瓶、细口瓶等； B.能直接加热：试管、蒸发皿、坩埚、燃烧匙； C.间接加热：烧杯、烧瓶、锥形瓶；玻璃器皿用途（1）试管常用做:①少量试剂的反应容器；②也可用做收集少量气体的容器；③或用于装置成小型气体的发生器。（2）烧杯主要用于：②解固体物质、配制溶液以及溶液的稀释、浓缩；②也可用做较大量的物质间的反应。（3）烧瓶（圆底烧瓶，平底烧瓶）：①常用做较大量的液体间的反应；②也可用做装置气体发生器。（4）锥形瓶常用于:①加热液体；②也可用于装置气体发生器和洗瓶器；③也可用于滴定中的受滴容器。（5）蒸发皿通常用于溶液的浓缩或蒸干。（6）胶头滴管用于移取和滴加少量液体。注意：①使用时胶头在上，管口在下（防止液体试剂进入胶头而使胶头受腐蚀或将胶头里的杂质带进试液）；②滴管管口不能伸入受滴容器（防止滴管沾上其他试剂）；③用过后应立即洗涤干净并插在洁净的试管内，未经洗涤的滴管严禁吸取别的试剂；④滴瓶上的滴管必须与滴瓶配套使用。（7）量筒用于量取一定量体积液体的仪器。①量筒内稀释或配制溶液，决不能对量筒加热；②在量筒里进行化学反应。注意：在量液体时，要根据所量的体积来选择大小恰当的量筒（否则会造成较大的误差），读数时应将量筒垂直平稳放在桌面上，并使量筒的刻度与量筒内的液体凹液面的最低点保持在同一水平面。（8）托盘天平是一种称量仪器，一般精确到0.1克。注意：称量物放在左盘，砝码按由大到小的顺序放在右盘，取用砝码要用镊子，不能直接用手，天平不能称量热的物体, 被称物体不能直接放在托盘上，要在两边先放上等质量的纸，易潮解的药品或有腐蚀性的药品（如氢氧化钠固体）必须放在玻璃器皿中称量。（9）集气瓶①用于收集或贮存少量的气体；②也可用于进行某些物质和气体的反应。（瓶口是磨毛的）（10）广口瓶（内壁是磨毛的）常用于盛放固体试剂，也可用做洗气瓶。（11）细口瓶：用于盛放液体试剂，棕色的细口瓶用于盛装需要避光保存的物质，存放碱溶液时试剂瓶应用橡皮塞，不能用玻璃塞。（12）漏斗用于向细口容器内注入液体或用于过滤装置。（13）长颈漏斗用于向反应容器内注入液体，若用来制取气体，则长颈漏斗的下端管口要插入液面以下，形成“液封”，（防止气体从长颈斗中逸出）。（14）分液漏斗主要用于分离两种互不相溶且密度不同的液体，也可用于向反应容器中滴加液体，可控制液体的用量。（15）试管夹用于夹持试管，给试管加热，使用时从试管的底部往上套，夹在试管的中上部。（16）铁架台用于固定和支持多种仪器，常用于加热、过滤等操作。（17）酒精灯：①用前先检查灯心，绝对禁止向燃着的酒精灯里添加酒精；②也不可用燃着的酒精灯去点燃另一酒精灯（以免失火）；③酒精灯的外焰最高，应在外焰部分加热先预热后集中加热；④要防止灯芯与热的玻璃器皿接触（以防玻璃器皿受损）；⑤实验结束时，应用灯帽盖灭（以免灯内酒精挥发而使灯心留有过多的水分，不仅浪费酒精而且不易点燃），决不能用嘴吹灭（否则可能引起灯内酒精燃烧，发生危险）；⑥万一酒精在桌上燃烧，应立即用湿抹布扑盖。（18）玻璃棒用做搅拌（加速溶解）转移，如pH的测定等。（19）燃烧匙。（20）温度计刚用过的高温温度计不可立即用冷水冲洗。（21）药匙用于取用粉末或小粒状的固体药品，每次用前要将药匙用干净的滤纸揩净。玻璃器皿的基本操作（1）药品的取用：“三不准”①不准用手接触药品；②不准用口尝药品的味道；③不准把鼻孔凑到容器口去闻气味。注意：已经取出或用剩后的药品不能再倒回原试剂瓶，应交回实验室。A.固体药品的取用取用块状固体用镊子（具体操作：先把容器横放，把药品放入容器口，再把容器慢慢的竖立起来）；取用粉末状或小颗粒状的药品时要用药匙或纸槽（具体操作：先将试管横放，把盛药品的药匙或纸槽小心地送入试管底部，再使试管直立）。B.液体药品的取用取用很少量时可用胶头滴管，取用较多量时可直接从试剂瓶中倾倒（注意：把瓶塞倒放在桌上，标签向着手心，防止试剂污染或腐蚀标签，斜持试管，使瓶口紧挨着试管口）。（2）物质的加热给液体加热可使用试管、烧瓶、烧杯、蒸发皿；给固体加热可使用干燥的试管、蒸发皿、坩埚。A.给试管中的液体加热试管一般与桌面成45°角，先预热后集中试管底部加热，加热时切不可对着任何人。B.给试管里的固体加热：试管口应略向下（防止产生的水倒流到试管底，使试管破裂）先预热后集中药品加热。注意：被加热的仪器外壁不能有水，加热前擦干，以免容器炸裂；加热时玻璃仪器的底部不能触及酒精灯的灯心，以免容器破裂。烧的很热的容器不能立即用冷水冲洗，也不能立即放在桌面上，应放在石棉网上。（3）过滤是分离不溶性固体与液体的一种方法（即，一种溶，一种不溶，一定用过滤方法）如，粗盐提纯、氯化钾和二氧化锰的分离。操作要点：“一贴”、“二低”、“三靠”；“一贴” 指用水润湿后的滤纸应紧贴漏斗壁；“二低”指②纸边缘稍低于漏斗边缘；②滤液液面稍低于滤纸边缘；“三靠”指①烧杯紧靠玻璃棒；②玻璃棒紧靠三层滤纸边；③漏斗末端紧靠烧杯内壁。（4）仪器的装配装配时，一般按从低到高，从左到右的顺序进行。（5）检查装置的气密性先将导管浸入水中，后用手掌紧物捂器壁（现象：管口有气泡冒出，当手离开后导管内形成一段水柱。（6）玻璃仪器的洗涤如仪器内附有不溶性的碱、碳酸盐、碱性氧化物等，可加稀盐酸洗涤，再用水冲洗。如仪器内附有油脂等可用热的纯碱溶液洗涤，也可用洗衣粉或去污粉刷洗。清洗干净的标准是：仪器内壁上的水即不聚成水滴，也不成股流下，而均匀地附着一层水膜时，就表明已洗涤干净了。（7）常用的意外事故的处理方法A.使用酒精灯时，不慎而引起酒精燃烧，应立即用湿抹布。B.酸液不慎洒在桌上或皮肤上应用碳酸氢钠溶液冲洗。C.碱溶液不慎洒在桌上应用醋酸冲洗，不慎洒在皮肤上应用硼酸溶液冲洗。D.若浓硫酸不慎洒在皮肤上千万不能先用大量水冲洗。气体的制取、收集（1）常用气体的发生装置A.固体之间反应且需要加热，用制O2装置（NH3、CH4）；一定要用酒精灯。（2）常用气体的收集方法A.排水法适用于难或不溶于水且与水不反应的气体，导管稍稍伸进瓶内，（CO、N2、NO只能用排水法）；B.向上排空气法适用于密度比空气大的气体（CO2、HCl只能用向上排空气法）；C.向下排空气法适用于密度比空气小的气体。排气法：导管应伸入瓶底。（3）气体的验满：O2的验满：用带余烬的木条放在瓶口。CO2的验满：用燃着的木条放在瓶口。证明CO2的方法是用澄清石灰水。注意事项（1）试管夹应夹在的中上部，铁夹应夹在离试管口的1/4处。（2）加热时试管内的液体不得超过试管容积的1/3，反应时试管内的液体不超过试管容积的1/2。（3）使用烧瓶或锥形瓶时容积不得超过其容积的1/2，蒸发溶液时溶液的量不应超过蒸发皿容积的2/3；酒精灯内的酒精不得超过其容积的2/3，也不得少于其容积的1/4。（4）在洗涤试管时试管内的水为试管的1/2（半试管水）；在洗气瓶内的液体为瓶的1/2；如果没有说明用量时应取少量，液体取用1-2毫升，固体只要盖满试管的底部；加热试管内液体时，试管一般与桌面成45°角，加热试管内的固体时，试管口略向下倾斜。

样品称量是分析实验的重要环节，称量不准确会导致整个实验失败。当你老是称不准时，你有好好分析是什么原因造成的吗？总的来说，实验室分析样品称量不准确的原因有很多种，大体可分为分析天平没校准、环境及样品物理因素影响和操作不当等3个方面的原因。所以，称不准就从这几方面来找原因。1.分析天平在使用前没有经过校准。一台分析天平在使用之前，首先要确认它的正确性是否合格，否则该天平所称量的正确性得不到保证。天平的正确性是指天平横梁两臂相等的精确程度以及3个刀刃的等距、平行的精确程度。分析天平从shou次使用起，应对其定期校准。连续使用的天平，大约每星期校准一次。校准时应按规定程序进行，必须使用标准砝码进行校准，否则将起不到校准的作用。2.分析天平安装不正确。在安装分析天平时首先要选择选防尘、防潮、防震、防风、防晒、恒温的房间作为天平室。其次，天平应安放在牢固可靠的工作台上，并选择适当的位置安放。天平安装前，应按装箱清单进行清点，看各部件是否齐全、完好，并对天平的所有部件进行仔细清洁。安装时，应参照天平的说明书正确装配天平。安装完毕后应再次检查各部分安装是否正常，然后检查电源电压是否符合天平的要求，打开天平检查是否正常。3.环境及样品的物理因素影响。在使用分析天平进行称量的过程中，环境和物理因素会对称量结果产生干扰，如温度、样品挥发、吸湿、磁力、静电等的干扰。1）温度的变化对分析天平的影响如果在称量过程中发现显示值单方向漂移，就有可能是温度变化所产生的影响。若样品与周围环境之间的温度存在差异，则这个温度差异就会导致沿称重容器流动的气流。空气沿着容器外侧流动产生一个向上的作用力，这个力就导致称重结果产生错误：样品在动态浮力作用下，称得的重量比实际要轻。这个作用直到温度平衡形成以后才会终止。当把样品从干燥炉或冰箱中取出以后，要等到样品温度与实验室或称量室温度一致时才可以称量。样品要放在表面积尽可能小的去皮容器中，取放称量容器要使用镊子夹取，而不能将手放入称量室中。2）样品吸湿或挥发对称量结果的影响如果在称量的过程中显示值单方向持续漂移，则可能测量的是挥发性或吸湿性样品。若样品吸湿性较强，则重量会增大；若被测量样品属易挥发物质，则重量会减小。对于吸湿性或挥发性样品可使用细颈容器，给容器加盖或上塞，使用清洁干燥的称重容器并保持称盘上不粘有灰尘、污染物及水滴。3）样品或容器带静电对称量结果的影响如果每次称量都显示不同的称量结果或显示值不稳定，或称量结果的重复性差，则可考虑是称量容器或者样品带有静电。静电现象的影响将使每次称量时称重容器均显示不同的重量，结果的重复性很差。具有高绝缘度的材料如玻璃、塑料制的称重容器等容易带静电。这种带电现象主要是由于样品或容器在搬运过程中搅拌或摩擦产生的，而且一旦带电则排除电荷会非常缓慢，在相对湿度低于40%的干燥空气中出现样品或容器带静电的几率会增加。通常可采用打开加湿器或适当调节空调系统来增加空气湿度，把称重容器放在金属容器内再进行称量，设法给分析天平接地等措施，来去除或屏蔽称重样品上的静电。4.使用者操作不当造成称量不准确称量前没有检查，盲目称量。称量前应检查天平是否正常，天平是否水平，称盘是否洁净，圈码指数盘是否在“000”位，圈码有无脱位，吊耳有无脱落、移位等。检查和调整天平的空盘零点，可用横梁平衡螺丝粗调并用投影屏调节杠微调。1）在分析天平开启状态下进行取放称量物和增减砝码的操作。一般分析天平加、减砝码或取、放称量物必须在天平处于关闭状态下进行。在称量过程中一直是半开启天平，直到最后一刻才可完全开启天平。2）使用者在转动读数盘时操作不稳，导致挂码脱落或缠绕。使用天平上的机动开关，如开启和关闭天平、加减天平挂码等，必须缓慢均匀地转动。根据所称物重，用取中法则缓慢平稳地转动砝码旋钮，用最简捷的操作加减砝码。3）称量时用手直接取放称量物。。如果称量时用手直接取放称量物，会使手上的汗渍污渍粘到称量物上，造成称量误差，所以称量时不可直接用手接触称量物，一般可戴手套并用纸条取放称量杯。4）读数错误造成称量结果错误。。读数砝码确定后，全开天平旋钮，待标尺停稳后即可读数。称量物的质量等于砝码总量加标尺读数。砝码总量要依砝码从大到小依次相加，最后和标尺读数相加。

化学试剂是实验室的必备溶液，根据种类不同具有不同的特性，如易燃、易爆、氧化性、毒性、见光易分解等，因此用于储存试剂的试剂瓶也种类繁多。由于化学试剂的各种特性，稍有不慎容易造成安全事故，所以试剂瓶在使用时应注意以下问题。1、 实验人员应熟知最常用的试剂性质，并注意保护试剂瓶的标签，以免混淆试剂类型；2、 为保证试剂不受沾污，应当用清洁的牛角勺从试剂瓶中取出试剂，取出试剂不可倒回原瓶；3、 不可用鼻子对准试剂瓶口猛吸气，如需嗅试剂的气味，可将瓶口远离鼻子，用手在试剂瓶上方煽动，使空气吹向自己而闻出气味，严禁用舌头品尝试剂；4、 在夏季易挥发的试剂瓶不好打开，可将瓶子在冷水中浸一段时间，避免因室温高瓶内气液冲击造成危险，取完世纪后要盖紧塞子，放出有毒、有味气体的瓶子还应用蜡封口；5、废弃的试剂瓶不能随意丢弃，应在冲洗后集中处理。以上是试剂瓶在使用时的一些注意事项，实验室的安全不止需要注意试剂瓶的使用，在实验中各种细微的事情都要做到谨慎处理，避免安全事故的发生。

在生物科研这个领域里，很多小伙伴都会接触到质粒这个小东西，而当你费尽千辛万苦后找到这个小东西的图谱时，你就会发现图谱上有很多乱七八糟的箭头，还有很多英文的序列，比如像什么ORI啊，Amp啊等等，那这些东西究竟是什么意思呢，今天小编就在这里为大家详细解答一番。首先要为大家介绍下质粒图谱包含的四大要素1.复制起点：控制着质粒的复制，并决定了质粒的宿主和拷贝数2.筛选标记：多为抗性基因，以便加以检测筛选3.多克隆位点：外源基因的插入位点4.其他元件：如转录调控元件、翻译表达元件和蛋白标签等以下就用大家常用的pcDNA3.1(+)表达载体作为案例第一步：了解质粒图谱中的复制起点如上图谱中的ori表示质粒的复制起点。质粒的复制起点决定了质粒的宿主及质粒的拷贝数相关。若图谱上只有一个ori，表示质粒是原核克隆及表达质粒。而图谱上有两个ori，则表示该质粒是穿梭质粒，既可以在原核也可以在真核中复制。第二步：了解质粒图谱中的筛选标记图谱中的AmpR、KanR等表示质粒载体中的筛选标签，多为抗生素抗性基因，方便后续通过抗生素筛选阳性克隆。只存在单抗性的质粒多为原核克隆载体和原核表达载体。而存在两种或以上的抗性的多为穿梭质粒。第三步：了解质粒图谱中的多克隆位点图谱中的MCS区或者许多内切酶集中的部分，就是质粒的多克隆位点。多克隆位点为一系列限制性内切酶酶切位点，是外源DNA的插入位点，一般可通过酶切后连接的方式将外源DNA插入质粒。多克隆位点一般位于转录启动和转录终止信号之间。第四步：了解质粒图谱中其它元件质粒载体中除复制起始位点、筛选标记、多克隆位点外，还具有其他一些表达或调控元件，如转录调控元件、翻译调控元件和融合表达标签蛋白等。比如：蛋白纯化标签蛋白：His-Tag，GST-tag等蛋白检测标签蛋白：Myc-Tag，Flag-Tag，HA-Taq等荧光蛋白表达标签：GFP，mCherry等

细胞培养被支原体污染是个世界性问题，在细胞培养中支原体感染发生率达到63%。支原体是一类无细胞壁，形态呈高度多形性，为圆形、丝状或梨形，其直径仅有0.13～0.18μm，变形能力大，故能通过滤菌器，最tu出的结构特征是没有细胞壁，对作用于细胞壁生物合成的抗生素不敏感。研究表明，支原体能耗尽营养物，促进代谢积累，导致pH改变，对细胞造成多种影响，包括生长状况、生化特性、代谢、免疫、以及细胞存活等多方面的改变，继而干扰实验结果，或造成无法解释的差异。更加不幸的是拯救被感染的细胞几乎是不可能的。那如何检测你的细胞是否收到支原体的入侵呢？下面介绍了几种检测方式，或许对你的实验有用。分离培养法分离培养法是支原体检测的金标方法，其检测精确度最高。这种方法是从可疑的细胞培养体系中取样，并接种到最适宜支原体生长的琼脂平板上。如果样本中含有支原体，它们就会在这种琼脂平板上feng狂生长，最终形成明显可见的特征性菌落。分离培养法基本不会出现假阴性结果，因此被誉为支原体检测金标准。但是，分离培养法也存在两个弊端，一是检测时间太长，支原体要长出明显克隆至少需要4周时间。二是尽管可以检测绝大多数支原体种类，分离培养法也有力所不及的时候，例如支原体M. hyorhinis。DNA检测法，也称直接培养法将可疑样品与指示细胞共同培养，一般需要几天时间。DNA检测所用的指示细胞通常是细胞质区域较大的Vero细胞，如果原样本中含有支原体，那么当细胞DNA被荧光染料（如Hoechst染料）染色时，就可以在指示细胞的核周围观察到荧光斑点或荧光颗粒。但是这种方法灵敏度太低，当检测成阳性时，细胞经常已经严重污染。且Hoechst荧光染色：操作复杂，操作不当易造成假阳性或假阴性。PCR法市面上有许多商机提供基于PCR的支原体检测试剂盒，如GeneCopoeia。这种方法已经比较成熟，应用的范围也较为广泛。PCR法采用针对支原体DNA的引物用PCR检测可疑样本，其PCR引物可特异扩增支原体基因组中rDNA保守序列，包括所有已知的支原体，及细胞培养过程普遍遇到的种属，例如M. arginini、M. arthritidis、M. bovis、M. fermentans、M. genitalium、M. hominis、M. hyorhinis、M. neurolyticum、M. orale、M. pirum、M. pneumoniae、M. pulmonis、M. salivarium 和U. urealyticum。在凝胶电泳过程中，支原体DNA会显示为特异性条带，以此指示支原体的存在。PCR法快速，简便，具有强扩增能力和极高的敏感性，可以检测大多数支原体，但谨慎起见最好同时使用另一种检测方法来进行验证。PCR法检测支原体只需几个小时，是最快但也是最不灵敏的支原体检测方法。酶学检测酶学检测是将可疑样本添加到特定底物中，在这一体系内支原体的酶可以将ADP转化为ATP，随后能利用ATP发光的luciferase酶就可以指示支原体的存在。最后，建议进行定期检测支原体感染会影响细胞的正常生长，因此对培养细胞定期进行支原体检测非常重要。一般来说每1至3个月就应该进行一次支原体检测。将定期支原体检测常规化坚持下去，是细胞培养实验室应对支原体感染的关键。

我们都知道，细胞如果要长期保存，需要冻存起来放液氮保存。那怎么样冻存细胞才能保证细胞能正常复苏，不至于冻存死亡呢？下面我们就来讲讲细胞冻存应该注意的一些地方。1. 保持冻存前细胞状态良好冻存前一定要保证细胞状态良好，细胞处于对数生长期，否则不管后面怎么处理，冻存后的细胞状态必然有影响。若细胞密度偏高，培养基已经略微变黄，细胞状态正常，需要换液培养2h以上再冻存细胞；若已完全变黄，细胞死亡超过20%，需要传代后再重新培养至状态正常后再冻存细胞。2. 消化、吹打细胞按尽量轻柔如何正确消化、吹打细胞在前面已经讲过了，有兴趣的话可以到以往文章里看看，这里就不再赘述了。冻存后细胞培养瓶和培养皿肯定还是会残留一点细胞，这些残留的细胞加新的培养基继续培养，如果培养正常就可以看出冻存时消化、吹打操作是没有问题的，如果直接死了或者状态不好，那冻存的细胞自然也好不到哪里去，问题出在哪就很明显了。3. 冻存液配方要给合适的冻存液配方这个其实不同实验室都有自己的习惯，有FBS+10%DMSO的，也有完全培养基+10%DMSO的，还有基础培养基+血清+DMSO=7:2:1 6:3:1 5:4:1，可以说是五花八门，但总体来说，DMSO一般是不超过12%的，血清浓度越高冻存效果也越好，因此需要多冻几次对比合适的配方。4. 冻存液要提前配置冻存液使用时要提前配好，不能直接在细胞悬液中加DMSO冻存细胞，否则DMSO溶解时浓度不均加上溶解放热会损伤细胞活性。可以现配先用，也可以多配一点，4度最多可以保存3个月，-20度可以保存一年。细胞用冻存液重悬后应尽快放到4度或者程序性冻存盒开始冻存，避免长时间室温状态，因为室温条件下DMSO对细胞是有害的。5. 冻存细胞数量选择通常来说，冻存细胞都会有一部分细胞死亡，所以冻存剩下的活细胞数量才是决定细胞复苏后能否正常养起来的关键。一般冻存不容易死的细胞数量每管在100-200万就够了，一些冻存很容易死的细胞，比如NK92、THP-1、SF9等细胞数量要稍微高点，300-400万左右为宜。冻存液一般1ml左右每管，这个基本每个实验室都差不多。6. 冻存程序选择冻存的时候可以选择用程序性冻存盒直接放到-80度冻存细胞，但要记得异丙醇要及时更换，一般用4-5次异丙醇含水量就超标了，不再适合冻存细胞使用。也可以将冻存管依次在4度10min，-20度2h，-80过夜后液氮保存。-80度不适合细胞长期保存，只能短期保存，最好不要超过一周，否则有部分细胞系活性可能会下降很厉害，长期保存的细胞最好放液氮罐保存。7. 注意冻存检查冻存细胞后应在同一批次内随机选一只细胞复苏检测冻存效果， 如果复苏效果不佳的话需要找到问题所在摸索合适条件重新冻存细胞，如果复苏良好的就可以放到液氮里长期保存了。这个也是前面推荐将冻存剩下的细胞继续培养的原因，可以有效避免细胞冻存失败导致绝种

重组蛋白表达技术可以用来分析基因调控以及研究蛋白质结构和功能。无论是体内功能研究还是用于结构研究的大规模生产，以及生物治疗领域的药物开发都需要用到蛋白表达技术。蛋白质通用合成路径DNA —>mRNA—> 蛋白实际操作流程为1. 克隆或合成目的基因2. 载体构建3. 蛋白表达与纯化4. 蛋白的大量表达与纯化（或无）克隆或合成目的基因典型的表达载体包括至少 4 个主要元件：目的基因表达框（包括启动子和基因终止或 poly (A) 信号）细菌的复制起始点（ori）特定宿主的抗生素选择框（如潮霉素 B、霉酚酸、嘌呤霉素、杀稻瘟菌素 S 等）大肠杆菌的抗生素选择框（如氨苄青霉素、杀稻瘟菌素 S、羧苄青霉素、Zeocin 选择性抗生素抗性等）不同蛋白表达系统选择其他元件还包括：多克隆位点（MCS）（即多酶切接头）表位标签分泌信号蛋白酶识别位点内部核糖体插入位点（IRES）几种常见的蛋白表达案例蛋白表达是许多小伙伴的实验课题中的主要内容。由于涉及不同的研究领域，表达载体多种多样，每个人要表达的蛋白特性更是千差万别，特别是一些小伙伴是第一次做课题，关于怎样表达蛋白，怎样安排实验步骤更是一头雾水。这里按照不同表达载体，列举最常用的重组蛋白表达方案。对每一种蛋白表达案例从实验步骤、大只需用时间以及每个步骤需要完成的目标进行比较，大家可以对照自己的实验内容，希望能有所帮助。常用的蛋白表达（含细胞株的制备）：CHO 稳定细胞株开发HEK293 稳定细胞株开发原核蛋白表达哺乳动物细胞瞬时表达酵母蛋白表达杆状病毒与昆虫细胞蛋白表达重组蛋白技术方案1. CHO 稳定细胞株开发2. HEK293 稳定细胞株开发3. 原核蛋白表达流程4. 哺乳动物细胞瞬时表达流程5. 酵母蛋白表达流程6. 杆状病毒 - 昆虫细胞蛋白表达流程7 不同蛋白表达之比较以上实验方案的完成时间是较为成熟的实验室的工作流程用时，小伙伴可以根据自己的实验安排灵活掌握。完成目标也应该根据自己的课题要求进行适当增减。

微生物标本采集的基本原则1.采集时机临床发现感染或疑似感染病例，应在抗菌药物使用前及时采集标本，已用抗菌药物者蕞好在停用抗菌药物后采样，不能停药者在下次给药前采样。蕞好在发病早期、急性期或症状典型时采样，应根据感染部位选送不同来源的标本，不必过分强调晨痰和晨尿，确保在抗菌药物使用前和2小时之内能够送达实验室更重要。2.无菌操作应严格执行无菌操作，避免标本污染。血培养瓶或运送培养基应现用现领，避免在病房内存放时间过长而被污染或失效。标本容器使用检验科指定的容器，须经灭菌处理，宜采用压力蒸汽等物理灭菌方法，不得使用化学消毒剂灭菌。用外表面非无菌试管留取标本前后，需将试管口置于火焰上消毒。采集无菌标本时应注意对局部及周围皮肤的消毒，如穿刺，对于与外界相通的腔道，不应从腔道口取标本，应从底部取组织检查。如使用消毒液消毒皮肤，需作用一定时间，待其干燥后采样。3.采集方法应根据不同目的菌的特性，用不同的方法采集。混有正常菌群的标本，不可置肉汤培养基内送检，如痰液、尿液、伤口拭子等；对于阳性率检出低的标本，床旁接种可提高病原菌阳性检出率；对血液、脑脊液等无菌部位的标本，可以先用肉汤培养基增菌，阳性后再转种平板分离培养。4.标本采集量和次数采集量不应过少，血液采集量应与培养基保持不少于1.5比例。病原学检查原则上一天采样送检一次，血培养应该同时在2个部位分别穿刺采血。5.标本种类提倡多采集血、脑脊液、胸腹水等来自无菌部位、临床价值高的标本，对来自痰、尿、脓等有菌部位的标本，采样时需注意避免正常菌群的污染，必须排除污染才有临床价值。6.标签和申请单注明患者信息、临床诊断、抗菌药物使用情况、标本种类、采集时间、部位和检验目的。7.职业安全防护做好个人防护，必须戴手套、口罩，穿工作服，必要时戴面具和护目镜。严格按操作规范操作，避免病原菌传播。

新冠病毒疫情引发全民对生物安全的高度关注。国家从战略层面上颁布并实施《生物安全法》，加强生物资源进出口监管和提高国家生物安全监管能力。作为生物安全监管的重要部分，与科研人员密切相关的实验室安全也被纳入《生物安全法》。细胞培养是实验室常见技术手段之一，广泛应用于生物制药、细胞治疗等领域，其关键原料胎牛血清是动物源产品，以进口为主，安全性更是备受关注。如何选择正品行货血清？要从以下几个方面考虑：血源地中国国家质量监督检验检疫总局2017年第94号文，中国只允许进口来源于澳大利亚、新西兰和乌拉圭的血清，其它国家或地区历史上发生过疯牛病、蓝舌病等牛病疫情，不允许进口。也就是说凡是来源于这3个地区外的血清都是非法走私产品。走私及不明来源血清可能携带有多种牛源病毒，干扰细胞生长，导致实验结果失败；同时影响实验者健康。海关检疫疫情期间，中国海关对进口产品加强安全管控，血清作为冷链运输产品，入境时会做消毒处理和外包装新冠病毒核酸检测。正规进口的血清，经中国海关检疫合格后会提供《中华人民共和国进口货物报关单》和《中华人民共和国出入境检验检疫入境货物检验检疫证明》，乌拉圭来源的血清还必须具有出口许可证。品质中国海关曾多次截获非法入境胎牛血清，走私或水货血清往往未经严格冷链运输，导致血清反复冻融，颜色偏红或沉淀，品质不能保证，影响实验结果。更重要的是，走私的胎牛血清来源不明，胎牛血清采血环境和技术缺乏保障，未经检疫的血清中可能携带病原微生物，如支原体、噬菌体、病毒等，给使用人员的生命健康以及下游生物制品带来重大安全隐患。走私血清危害众多，如何练就一双“火眼金睛“，完美避开“走私陷阱”，小编给您提供几个鉴别小技巧：1. 产品标签上不写“原产地”的血清多为走私货。一些非法进口的血清会通过隐藏产地信息回避血源地。2. 产品标签上写“南美”或“S. America”可视为走私血清。南美国家中，中国允许进口血清的只有乌拉圭，将产地标记为“南美”巧妙地避重就轻，此类血清很可能来自巴西等疫区国家。3. 发票上产品名称不是“胎牛血清”或“血清”，可以视为走私血清。4. 核对厂家是否能提供购买批次的进口报关单和检验检疫证书，乌拉圭进口的血清，还需要提供乌拉圭出口许可证。

血清在细胞培养中对细胞的生长增值具有难以替代的作用，那么血清是如何在细胞培养中发挥作用，对血清瓶包装又有哪些要求呢？血清的功能：1、血清中的主要物质为蛋白质，白蛋白等具有缓冲细胞培养液酸碱度、维持渗透压的作用；2、转铁蛋白、甲状腺素结合蛋白等结合蛋白，有识别维生素、脂类、金属和其它激素等，并能与有毒金属和热原质结合，从而起到解毒作用；3、纤维粘连素、胎牛血清中的胎球蛋白、贴壁因子等能促进细胞贴壁、铺展；4、多肽类如血小板促生长因子、成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子、胰岛素、类胰岛素生长因子、促生长激素、氢化可的松等能支持细胞分裂增殖并维持细胞对数生长；5、巨球蛋白等蛋白酶抑制剂能抑制蛋白酶，保护细胞不受损害；6、血清中还含有丰富的氨基酸、葡萄糖、酮酸及与蛋白相结合状态的微量元素等，对细胞培养均有意义。对血清瓶的要求：血清具有复杂的成分和重要功能，所以血清的保存和使用显得非常重要。在血清瓶的选择上一般要求瓶体透明，无DNA酶、无RNA酶、无热源等影响细胞生长的物质，密封防渗漏。值得注意的是，血清一般需要在-5℃至-20℃环境中储存，因此血清瓶的材料还必须满足耐低温的特性。