一、指示剂分类：1、酸碱指示剂。指示溶液中H+浓度的变化，是一种有机弱酸或有机弱碱，其酸性和碱性具有不同的颜色。指示剂酸HIn在溶液中的离解常数Ka=[H+][In-]/[HIn]，即溶液的颜色决定于[In-]/[HIn]，而[In-]/[HIn]又决定于[H+]。以甲基橙(Ka=10-3.4)为例，溶液的pH4.4时，呈碱性，具黄色;而在pH3.1~4.4，则出现红黄的混合色橙色，称之为指示剂的变色范围。不同的酸碱指示剂有不同的变色范围。2、金属指示剂。络合滴定法所用的指示剂，大多是染料，它在一定pH下能与金属离子络合呈现一种与游离指示剂完全不同的颜色而指示终点。3、氧化还原指示剂。为氧化剂或还原剂，它的氧化形与还原形具有不同的颜色，在滴定中被氧化(或还原)时，即变色，指示出溶液电位的变化。4、沉淀滴定指示剂。主要是Ag+与卤素离子的滴定，以铬酸钾、铁铵矾或荧光黄作指示剂。在实际工作中，肉眼是难以准确地观察出指示剂变色点颜色的微小的改变。人们目测酸碱指示剂从一种颜色变为另一种颜色的过程，只能在一定的pH变化范围内才能发生，即只有当一种颜色相当于另一种颜色浓度的十倍时才能勉强辨认其颜色的变化。在这种颜色变化的同时，介质氢灭菌生物指示剂的pH值则由一个值变到另一个值。当溶液的pH值大于pKHIn时, [In-]将大于[HIn]且当[In-]/[HIn]=10时，溶液将完全呈现碱色成分的颜色，而酸色被遮盖了，这时溶液的 pH=pKHIn + 1。同理，当溶液的pH值小于pKHIn时, [In-]将小于[HIn]且当[In-]/[HIn]=1/10时，溶液将完全呈现酸色成分的颜色，而碱色被遮盖了，这时溶液的 pH=pKHIn - 1。可见溶液的颜色是在从pH=pKHIn - 1到 pH=pKHIn + 1的范围内变化的，这个范围称为指示剂的变色范围即变色域。在变色范围内，当溶液的pH值改变时，碱色成分和酸色成分的比值随之改变，指示剂的颜色也发生改变。超出这个范围，如pH≥pKHIn + 1时，看到的只是碱色;而在pH≤pKHIn - 1时，则看到的只是酸色。因此指示剂的变色范围约2个pH单位。由于人的视觉对各种颜色的敏感程度不同，加上在变色域内指示剂呈现混合色，两种颜色互相影响观察，所以实际观察结果与理论值有差别，大多数指示剂的变色范围小于2个PH单位。二、指示剂用量问题双色指示剂的变色范围不受其用量的影响，但因指示剂本身就是酸或碱，指示剂的变色要消耗一定的滴定剂，从而增大测定的误差。对于单色指示剂而言，用量过多，会使用变色范围向pH值减小的方向发生移动，也会增大滴定的误差。例如:用0.1mol/LnaOH滴定0.1mol/LHAc,pHsp=8.5,突跃范围为pH8.70-9.00,滴定体积若为50ml,滴入2-3滴酚酞，大约在pH=9时出现红色;若滴入10-15滴酚酞，则在pH=8时出现红色。显然后者的滴定误差要大得多。指示剂用量过多，还会影响变色的敏锐性。例如：以甲基橙为指示剂，用HCl滴定NaOH溶液，终点为橙色，若甲基橙用量过多则终点敏锐性就较差。三、常用指示剂的配制二苯胺磺酸钠指示液取二苯胺磺酸钠0.2g，加水100ml使溶解，即得。二苯偕肼指示液 取二苯偕肼1g，加乙醇100ml使溶解，即得。双硫腙指示液 取双硫腙50mg，加乙醇100ml使溶解，即得。石蕊指示液 取石蕊粉末10g,加乙醇40ml，回流煮沸1小时,静置，倾去上层清液，再用同一方法处理二次，每次用乙醇30ml，残渣用水10ml洗涤，倾去洗液，再加水50ml，煮沸，放冷，滤过，即得。变色范围 pH4.5~8.0(红→蓝)。甲酚红指示液 取甲酚红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液5.3ml使溶解，再加水稀释至100ml，即得。变色范围 pH7.2~8.8(黄→红)甲酚红-麝香草酚蓝混合指示液取甲酚红指示液1份与0.1%麝香草酚蓝溶液3份,混合，即得。甲基红指示液取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围 pH4.2~6.3(红→黄)。甲基红-亚甲蓝混合指示液取0.1%甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2%亚甲蓝溶液8ml，摇匀，即得。甲基红-溴甲酚绿混合指示液取0.1%甲基红的乙醇溶液20ml，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30ml，摇匀，即得。甲基橙指示液取甲基橙0.1g，加水100ml使溶解，即得。 变色范围 pH3.2~4.4(红→黄)。甲基橙-二甲苯蓝FF混合指示液 取甲基橙与二甲苯蓝FF各0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。邻二氮菲指示液取硫酸亚铁0.5g，加水100ml使溶解,加硫酸2滴与邻二氮菲0.5g,摇匀，即得。本液应临用新制。茜素磺酸钠指示液取茜素磺酸钠0.1g，加水100ml使溶解，即得。变色范围 pH3.7~5.2(黄→紫)荧光黄指示液取荧光黄0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。钙黄绿素指示剂 取钙黄绿素0.1g，加lv化钾10g，研磨均匀，即得。钙紫红素指示剂取钙紫红素0.1g，加无水硫酸钠10g,研磨均匀，即得。姜黄指示液取姜黄粉末20g，用冷水浸渍4次，每次100ml,除去水溶性物质后，残渣在100℃干燥，加乙醇100ml，浸渍数日，滤过，即得。结晶紫指示液取结晶紫0.5g，加冰醋酸100ml使溶解，即得。酚酞指示液取酚酞1g，加乙醇100ml使溶解，即得。 变色范围 pH8.3~10.0(无色→红)。铬黑T指示剂取铬黑T 0.1g，加氯化钠10g，研磨均匀，即得。淀粉指示液取可溶性淀粉0.5g，加水5ml搅匀后，缓缓倾入100ml沸水中，随加随搅拌，继续煮沸2分钟，放冷，倾取上层清液，即得。本液应临用新制。硫酸铁铵指示液取硫酸铁铵8g，加水100ml使溶解，即得。溴酚蓝指示液取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。 变色范围 pH2.8~4.6(黄→蓝绿)。溴麝香草酚蓝指示液取溴麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.2ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。 变色范围 pH6.0~7.6(黄→蓝)。麝香草酚酞指示液取麝香草酚酞0.1g，加乙醇100ml使溶解，即得。变色范围 pH9.3~10.5(无色→蓝)。麝香草酚蓝指示液取麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液4.3ml使溶解，再加水稀释至200ml，即得。变色范围 pH1.2~2.8(红→黄);pH8.0~9.6(黄→紫蓝)。

1.质量与生物安全管理体系的建立实验室质量管理体系的建立是要有明确的目的及规范的管理，有效的制约和高效的机制， 能自我发展和完善的有机整体。在病原微生物实验室进行的检测工作的质量管理作为单位质量管理体系的有机组成部分有关生物安全方面的特殊要求包括：实验室准入，操作规范， 个人防护、 健康监护、 消毒效果评估， 菌毒种保管， 废弃物处理和意外处置、 实验室生物风险评估等各项生物安全规章制度应编入单位实验室质量体系文件;质量与生物安全管理体系必须确定总负责人， 明确管理部门， 检测部门、 保障部门、 部门职责、 相互关系以及各部门负责人的责任、权利和义务;生物安全管理委员会， 要建立生物安全监督员和内审员队伍， 定期进行生物安全督促检查;要求各部门执行本单位编制的实验室质量与生物安全管理体系文件，并按文件规定的程序开展各项管理活动， 维持体系的运行和改进。2.人员管理实验室生物安全工作的关键是人，实验室人员缺乏实验室生物安全意识， 将在各个环节产生暴露的风险。因此必须大力抓好实验室生物安全人才队伍建设。人员准入病原微生物实验室要严把准入关，用制度保证所有实验人员尤其是客座人员和新工作人员必须接受生物安全防护知识及实验室制度、 安全操作规程以及实验潜在的危险等相关内容培训并考核合格，持证上岗;在操作前签署生物安全《知情同意书》 ，并经实验室负责人批准后方能进入。一般情况下，易感人员或感染后会出现严重后果的人员，不允许进入实验室或动物房， 例如， 身体受到开放性损伤、患发热性疾病以及患有免疫缺陷或免疫抑制的人等。人员培训所有实验人员还必须每年更新知识，接受一次附加培训。培训方式可分为全员培训和专项培训，专项培训又有管理和操作两类。重点在防止气溶胶产生的操作， 锐器操作、 生物安全柜的使用、 防护用品穿戴、 样本运输、意外事故处理、 逃生演练等， 以达到增强生物安全防范意识的目的。健康监护实验室人员的健康监测也是病原微生物实验室实验室的一个重要工作，实验室应充分了解每个病原的生物危害性， 制定健康监护计划， 储备预防性药物。针对致病力、 传播力采取服药、 打免疫针的手段， 进行防范;对患病的实验人员要及时甄别， 只要其临床体征和所从事的病原相关就要进行干预和医疗管理， 提高预警能力。3.菌(毒)种和阳性样本的管理菌(毒)种和阳性样本在流转过程中既要保持生物的原始特性， 还要考虑也是传染源，既要避免意外暴露还要防止恶意利用或生物恐怖袭击。菌(毒)种和阳性样本的保存要按照国家相关规定， 一类或国家规定需上交国家菌(毒)种保藏单位的菌(毒)种应及时交送。对二、 三、 四类菌(毒)种和阳性样本要建立专门的、规范的保管室，实行双人双锁管理制度。注意保存场所和设施应具备一定的防盗能力， 人员进出能得到控制， 备有消毒、 急救和防护用品， 建立检查、 销毁和领用制度， 疑似样本和菌毒种的管理应参照执行。菌(毒)种和阳性样本的运输运送人员应熟悉相关的生物安全知识并采取相应安全防护措施。跨省运输可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)或样本时， 还必须将申请材料报省人民政府卫生主管部门审核同意后， 递交上级相关机构，颁发准运证书后， 方可运送。4.环境与设备管理按国 家标 准《实验室生物安全通用要求》(GB19489 －2008)对实验室生物安全实行分级管理。实验室环境与设施设备要求生物安全二级(BSL － II)实验室是使用最多、涉及最广的生物安全实验室， 除满足生物安全一级(BSL － I)实验室设施和设备要求外， 还应在实验室内配备生物安全柜，高压蒸汽灭菌器、 洗眼设施， 防止节肢、 啮齿动物进入的设计， 有可自动关闭门及可视窗， 防虫纱窗等。确保实验室设备的正常使用实验室设备和消耗材料应确保质量，制定操作规程， 合理使用， 规范操作。高浓度的感染材料必须在生物安全柜操作， 高压灭菌器要考虑放置地点， 锐器的使用和存放也应合乎要求， 消防器具不但在品种上要满足实验室的特殊要求，而且要在保质期内使用。5.废弃物安全管理废弃物安全管理是防止生物安全事件的重要一环。病原微生物实验室的培养物、储存物、 垃圾以及其他废弃物的处理和处置必须以安全为目的， 首先应就地消毒灭菌， 进行无害化处理， 利器还必须置于坚固、 防漏、 有盖的容器，密闭后运出实验室销毁。实验室不但要制定消毒制度，储备消毒剂， 而且要确保消毒剂的有效性并对消毒效果进行判定。6.个人防护和应急预案不同的防护等级要求不同的防护用品及管理要求。在生物安全二级(BSL － Ⅱ)实验室至少应有一套防护用品， 包括头部、 面部、 身体、手部、 足部防护等。实验室常用的防护手套， 防护服应制定一定的保有量和保质期检查制度， 避免到用时才发现没有防护用品或使用过期防护用品的情况。当发生实验室意外时，应执行应急预案， 服从现场指挥官的调度。在物资储备上做好准备， 主要是应急照明、 报警、 维护、 急救和消毒几个方面， 不仅要备好照明灯、报警电话号码、 工具箱、急救箱、 洗眼器、 紧急喷淋器、 消毒器械和消毒剂等物品， 并且在程序上还要对火警、 盗抢、 水险、 设备故障、 样本泄露和人员暴露或感染等各种情况的处理方法进行规定病原微生物实验室的安全性取决于实验人员的安全意识，实验室设施的建设， 防护设备的配置和管理体系的完善。领导重视， 建立管理队伍， 明确职能分工和部门职责， 加强培训和交流， 才能提高管理水平。

移液管是检化验经常使用的玻璃计量仪器，有各种形状，最普通的是中部吹成圆柱形，圆柱形以上及以下为较细的管颈，下部的管颈拉尖，上部的管颈刻有一环状刻度。移液管为精密转移一定体积溶液时用的。移液管的使用诀窍1、使用时，应先将移液管洗净，自然沥干，并用待量取的溶液少许荡洗3次。   2、然后以右手拇指及中指捏住管颈标线以上的地方，将移液管插入供试品溶液液面下约1cm，不应伸入太多，以免管尖外壁粘有溶液过多，也不应伸入太少，以免液面下降后而吸空。这时，左手拿橡皮吸球（一般用60mL洗耳球）轻轻将溶液吸上，眼睛注意正在上升的液面位置，移液管应随容器内液面下降而下降，当液面上升到刻度标线以上约1cm时，迅速用右手食指堵住管口，取出移液管，用滤纸条拭干移液管下端外壁，并使与地面垂直，稍微松开右手食指，使液面缓缓下降，此时视线应平视标线，直到弯月面与标线相切，立即按紧食指，使液体不再流出，并使出口尖端接触容器外壁，以除去尖端外残留溶液。  3、再将移液管移入准备接受溶液的容器中，使其出口尖端接触器壁，使容器微倾斜，而使移液管直立，然后放松右手食指，使溶液自由地顺壁流下，待溶液停止流出后，一般等待15秒钟拿出。    4、注意此时移液管尖端仍残留有一滴液体，不可吹出。刻度吸管的使用诀巧1、刻度吸管是由上而下（或由下而上）刻有容量数字，下端拉尖的圆形玻璃管。用于量取体积不需要十分准确的溶液。   2、刻度吸管有“吹”、“快”两种形式。使用标有“吹”字的刻度吸管时，溶液停止流出后，应将管内剩余的溶液吹出；使用标有“快”字的刻度吸管时，待溶液停止流出后，一般等待15秒钟拿出。  3、量取时，最好选用略大于量取量的刻度吸管，这样溶液可以不放至尖端，而是放到一定的刻度（读数的方法与移液管相同）。

实验原理2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。主要试剂1. BSA2. Bradford液3. DTT4. 0.05% 的溴酚兰5. IPG buffer (pH 3-10)主要设备1. 振荡器2. 高速离心机3. 紫外分光光度计4. 双向电泳设备实验材料纯化后的晶体蛋白实验步骤1. 样品的溶解取纯化后的晶体蛋白3.0mg，加入300ul裂解液(1mg蛋白:100ul裂解液)振荡器上振荡10min左右，共处理一个小时。其中每隔10～15分钟振荡一次，然后13200rpm离心15min除杂质，取上清分装，每管70ul，-80oC保存。2. Bradford法测蛋白含量取0.001g BSA（牛血清白蛋白）用1ml超纯水溶解,测定BSA标准曲线及样品蛋白含量。取7个10ml的离心管，首先在5个离心管中按次序加入0ul, 5ul, 10ul, 15ul, 20ul 的BSA溶解液，另2管中分别加入2 ul的待测样品溶液，再在每管中加入相应体积的双蒸水（总体积为80ul），然后，各管中分别加入4ml的Bradford液（原来配好的Bradford液使用前需再取需要的剂量过滤一遍方能使用），摇匀，2min在595nm下，按由低到高的浓度顺序测定各浓度BSA的OD值，再测样品OD值。(测量过程要在一个小时内完成)。例如：编号        蛋白量（ul）         Buffer(ul)         Bradford(ml)       OD595值1                0                   80                4                02                5                   75                4               0.0243               10                   70                4               0.0614               15                   65                4               0.0915               20                   60                4               0.116Bt4              2                   78                4               0.079Bt4              4                   76                4        转Bt4            2                   78                4               0.075转Bt4            4                   76                4        标准曲线方程式：Y= aX b.其中Y为 OD值，X为蛋白含量。 a、b通过作图输入数据可知，相关系数通过输入数据，作图，软件分析可得。OD值测量过程：比色皿用70%的乙醇保存，待用时用双蒸水冲洗，再用无水乙醇冲洗，双蒸水冲洗，再加入待测样品溶液润洗，然后，加入样品，测定OD值。3. 双向电泳第一向---IEF（双向电泳中一律使用超纯水）1) 水化液的制备称取2.0mg 的DTT，用700ul水化液储液溶解后,加入8ul 0.05% 的溴酚兰，3.5ul（0.5%v/v）IPG buffer (pH 3-10)振荡混匀，13200rpm离心15min 除杂质，取上清。在含300ug 蛋白（经验值）的样品溶解液中加入水化液，至终体积为340ul，振荡器上振荡混合,13200rpm离心15min除杂质，取上清。2) 点样，上胶分两次吸取样品，每次170ul, 按从正极到负极的顺序加入点样槽两侧，再用镊子拨开Immobiline  DryStrip gels (18cm，pH 3-10)胶条，从正极到负极将胶条压入槽中,胶面接触加入的样品。注意：胶条使用前，要在室温中平衡30分钟；加样时，正极要多加样，以防气泡的产生；压胶时不能产生气泡；酸性端对应正极，碱性端对应负极；样品加好后，加同样多的覆盖油(Bio-Rad)，两个上样槽必须与底线齐平。3)  IPG聚焦系统跑胶程序的设定（跑胶温度为20oC）S1 (30v, 12hr, 360vhs, step)S2 (500v, 1hr, 500vhs, step)S3 (1000v, 1hr, 1000vhs, step)S4 (8000v, 0.5hr, 2250vhs, Grad)S5 (8000v, 5hr, 40000vhs, step)       共计44110vhs, 19.5小时,其中S1用于泡胀水化胶条，S2和S3用于去小离子，S4和S5用于聚焦。4) 平衡用镊子夹出胶条,超纯水冲洗后，在滤纸上吸干（胶面，即接触样品那一面不能接触滤纸，如果为18cm的胶条要将两头剪去），再以超纯水冲洗，滤纸吸干（再次冲洗过程也可省略），然后用镊子夹住胶条以正极端（即酸性端）向下，负极端（即碱性端）向上，放入用来平衡的试管中（镊子所夹的是碱性端，酸性端留有溴酚兰作为标记），用平衡液A，平衡液B先后平衡15min。  注:平衡时要注意保持胶面始终向上,不能接触平衡管壁。平衡第二次时，在沸水中煮Marker 3min,剪两个同样大小的小纸片，长度与一向胶条的宽度等同，然后吸取煮好的Marker，转入SDS—PAGE胶面上，保持紧密贴合；同样在第二次平衡时，煮5%的琼脂糖10ml。4. 双向电泳第二向---SDS-PAGE1) 配胶(两根胶条所用剂量)分离胶：（T=8%  80 ml）：溶液于真空机中抽气后再加APS和TEMED30 % 丙烯酰胺储液    21.28ml分离胶buffer          20ml      10%APS 220ul     TEMED 44 ul双蒸水               38.72ml浓缩胶：（T=4.8%   10ml）30 % 丙烯酰胺储液    1.6ml浓缩胶buffer          2.5ml     10%APS 30ul     TEMED 5ul双蒸水               5.9ml2) 灌胶将玻璃板洗净后,室温晾干,然后,将电泳槽平衡好,玻璃板夹好,再在玻璃板底部涂上凡士林以防漏胶,倒入正丁醇压胶,凝胶后(这时会出现三条线),用注射器吸去正丁醇,超纯水洗两次,再用滤纸除水后,倒入浓缩胶,正丁醇压胶,凝胶后,用注射器吸去正丁醇,超纯水洗两次,再加入超纯水,用保险膜封好。3) 转移剪两个小的滤纸片，吸取Marker后，放入SDS—PAGE胶面的一端。然后，将平衡好的IPG胶条贴靠在玻璃板上,加少量的5%的琼脂糖溶液在胶面上(琼脂糖凝胶在转移前十几分钟的时候配好,水浴加热溶解,并保持烧杯中水处于沸腾状态,至用之前再拿出来),再将IPG胶条缓缓加入SDS—PAGE胶面,其中不断补加5%的琼脂糖溶液,注意不能产生气泡。4) 跑胶浓缩胶  13mA         分离胶  20mA        共约5.5个小时。5. 银染(两根胶条所用剂量)（银染特别注意用超纯水）1)  固定   30min    无水乙醇 200ml 乙酸50ml，用超纯水定容至500ml。2)  敏化   30min    无水乙醇 150ml。Na2S2O3?5H2O  1.5688g无水乙酸钠          34g  先用水溶解Na2S2O3?5H2O和乙酸钠,再加乙醇,最后定容至500ml。3)  洗涤   5min  ×  3次4)  银染   20min     AgNO3   1.25g   用超纯水定容至500ml5)  洗涤   1min  ×  2次6)  显影       无水Na2CO3    12.5g   用超纯水定容至500ml，甲醛(37%)0.1ml, 临时加。7)  终止   10min     EDTA—Na2?2H2O  7.3g  用超纯水定容至500ml。8)  洗涤   5min  ×  3次。注意事项整个双向电泳实验中全部使用超纯水，尽量减少离子的影响。

正确进行培养基质量控制，并作为一项经常性的工作，建立完整的检验资料，是实验室今后通过相应级别的认证，在整个检验质量控制体系中所必须具备的文件资料。1、常用培养基的质量控制检验项目与方法：对新批号的干燥培养基物理、化学及生物学指标鉴定。A：感官（外观）研细程度和颜色（溶解前后），透明度，杂质等。B：PH测定，按各种培养基要求的PH±0.2，蒸馏水的PH应在6.4-7.0之间。C：生物学指标检定，被检培养基相应细菌生长率测试；菌落大小及特征的检测。生长率测试：适用与液体和固体培养基：将菌培养液，用生理盐水做倍比稀释，取合适稀释度进行平板计数或接种被检的培养基试管，同时以按相关的培养基国标配方新鲜配制的培养基进行对照。不低与10%。菌落大小测试：划线分离测试菌，取10个菌落测量直径大小，其直径均值与新鲜配制的培养基无统计学差异。2、常用培养基质量标准外观和理化标准：干粉颜色：淡黄色粉末或呈现本培养基特有的颜色。溶解后培养基色泽：清晰透明（含琼脂除外）淡黄色或特有的色泽。灭菌后的培养基PH：7.2±2℃为多；个别弧菌检验用培养基pH值偏高为：8.0 ±2℃。生物学指标：菌落特征及菌落大小 。3、培养基保存环境制成的培养基保存环境为4℃冰箱，如制成平板则用塑料袋包装置冰箱保存。干燥培养基干粉含有活性物质、遇热易分解的物质应仔细查看存放条件，多数也须放在2-8 ℃条件保存。有的培养基则以存放于10-15 ℃条件为易。如含有高浓度胆盐的培养基。4、培养基制备控制程序培养基配制所用的仪器设备培养基配制所用的仪器设备必须经过相应的鉴定 。配制培养基所用的用具及容器配制培养基所用的用具及容器必须是清洁或是灭菌的，一些特殊不易洗刷清洁的玻璃器皿，必要时可用重铬/酸钾硫酸清洁浸泡后，取出置5%氢氧/化钠溶液浸泡数分钟，再用3%盐酸溶液进行中和，然后用清水冲洗，烘干后备用。5、培养基配制原料，试剂质量控制配制好的培养基（尤其是糖发酵管）不宜久放。因为培养培养基吸收空气中的二氧化碳，会使培养基变酸，从而影响细菌的生长。培养基中的抑制剂及指示剂一定要精确称量，抑制剂要注意合理配伍。6、培养基主要原料的质量控制配制培养基的主要原料有蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏、胆盐、无机盐和琼脂等，这些主要原料的有劣，直接影响到培养基的质量，由此也将影响检验质量。

　　由于细菌各自的酶系统不同，新陈代谢的产物也有所不同，而这些产物又各具有不同的生物化学特性。为此，可利用生物化学的方法来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的细菌，这种试验称为细菌的生化反应试验。　　1、在培养物中加入某种底物与指示剂，经接种、培养后，观察培养基的PH值变化。　　2、在培养物中加入试剂，观察它们同细菌代谢产物所生成的颜色反应。　　3、根据酶作用的反应特性，测定酶的存在。　　4、根据细菌对理化条件和药品的敏感性，观察细菌的生长情况。　　生化试验的注意事项　　1、待检菌应是新鲜培养物。培养18-24h。　　2、待检菌应是纯种培养物。　　3、遵守观察反应的时间。观察结果的时间，多为24或48小时。　　4、应做必要的对照试验。　　5、提高阳性检出率，至少挑取2-3个待检的疑似菌落分别进行试验。　　生化试验分类　　（一）糖类代谢试验　　（二）氨基酸和蛋白质代谢试验　　（三）有机酸盐和铵盐代谢试验　　（四）酶类试验

本文主要对大肠杆菌微生物检测培养基的配方及原理进行了介绍，为化学实验从业人员提供参考！1、 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)原 理：月桂基硫酸钠，别名月桂醇硫酸钠，表面活性作用强，具有乳化作用。一种优质蛋白胨，是以新鲜牛肉和牛骨经胰酶消化，浓缩干燥而成的浅黄色粉末。具有色浅、易溶、透明、无沉淀等良好的物理性状。含有丰富的氮源、氨基酸等胰蛋白胨或胰酪胨 20g 提供碳源和氮源满足细菌生长的需求 。配方：（g/L）2、 煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤（Brilliant Green Lactose Bile Broth）原理：胆盐（Bile Salt）：是一种胆酸的钠盐，是胆酸的羧基和甘氨酸或牛磺酸(C2H7NO3S)的氨基(C2H5NO2)，通过酰胺键结合而成。① 可降低培养基与细菌细胞膜界面上的表面张力，使细胞膜紊乱，导致细菌自溶。②肠杆菌科细菌在肠道内长期与胆汁接触。对胆盐有一定的抵抗力。合适的胆盐量能促进该科细菌的生长。③胆盐遇酸生成沉淀，使菌落色素不致扩散从而有利于鉴别。④ 胆盐中含有一定量的胆红素、粘蛋白、色氨酸，对不受胆盐抑制的细菌生长有营养作用。煌绿（亮绿）：抑制革兰氏阳性菌和大多数非沙门氏菌的革兰氏阴性杆菌，通常抑制发酵乳糖、蔗糖的细菌。煌绿和枸櫞酸钠对大腸菌的生长、菌体蛋白质的合成和糖的利用都有显著的抑制作用,以煌绿的作用为较强。枸酸钠能抑制大腸菌的呼吸,而煌绿的抑制作用则较弱。混合胆盐及硫代硫酸钠对大腸菌的上述代谢活动都没有抑制作用。配方：（g/L）用法：将蛋白胨、乳糖溶于约500 ml蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200 ml（将20.0 g 脱水牛胆粉溶于200 ml 蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975 ml，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3 ml， 用蒸馏水补足到1000 ml，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10ml 。121 ℃高压灭 15 min 。3、 伊红美蓝琼脂(EMB)Eosin-Methylene Blue Agar原理：伊红美蓝琼脂含有伊红和美蓝两种苯胺类染料，它们可以抑制革兰氏阳性菌的生长。伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。配方：（g/L）用法：称取本品 37.4g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶,121℃高压灭菌 15分钟, 备用。4、 EC肉汤 (E.Coli Broth)用途：用于粪大肠菌群、大肠杆菌的测定(GB2008、SN标准)配方：（g/L）5、 营养琼脂斜面 营养琼脂（NA）Nutrient Agar用途：细菌计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用(GB标准)。配方：（g/L）

　　自己购买干粉培养基配制后，总是会出现沉淀的现象。现总结可能是以下几种原因。　　一、称量错误　　天平称量不准确、计算称量错误导致配制培养基的浓度不正确，都有可能导致岀现部分沉淀。　　二、水质不佳　　多数培养基的制备需要使用纯化水、去离子水配制，而天然水中含有含有较多的矿物盐离子，若错误的使用了自来水，矿泉水配制，或使用的纯化水离子未除净，都有可能导致培养基灭菌后岀现浑浊现象或沉淀（磷酸盐含量高的培养基更易出现此类问题。　　三、培养基pH不正确　　偏酸或偏碱的pH有可能使培养基中的部分金属离子产生沉淀。　　四、容器不干净　　新开封的容器或容器清洗不干净，内壁留有杂质，都会导致灭菌后的培养基中有杂质出现。　　五、培养基本身有沉淀　　培养基配方中无机盐成分较多，或培养基本身含有不溶性成分，灭菌后会有沉淀存在，此为正常现象，不影响使用。例如MC、TTB、BS等，配方中含有不溶物，灭菌后有沉淀。　　六、溶解不充分　　培养基灭菌前应充分搅拌热至wan全溶解，方可进行灭菌。若灭菌前未将培养基溶解wan全就进行灭菌处理，灭菌后易出现絮状或团块状沉淀，如 Fraser培养基含有大量磷酸盐，若灭菌前未进行充分溶解，灭菌过程中磷酸盐易结成块灭菌后不溶解。　　七、灭菌方式不正确或灭菌过度　　含有不耐热成分的培养基，若灭菌过度或加热过度，都有可能导致灭菌后的培养基颜色不正确或岀现沉淀。如亚硒酸氢钠胱氨酸増菌液(SC)，正常制备好的培养基应为淡黄色透明液体，澄凊无沉淀，若加热过度则培养基中亚硒酸氢钠分最终制备的培养基会出现红色沉淀。　　八、添加剂加入时温度不正确　　卵黄、血液等对温度敏感的添加成分，若加入时温度过高或温差过大，易岀现凝块或絮状沉淀。

  定量分析的任务是测定物质中某种或某组分的含量。  一、定量分析过程通常包括:  1、试样的采取和制备、  2、称量和试样的分解、  3、干扰组分的掩蔽和分离、  4、定量测定和分析结果的计算和评价等  (1)取样:根据分析对象是气体、液体、或固体，采用不同的取样方法。在取样过程中，最重要的一点是要使分析试样具有代表性。试样制备:试样经过破碎、过筛、混匀、缩分后才能得到符合分析要求的试样。破碎分为粗碎、中碎和细碎甚至研磨。每次破碎后要使样品全部通过筛孔。缩分是使粉碎后的试样量逐步减少，采用四分法。将过筛后的试样混匀，堆为锥形后压为圆饼形状，通过中心分成四等份，弃去对角的两份。是否需要继续缩分，可按下述公式进行计算。mQ(kg):试样的最小质量;k:缩分常数的经验值，试样均匀度越差，越大，通常在0.05~1kg·mm-2之间。d(mm):试样的最大粒度直径。·采样与缩分试样量计算示例·例:采集矿石样品，若试样的最大直径为10mm，k=0.2kg/mm2,则应采集多少试样?·解:mQ≥kd2=0.2?102=20(kg)·例:有一样品mQ=20kg，k=0.2kg/mm2,用6号筛过筛,问应缩分几次解:mQ≥kd2=0.2?3.362=2.26(kg)缩分1次剩余试样为20?0.5=10(kg)，缩分3次剩余试样20?0.53=2.5(kg)≥2.26，故缩分3次。从分析成本考虑，样品量尽量少，从分析误差考虑，不能少于临界值mQ≥kd2  (2)试样分解和分析试液的制备  定量化学分析一般采用湿法分析，通常要求将干燥好的试样分解后转移入溶液中，然后进行分离及测定。试样分解和分析试液的制备要求:试样分解完全;待测物质不损失;避免引入干扰杂质。根据试样性质的不同，分解的方法亦不同。  溶解法→无机试样  熔融法→无机试样  微波消解法→无机试样  灰化法→有机试样  (3)分离及测定  根据待测组分的性质、含量和对分析结果准确度的要求，选择合适的分析方法。根据方法的灵敏度、选择性及适用范围等来正确选择适合的分析方法。当试样共存组分对待测组分的测定有干扰时，常用掩蔽剂消除干扰，而无合适的掩蔽方法时，必须进行分离。  (4)分析结果的计算及评价  根据分析过程中有关反应的计量关系及分析测量所得数据，计算试样中待测组分的含量。对于测定结果及误差分布情况，应用统计学方法进行评价。  二、定量分析结果的表示  ⑴待测组分的化学表示形式  以待测组分实际存在形式含量表示。  以氧化物或元素形式表示  以所需的组分表示  电解质溶液的分析结果，以离子含量表示  三、待测组分的含量表示方法  固体试样:常用质量分数表示wB=mB/ms(%)  含量很低时，μg/g(或10-6)，ng/g(10-9)，pg/g(10-12)  液体试样:  物质的量浓度:单位mol/L。  质量摩尔浓度:单位mol/kg。  质量分数:待测组分的质量除以试液的质量，量纲为1。  体积分数:待测组分的体积除以试液的体积，量纲为1。  摩尔分数:待测组分的物质的量除以试液的物质的量，量纲为1。  质量浓度:以mg/L,μg/L,μg/mL，ng/mL,pg/mL。  气体试样:常量或微量组分的含量，通常以体积分数表示。  基础化学中经常用到的定量分析仪器有:高效液相色谱仪、气相色谱仪、分光光度计、常用玻璃仪器(烧杯、量筒、玻璃棒、容量瓶等)、天平等。此外，由于行业不同，应用的分析仪器截然不同，如在生物行业中会用到PCR。

空白试验：除不加试样外，采用完全相同的分析步骤、试剂和用量（滴定法中标准滴定液的用量除外），进行平行操作所得的结果。用于扣除试样中试剂本底和计算方法的检出限。空白做不好会怎样？空白试验测得的结果称为空白试验值。在进行样品分析时所得的值减去空白试验值得到的才是最终分析结果。空白试验是实验室质量控制的重要环节，其准确性对提高检测结果的准确度至关重要。空白试验值反应了测试仪器的噪声、试剂中的杂质、环境及操作过程中的沾污等因素对样品测定产生的综合影响，直接关系到测定的最终结果的准确性。空白试验值低，数据离散程度小，分析结果的精度随之提高，它表明分析方法和分析操作者的测试水平较高。当空白试验值偏高时，应全面检查试验用水、试剂、量器和容器的沾污情况、测量仪器的性能及试验环境的状态等，以便尽可能地降低空白试验值。做酸碱滴定时为什么要做空白试验？因为用作稀释液的空白溶液有一定的酸碱度，会影响滴定结果，所以要做空白试验，来扣除空白的干扰。比如空白溶液为酸性，这时候用碱滴定此溶液，得到的结果会偏高，要扣除空白溶液的酸度，得到的酸度才正确。石墨炉测铅时,空白(4硝酸+1高氯酸GR)值总是较高,与灰化法的结果不大一致（样品为植物样）。【分析】1. 所用的水为用石英亚沸水蒸馏器蒸馏得到的，先打一下空白，一般不会超过0.0015，然后采用的为硝酸（工艺超纯）和高氯酸（优极纯）消化，最后溶解用的1摩尔每升的盐酸或硝酸（结果差不多，只是盐酸稳定性要好一点），定容体积为50mL的话空白值一般为0.03左右。不过铅比较难做，基体干扰很大。2. 空白问题来自多方面，上面说的水与试剂外，你用的氩气是高纯的吗？也可用高纯氮气，但要注意分子带背景3. 可能来自由你所用的硝酸和高氯酸不纯所致。你可以先测空管，然后测你所用的水，再测含酸的水空白看看就知道了4.有可能是试液的酸度过大会影响测定，特别是使用高氯酸，影响更大，酸度大对石墨炉损害也比较大。对于石墨炉测定铅，湿法消化最好使用微波消化，使用硝酸和双氧水，这样空白中酸度比较容易控制，空白也比较低。5. a.实际Pb含量有出入，厂家就没有测准；b.仪器可能没有调制最佳。7.石墨炉测铅使用高氯酸＋硝酸消解的样品测定空白不稳定而且很高这个问题没有分析到点子上。这个故障的实际问题不是试剂不纯引起的，是因为在消解时无论如何赶酸都很难完全把高氯酸除去，因为高氯酸是高沸点酸。这样在最后分析样品时残留的酸就是高氯酸。高氯酸会在石墨炉升温灰化阶段分解出氧气和氯化氢。一方面氯离子会在最后原子化阶段产生非特征吸收，另一方面氧气会和石墨管中的石墨反应烧蚀石墨管。所以石墨管测定含高氯酸的样品损坏速度特别快。相对来说高密石墨管坏的比涂层管和平台管都快的多，基本用不过20次就断了。这可能是造成实验不稳定的真实原因。原子荧光空白偏高原因1.测定介质的选择及浓度的影响选择HNO3、HCl、HClO4、H3PO4和H2SO4等进行了实验，结果表明:以HClO4和H3PO4作介质响应值较低，汞在H2SO4溶液中能得到较大灵敏度，但空白值也高。汞在HNO3和HCl溶液中的荧光强度差别不大。在5%-25%的硝酸和5%-20%的盐酸中荧光强度基本稳定。2.酸的影响作为原子荧光的载流和标准试剂的基体，酸对原子荧光的影响十分的突出。一般在原子荧光中使用的酸主要有两种-盐酸和硝酸。我们习惯上使用盐酸。如果购买市场上质量差的酸，对空白的影响要大得多。3.还原剂的影响作为原子荧光的还原剂，一般使用最多的是硼氢化钾或硼氢化钠，在原子荧光法中，还原剂对样品以及空白值的影响主要体现在它的用量。硼氢化钾浓度不宜超过3.0%。实验表明，当硼氢化钠浓度为1%时，灵敏度和稳定性好，并且有效消除干扰。4.灯电流的影响一般来说灯电流与负高压对原子荧光的影响是同方向的。提高灯电流，空白值就相应的提高。空白值太大的话，可以适当的降低电流值，使仪器的灵敏度降低，减少标准空白的背景值，使所测的数据准确、可靠，但是如果电流过小，灵敏度也将变小，对所测样品的影响就会增加，所以选择合适的灯电流，保证一定的空白值与灵敏度才是关键。5.载气的影响实验表明，当氩气流速较低时，测定的灵敏较高．但结果的变动性加大，实际测定取氩气流速200ml／hifn，此时测定的灵敏度较高，相对标准偏差可以接受。空白色谱柱出峰，什么原因？高效液相色谱，色谱柱是Kromasil C18（15cm*5Um），流动相为10%乙腈和90%三氟乙酸水，走空白色谱柱时在整个保留时间的中间位置出现较大的色谱峰，走了好几针空白，每针的响应都不同，有的很高，有的又很低，但杂峰一直存在，不像是色谱柱里有杂质，用流动相冲洗后依然出现此问题，什么原因？【原因】1.确定检测波长，如果是末端吸收，排除三氟乙酸的干扰。2.使用100%乙腈作为流动相，乙腈作为样品进样，如果为基线，则说明色谱柱及系统完好。3.然后在换流动相为10%乙腈和90%三氟乙酸水，样品为乙腈，如果有上述“中间位置出现较大的色谱峰”，那说明八成问题在三氟乙酸上，或者稀释三氟乙酸的水上。4.如果上述2、3都有“中间位置出现较大的色谱峰”，检查检测器及进样器。5.这些还不能解决，请联系工程师空白乙腈出峰，什么原因？岛津高效液相色谱仪，进空白乙腈，在样品峰位子出现倒峰，进双蒸水在样品峰出现正峰，进样品时有杂峰干扰，我已经排除了水和乙腈的问题，不知道是不是进样池或者检测器污染了，已经整了10多天，还是没效果，请指教原因和解决办法。【分析】液相中出现倒峰，主要原因是样品吸收比流动相吸收小，所以排除影响，不仅要考虑进样系统污染和检测池污染，还要考虑流动相和色谱柱的影响。换一根柱子试试，考察系统的情况，如果照旧，就排除色谱柱的影响，然后更换流动相试试，再以后清洗进样系统和检测池等等。或将色谱柱从系统中断开，直接用乙腈或水做流动相清洗检测器就可以知道是否是检测器受污染，如果基线正常，再检查你的进样系统，样品，前处理是否有问题，如果都没问题，就去检查色谱柱吧。水质分析中氨氮的测定空白值很高的原因实验中纳氏试剂和酒石酸钾钠对空白值的高低影响很大，可能原因如下：1.测定使用的蒸馏水被污染，含有影响实验结果的杂质，比如蒸馏水含氨。2.试管、移液管等仪器没有清洗彻底，这些因素对实验结果也有较大的影响。3.实验所用的无氨水质量不佳，含氨量比较高，导致实验得到的空白值偏高，这是最主要的原因。4.在配制酒石酸钾钠和钠氏试剂时出现较大偏差，导致实验所用的试剂纯度（酒石酸钾钠、钠氏试剂）不佳，从而导致实验得到的空白值偏高。总氮空白值偏高，什么原因？1、试剂的配制碱性过硫酸钾的配制过程十分重要，掌握不好，会影响消解效果，对测定结果产生一定的影响。配制该溶液时，可分别称取过硫酸钾和氢氧化钠，两者分开配制，再混合定容，或者先配制氢氧化钠溶液，待其温度降到室温后再加入过硫酸钾溶解。若二者在一只烧杯中溶于水，应缓慢加水，同时搅拌，防止氢氧化钠放热使溶液温度过高引起局部过硫酸钾失效。2、玻璃器皿的洗涤所使用的玻璃器皿应先用（1+9）盐酸浸泡后，再用无氨水冲洗数次才能使用，否则，也会造成空白值偏高或平行性较差的情况。3、比色时的注意事项该项目的测定涉及两个波长（220nm和275nm），建议在测定完一组样品的同一波长后，再调整到另一波长，统一测定，不要测完一个样品的两个吸光度后再换另一个样品，这样反复调整波长会引起一定的测量误差。4、试剂的选择碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法测定总氮的过程中，过硫酸钾是至关重要的试剂。首先，试剂的纯度关系到空白值的高低、测定结果的准确度。一般普通分析纯过硫酸钾的总氮含量最高不超过0.005%，但由于试剂质量存在差异，有些厂家、批次的试剂含氮量常常达不到这个要求，致使空白值偏高。因此，有条件的话建议使用优级纯试剂，尽量降低试剂中的含氮量，从而降低实验空白值。5、实验用水及试剂的质量检验若实验的空白值不够理想，则需要对实验用水及试剂进行检验，以选择出含氮量最低的水和试剂，获得理想的空白值。粗蛋白测定空白偏高的影响因素？可以从以下方面考虑：1.配溶液的水换没换；2.看看消化炉的回收率；3.看看蒸馏仪的回收率；4.盐酸在不在保质期内；5.配溶液的硫酸是不是有问题；6.检查催化剂，是不是含有硝酸钾。小结空白试验是实验室质量控制的重要环节，其准确性对提高检测结果的准确度至关重要。以分光光度法空白为例 ，要用相应的实验用纯水或有机溶济作参比，不能用空白实验溶液做参比，以免人为减小空白值，从而掩盖空白实验值的变异。值得注意的是，通过计量认证的实验室，由于检测仪器和玻璃量器定期检定 ，以及采取了全面的质量管理措施，因此，若测定的空白实验值太大，一般是化学药品纯度不够，配制的试液变质或被污染等原因 。应重新配制试液 ，返工重测该批样品，直至空白实验值合格。

滴定分析法，作为一种简便、快速和应用广泛的定量分析方法，在常量分析中有较高的准确度，可以说是实验室中最常用的定量方法。标准滴定溶液按其化学反应原理可分为酸碱、络合、氧化、还原、沉淀四大类标准滴定溶液，如何制备标准滴定溶液并保证其浓度的准确性是保证试样分析结果准确性的基础。下面跟着远慕生物了解一下滴定分析的相关知识。对试剂和水的要求(1)试剂的纯度应在分析纯以上，且性质稳定，配成的溶液不易挥发和起其他变化。标定标准溶液必须用基准试剂。(2)配制标准溶液的实验用水应符合GB/T 6682中三级水的规格。标准溶液在配制与标定过程中需注重的问题有哪些？（1）溶液配制中所用的水，在没有注明其它要求时，应符合GB/T 6682中三级水规格。（2）标定溶液和配制基准溶液所用试剂为容量分析基准试剂。配制一般溶液所用试剂纯度不低于分析纯。（3）溶液配制中使用的分析天平、滴定管、单标线容量瓶及单标线吸管等需按计量检定规程要求检定或校准。单标线容量瓶、单标线吸管应有容量校正因子。（4）称量工作基准试剂的质量小于或等于0.5g时，按精确至0.01mg称量；大于0.5g时，按精确至0.1mg称量。（5）标定标准滴定溶液浓度时，需两人进行实验，分别做四平行，每人四平行标定结果相对极差不得大于相对重复性临界极差0.15%，两人共八平行标定结果相对极差不得大于相对重复性临界极差0.18%。（6）在运算过程中保留5位有效数字，取两人八平行标定结果的平均值为标定结果，报出结果取四位有效数字。（7）制备标准滴定溶液的浓度应在规定浓度的±5%范围以内。标准溶液保存(1)标准溶液应在室温20±5℃下存放，不要放在有加热设备的房间里。(2)标准溶液不应放在有酸碱和氧化还原性逸出气的环境中，应在瓶塞上加装过滤空气中杂质的保护管。酸标准溶液加酸石棉保护管以吸收碱性气体；碱标准溶液加碱石棉保护管，以吸收酸性气体。(3)易挥发，见光易分解的标准溶液应装在棕色瓶中，避光存放。(4)不能用吸液管直接从标准溶液中吸取标准液。(5)标准溶液在常温下保存不得超过两个月，氧化还原溶液一般一个月。总之，标准溶液在配制、标定、保存和使用过程中，要认真按规定进行各环节的工作，才能保证溶液浓度的准确性，以保证实验结果的真实、准确。 小结容量分析法中，以滴定分析用标准溶液对试样中欲测组分进行滴定，根据标准溶液的消耗量和浓度进行结果计算。因此标准溶液浓度的准确性对测试结果有直接的影响。所以在标准溶液的配制、标定和使用中要注意遵守注意事项哦！以上内容仅供参考，具体标准溶液配制及滴定方法请参考GB/T 601-2016 化学试剂标准滴定溶液的制备！

标准物质是技术基础中的核心和基础部分，是分析测量结果质量的重要保证。随着分析测量的重要作用不断加深，分析测量结果的质量、结果的可靠性和有效性与标准物质的依存度将更为显著。那如何选择合适的标准物质、在分析中如何正确使用标准物质呢？是不是有很多疑问？下面远慕生物来一一解答。选择、购买标准物质应考虑哪些要素？（1）特性量的种类及定值方法：某些标准物质可能只适用某一特定方法或专属领域的应用，某些标准物质的值有特殊规定，如含结晶水的值，应对证书中该类说明加以注意，防止误选误用；（2）特性量水平：标准物质的特性量水平应与日常测量样品的水平匹配；（3）可接受的不确定度水平：标准物质特性量的相关不确定度水平应与日常测量中的精密度和正确度限度要求匹配；（4）基体及可能的干扰：标准物质用于开展方法确认、质量控制以及一些基体效应较为严重的测量方法的校准时，基体应与日常测量样品基体尽可能接近；（5）形式：标准物质可制备成不同的形式，如冻干与冰冻样品，制备方式的不同可能会导致相同特性在标准物质与真实样品中的行为差异，从而产生互换性问题，选购前应充分调研；（6）最小取样量：只要标准物质证书中规定了最小取样量，用于测量的取样量应不小于该最小取样量，因此选购时应考虑最小取样量是否能满足测量方法要求；（7）用量：标准物质的购买用量应足以满足整个实验计划中的应用，包括根据需要考虑的备样；（8）稳定性：选购前应确认所购买批次标准物质的有效期限，避免使用时发生过期的情况。购买的有证标准物质如何验证？对于购买到的标准物质，在收到后应首先对照证书确认标准物质的运输条件是否符合要求，然后核对品种、数量等是否与购买要求一致，包装、外观是否正常，标识是否清晰、完整；有无证书，是否在证书声明的有效期内等。核对完毕后，立即按照证书中规定的保存条件进行保存。如有问题，应及时与研制或发售单位联系。

实验室分析样品称量不准确的原因大体可分为分析天平没校准、环境及样品物理因素影响和操作不当等3个方面的原因。为什么老是称不准？1.分析天平在使用前没有经过校准一台分析天平在使用之前，首先要确认它的正确性是否合格。天平的正确性是指天平横梁两臂相等的精确程度以及3个刀刃的等距、平行的精确程度。分析天平从首次使用起，应对其定期校准。连续使用的天平，大约每星期校准一次。校准时应按规定程序进行，必须使用标准砝码进行校准，否则将起不到校准的作用。2.分析天平安装不正确在安装分析天平时首先要选择选防尘、防潮、防震、防风、防晒、恒温的房间作为天平室。其次，天平应安放在牢固可靠的工作台上，并选择适当的位置安放。天平安装前，应按装箱清单进行清点，看各部件是否齐全、完好，并对天平的所有部件进行仔细清洁。安装时，应参照天平的说明书正确装配天平。安装完毕后应再次检查各部分安装是否正常，然后检查电源电压是否符合天平的要求，打开天平检查是否正常。 3.环境及样品的物理因素影响1）温度的变化对分析天平的影响如果在称量过程中发现显示值单方向漂移，就有可能是温度变化所产生的影响。若样品与周围环境之间的温度存在差异，则这个温度差异就会导致沿称重容器流动的气流。空气沿着容器外侧流动产生一个向上的作用力，这个力就导致称重结果产生错误。当把样品从干燥炉或冰箱中取出以后，要等到样品温度与实验室或称量室温度一致时才可以称量。样品要放在表面积尽可能小的去皮容器中，取放称量容器要使用镊子夹取，而不能将手放入称量室中。2）样品吸湿或挥发对称量结果的影响如果在称量的过程中显示值单方向持续漂移，则可能测量的是挥发性或吸湿性样品。对于吸湿性或挥发性样品可使用细颈容器，给容器加盖或上塞，使用清洁干燥的称重容器并保持称盘上不粘有灰尘、污染物及水滴。3）样品或容器带静电对称量结果的影响如果每次称量都显示不同的称量结果或显示值不稳定，或称量结果的重复性差，则可考虑是称量容器或者样品带有静电。静电现象的影响使每次称量时称重容器均显示不同的重量，结果的重复性很差。具有高绝缘度的材料如玻璃、塑料制的称重容器等容易带静电。这种带电现象主要是由于样品或容器在搬运过程中搅拌或摩擦产生的，而且一旦带电则排除电荷会非常缓慢，在相对湿度低于40%的干燥空气中出现样品或容器带静电的几率会增加。通常可采用打开加湿器或适当调节空调系统来增加空气湿度，把称重容器放在金属容器内再进行称量，设法给分析天平接地等措施，来去除或屏蔽称重样品上的静电。4.使用者操作不当造成称量不准确称量前应检查天平是否正常，天平是否水平，称盘是否洁净，圈码指数盘是否在“000”位，圈码有无脱位，吊耳有无脱落、移位等。检查和调整天平的空盘零点，可用横梁平衡螺丝粗调并用投影屏调节杠微调。1）在分析天平开启状态下进行取放称量物和增减砝码的操作。一般分析天平加、减砝码或取、放称量物必须在天平处于关闭状态下进行。在称量过程中一直是半开启天平，直到最后一刻才可完全开启天平。2）使用者在转动读数盘时操作不稳，导致挂码脱落或缠绕。使用天平上的机动开关，如开启和关闭天平、加减天平挂码等，必须缓慢均匀地转动。根据所称物重，用取中法则缓慢平稳地转动砝码旋钮，用最简捷的操作加减砝码。3）称量时用手直接取放称量物。如果称量时用手直接取放称量物，会使手上的汗渍污渍粘到称量物上，造成称量误差，所以称量时不可直接用手接触称量物，一般可戴手套并用纸条取放称量杯。4）读数错误造成称量结果错误。读数砝码确定后，全开天平旋钮，待标尺停稳后即可读数。称量物的质量等于砝码总量加标尺读数。砝码总量要依砝码从大到小依次相加，最后和标尺读数相加。

1.什么是pH标准缓冲溶液？它有哪些特点？pH缓冲溶液是一种能使pH值保持稳定的溶液。如果向这种溶液中加入少量的酸或碱，或者在溶液中的化学反应产生少量的酸或碱，以及将溶液适当稀释，这个溶液的pH值基本上稳定不变，这种能对抗少量酸碱或大或稀释，而使pH值不变化的溶液就称为缓冲溶液。pH标准缓冲液有以下特点：（1）标准溶液的pH值是已知的，并达到规定的准确度；（2）标准溶液的pH值有良好的复现性和稳定性，具有较大的缓冲容量，较小的稀释值和较小的温度系数；（3）溶液的制备方法简单；2.如何配制pH标准缓冲溶液？对于一般pH测量，可使用成套的pH组缓冲试剂（可配制250mL），配制溶液时，应使用去离子水，并预先煮沸15～30分钟，以除去溶解的二氧化碳。剪开塑料袋将试剂倒入烧杯中，用适量去离子水使之溶解，并冲洗包装袋，再倒入250mL容量瓶中，稀释至刻度，充分摇匀即可。3.如何正确保存和使用pH缓冲溶液？缓冲溶液配制后，应装在玻璃瓶或聚乙烯瓶中（碱性pH缓冲液，如，pH=9.18、pH=10.01、pH=12.46等，应装在聚乙烯瓶中）瓶盖严密盖紧，在冰箱中低温(5～10℃)保存，一般可使用六个月左右，如发现有混频器浊，发霉或沉淀现象，不能继续使用。使用时，应准备几个50mL的聚乙烯小瓶，将大瓶中的组冲溶液倒入小瓶中，并在环境温度下放置1～2个小时，等温度平衡后再使用。使用后不得再倒入大瓶中，以免污染，瓶中的缓冲溶液在＞10℃的环境条件下可以使用2～3天，一般pH=7.00、pH=6.86、pH=14.00三种溶液使用时间可以长一些，pH=9.18和pH=10.01溶液由于吸收空气中的二氧化碳，其pH值比较容易变化。4.pH缓冲溶液有何用途？（1）pH测量前标定校准pH计。（2）用以检定pH计的准确性，例如，用pH=6.86和pH=14.00，标定pH计后，将pH电极插入pH=9.18溶液中，检查仪器显示值和标准溶液的pH值是否一致。（3）在一般精度测量时检pH计是否需要重新标定。pH计标定并使用后也许会产生漂移或变化，因此在测试前将电极插入与被测溶液比较接近的标准缓冲液中，根据误差大小确定是否需要重新标定。（4）检测pH电极的性能。

 一、微生物的筛选方法1、单菌落挑取法:利用平板划线法或稀释涂布平板法接种在固体培养基表面，根据目的微生物特定的菌落特征，利用单菌落挑取的方法挑选目的微生物2、选择培养法:利用选择培养基对微生物进行选择培养，直接筛选目的微生物3、鉴定培养法:利用鉴别培养基使目的微生物菌落呈现特有的特征，然后筛选目的微生物4.根据功能可分为选择培养基和鉴别培养基。类型实例选择培养基培养基中加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌培养基中加入高浓度的食盐用于分离得到金黄色葡萄球菌以尿素作为唯一氮源的培养基用于分离分解尿素的细菌不添加氮源的培养基用于分离固氮微生物石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物鉴别培养基伊红—美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌(菌落呈深紫色并带金属光泽)二、微生物的鉴别方法1、菌落特征鉴别法:根据微生物在固体平板培养基表面形成的菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等特征进行鉴别2、指示剂鉴别法:如在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种微生物后，若培养基变红说明该种微生物能够分解尿素3、染色鉴别法:如在以纤维素为唯一碳源的培养基中加入刚果红，培养某种微生物，若培养基中出现以菌落为中心的透明圈，说明该微生物能分解纤维素三、走出微生物培养的4个误区(1)不是所有微生物培养基中均需加入特殊营养物质。碳源、氮源、水分、无机盐是微生物生长必需的四大营养　　　成分，有些微生物可自行合成特殊营养物质，而对那些合成能力有限或不能合成特殊营养物质的微生物(如乳酸菌)，则需在培养基中添加诸如维生素等物质。(2)稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目“低”。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。而显微计数法由于不能区分死菌与活菌，故所得数值可能比实际值“偏高”。(3)平板划线法只适用于微生物的提纯，不适用于微生物的计数，并且在最后一次划线的末端处的菌种最纯。(4)倒平板的温度一般在50 ℃左右适宜，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。平板冷却凝固后需倒置，防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。

二苯胺磺酸钠指示液取二苯胺磺酸钠0.2g，加水100mL使溶解，即得。二苯偕肼指示液取二苯偕肼1g，加乙醇100mL使溶解，即得。双硫腙指示液取双硫腙50mg，加乙醇100mL使溶解，即得。石蕊指示液取石蕊粉末10g,加乙醇40mL，回流煮沸1小时,静置，倾去上层清液，再用同一方法处理二次，每次用乙醇30mL，残渣用水10mL洗涤，倾去洗液，再加水50mL，煮沸，放冷，滤过，即得。变色范围 pH4.5~8.0(红→蓝)。甲酚红指示液取甲酚红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液5.3mL使溶解，再加水稀释至100mL，即得。变色范围 pH7.2~8.8(黄→红)甲酚红-麝香草酚蓝混合指示液取甲酚红指示液1份与0.1%麝香草酚蓝溶液3份,混合，即得。甲基红指示液取甲基红0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液7.4ml使溶解，再加水稀释至200mL，即得。变色范围 pH4.2~6.3(红→黄)。甲基红-亚甲蓝混合指示液取0.1%甲基红的乙醇溶液20mL，加0.2%亚甲蓝溶液8mL，摇匀，即得。甲基红-溴甲酚绿混合指示液取0.1%甲基红的乙醇溶液20mL，加0.2%溴甲酚绿的乙醇溶液30mL，摇匀，即得。甲基橙指示液取甲基橙0.1g，加水100mL使溶解，即得。变色范围 pH3.2~4.4(红→黄)。甲基橙-二甲苯蓝FF混合指示液取甲基橙与二甲苯蓝FF各0.1g，加乙醇100mL使溶解，即得。邻二氮菲指示液取硫酸亚铁0.5g，加水100mL使溶解,加硫酸2滴与邻二氮菲0.5g,摇匀，即得。本液应临用新制。茜素磺酸钠指示液取茜素磺酸钠0.1g，加水100mL使溶解，即得。变色范围 pH3.7~5.2(黄→紫)荧光黄指示液取荧光黄0.1g，加乙醇100mL使溶解，即得。钙黄绿素指示剂取钙黄绿素0.1g，加lv化钾10g，研磨均匀，即得。钙紫红素指示剂取钙紫红素0.1g，加无水硫酸钠10g,研磨均匀，即得。姜黄指示液取姜黄粉末20g，用冷水浸渍4次，每次100mL,除去水溶性物质后，残渣在100℃干燥，加乙醇100mL，浸渍数日，滤过，即得。结晶紫指示液取结晶紫0.5g，加冰醋酸100mL使溶解，即得。酚酞指示液取酚酞1g，加乙醇100mL使溶解，即得。变色范围 pH8.3~10.0(无色→红)。铬ming黑T指示剂取铬黑T 0.1g，加氯化钠10g，研磨均匀，即得。淀粉指示液取可溶性淀粉0.5g，加水5mL搅匀后，缓缓倾入100mL沸水中，随加随搅拌，继续煮沸2分钟，放冷，倾取上层清液，即得。本液应临用新制。硫酸铁铵指示液取硫酸铁铵8g，加水100mL使溶解，即得。溴酚蓝指示液取溴酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.0mL使溶解，再加水稀释至200mL，即得。变色范围 pH2.8~4.6(黄→蓝绿)。溴麝香草酚蓝指示液取溴麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液3.2mL使溶解，再加水稀释至200mL，即得。变色范围 pH6.0~7.6(黄→蓝)。麝香草酚酞指示液取麝香草酚酞0.1g，加乙醇100mL使溶解，即得。变色范围 pH9.3~10.5(无色→蓝)。麝香草酚蓝指示液取麝香草酚蓝0.1g，加0.05mol/L氢氧化钠溶液4.3mL使溶解，再加水稀释至200mL，即得。变色范围 pH1.2~2.8(红→黄);pH8.0~9.6(黄→紫蓝)。

麦氏比浊管是McFarland发明的一种用于微生物比浊的不同浊度的标准浊度管。具体的配制方法是根据硫酸和氯化钡的比例来定的，有表可查，这样不同比例生成的硫酸钡沉淀的浓度不同，且都有定值。麦氏比浊管的配比如下：管 号 (McFarland)0.5123450.25%BaCl 2 （ ml ）0.20.40.81.21.62.01%H 2 SO 4 (ml)9.89.69.28.88.48.0细菌的近似浓度 ( × 10 8 /ml)13691215操作方法：1、轻摇标准试管。2、无菌操作将被测定的肉汤培养物加到与标准管相同直径（大小）的无菌试管中。3、以无菌操作向被测定试管加入无菌生理盐水（NaCl），直到浓度与所要求的标准管的浓度相同。使用技巧：1、直接用眼睛看（需要经验，误差较大）。2、找张白纸，打上平行直线，然后看（如图示，利用光在不同浓度液体折射不同）。注意事项：1、如果测定的肉汤培养物不澄清，由培养物的值减去未接种培养基的值来校正细菌浓度。4号管(肉汤培养物)-1号管(孵育过的未接种的肉汤管)=3号管(校正读数)。2、如果肉汤颜色很深,把未接种试管放在标准管的后面读数即可。编者注：1、测定好的细菌，最好做一下梯度稀释涂布计数。2、此浓度是对应的大肠杆菌的浓度，如果是其他细菌，会有一定的差别，但编者做过的几个菌差别都在一个数量级之内，适合于普通实验。3、此种方法测定的准确性不是很高，如果是对细菌数量要求较精确的，请用紫外分光光度计。

目前进入夏季，炎热的气候条件更是对化学品的安全储存带来更大的威胁。因为它的生产、存储及运输过程中都需要严谨、系统的操作，一旦不按规范操作就会导致事故的发生，严重影响人们的生命财产安全。因此，远慕生物对危险化学品运输、储存总结了以下安全防控注意事项：一、运输安全须知1、从事化学品装卸运输的人员应按照装运危化品的不同性质穿着相应的防护用品。运输前首先要询问所载货物的物理、化学性能，如产品的闪燃点、毒性、膨胀系数等。夏季时要在车上装棚杆、搭凉蓬，要通气避光，特别要防止阳光直射。装卸时轻拿轻放，严禁摔拖、重压和摩擦，不得损坏包装容器，注意保证对方稳妥。此外，要根据装卸危险化学品的性质，配备向应的消防器材。2、选择合适的包装容器，正确装运货物。危险品在装运前应根据其性质、运送路程、沿途路况等采用安全的方式包装好。包装必须牢固、严密，在包装上做好清晰、规范、易识别的标志。危险品在装运过程中出现漏散现象时，应根据危险品的不同性质，进行妥善处理。3、装运爆炸、剧毒、放射性、易燃液体、可燃气体等物品，必须使用符合安全要求的运输工具。禁止使用电瓶车、翻斗车叉车、铲车、直行车等运输爆炸物品。各种化学品不能混装，以免泄露后产生化学反应，要做到一车一货。车辆排气管要装阻火器，车厢室应铺上一层草垫或芦苇席，以免行驶中滑动。4、运输途中，司机要平稳行车、安全驾驶。运输化学品的司机要技术，不能开快车、飞车，并且不喝酒，不吸烟，不疲劳驾驶。驾驶中要尽量少用紧急刹车，以保持货物的稳定。5、行车途中勤检查化学品是否有泄露。由于行车途中车辆颠簸震动，往往容易造成包装破损从而造成化学品泄露。因此， 物流人员要定时查看有无溢出。6、行车路线、时间要选择得当。运输化学品要选择道路平整的主干线，不可在繁华街道行驶或逗留。要根据货物特性选择合适的时间进行运输，例如：易燃品闪点在28度以下，气温高于28度时应在夜间运输。7、经过长途运输，外包装都有一定破损，卸货时特别小心。危险物品卸载后，要对车搬运工具进行必要的通风和清扫，不得留有残渣，对剧毒物品的搬运工具，卸车后必须清洗干净。8、禁止无关人员搭乘运输危险化学品的车辆。二、夏季储存安全须知夏季是一年中气温的季节，危险化学品火灾也多发生在炎热的夏季。分析原因有以下几个：1、温度升高使危险化学品体积压力增大热胀冷缩是物体的一般物理现象。易燃液体的膨胀系数普遍比较大，储存在密闭容器中，受热后体积容易膨胀，同时蒸气压增加，使容器内部压力增大，若超过了容器所能承受的压力，就会造成容器故障，甚至炸裂。高温季节盛装易燃液体的铁桶出现“鼓桶”现象以及玻璃容器的炸裂现象都是由于受热膨胀所致。如果容器是敞口，液体膨胀超过其容量就会外溢，发生跑、冒、滴、漏现象。例如，液化石油气体积膨胀系数是水的11～17倍，其体积受温度的影响较大，所以家庭使用液化石油气时，禁止用沸水加热或烘烤。为了防止这种情况发生，除了采取防热降温措施以外，还要控制灌充量，即按规定的充装系数进行灌装。2、温度升高使液体的蒸发速度加快易燃液体蒸发能力的大小不但与液体本身的性质有关，而且受周围环境的影响更大，其中温度对它的影响更重要。温度越高，易燃液体蒸发越快，液面上蒸气浓度越大，与空气形成爆炸性混合气体的可能性就越大，火灾爆炸危险性就越大。不同液体的蒸发速度因温度、沸点、比重、压力的不同而不同。易燃液体蒸发的难易程度用沸点来表示，沸点越低，表明该液体的蒸发性越强。有些易燃液体的沸点是很低的，如在常压下，汽油的沸点是50℃，如环境温度超过其沸点，就容易发生危险3、温度升高加速氧化分解和自燃由于受温度、湿度等环境因素的影响，许多危险化学品受热后容易分解，放出氧气甚至氧原子，使其它物质氧化，同时放出大量的热。如果通风不良，热量积聚不散，致使温度升高，又会加快氧化速度，产生更多的热，促使温度继续升高，当温度达到物质的自燃点时物质就会自燃起火。有些自燃点较低的物质如黄磷(自燃点为30℃)，如果不妥善保管，夏季气温超过它的自燃点时，遇空气就能自燃起火。三、关键是要防热降温具体措施有：1．要有合格的危险化学品仓库危险化学品仓库应采用不导热的耐火材料做屋顶和墙壁的隔热层，屋檐要适当加长，以阻止阳光射入仓库；库墙要适当加厚，常开窗，采用间接通风洞，设置双层门，双层屋顶；窗玻璃漆成蓝色或选用磨砂玻璃。2．危险化学品要分类存放化学危险品一般分为爆炸性物品、遇水燃烧物品、自燃性物品、易燃固体、易燃和助燃气体、腐蚀性物品、氧化剂等。对这些物品要分类、分库、分件、分架存放，严禁把各种性质互相抵触、灭火方法不同、容易引起自燃的物品混放在一处。储存物品时堆垛不可过高、过大、过密，垛与垛之问；垛与墙、柱、屋梁、电灯之间应保持一定距离，并留有消防通道，不得超量储存。3．要严格控制温度为仓库设贮水屋面或在仓库屋面上设置冷却水管，气温在30℃以上时喷水降温，使仓库内温度保持在28℃以下。在仓库屋顶铺石麻袋，能增加屋顶的隔热性能，也可将库房屋顶、外墙和窗户玻璃涂成白色，利用白色对阳光的反射作用，减少辐射热的吸收，达到降温的作用。根据物品性质和包装情况，还可以在仓库地面上浇井水、放冰块，有条件的安装空调进行降温。有的仓库可在早晚和夜间开窗通风，放进冷空气，中午关闭门窗，防止热空气进入。4.对露天堆场和贮罐采取降温措施桶装的易燃液体，应放在建筑物内，以防太阳直接照射。在特殊情况下需要临时露天存放的，应采用不燃材料搭建遮阳棚，有时要用皮管定时喷水降温。桶内一般只盛装容积的90％95％，留有5％～10％的空间，这样能防止桶内危险化学品受热膨胀而发生燃烧或爆炸事故。贮罐顶部应设置降温装置，在气温达到30℃以上时，开启冷却水泵进行喷淋降温。贮罐也不能装得太满，需留出5％～10％的容积空间。5．应有防雷设施危险化学品仓库，一般都设在本单位或城市的边缘地区，与周围的其它建筑物保持一定的距离，这样，仓库周围就形成了空旷地带，容易遭受雷击。因此，仓库要安装避雷装置，以防止雷击而引起火灾事故。6．加强管理管理危险化学品仓库的人员必须经过消防安全培训并经考核合格，持证上岗。库管人员要定时对仓库进行巡查，发现问题及时解决，确保安全。现如今，危险化学品已是一种危险源，事故发生往往难以预料，危害覆盖面广，对社会公共安全也会造成很大的影响，随着人们对化学品的需求的加大，对危险品要求也会越来越高，因此，只有加强从业人员的安全意识和专业知识，群众的防控意识，尽可能采取措施，才能有效防控危化品引起的一系列安全隐患。

　　各种化学物品危险特性不—样，在温湿度要求上也应分别对待，以有利贮存安全保证质量。　　一、易爆物品：　　应储存在库内温度低于30℃的条件下，相对湿度应保持在75—80％。　　二、氧化剂：　　一般氧化剂应控制在30℃以下。对于一些含结晶水的氧化剂如硝酸盐类因受热后熔化失去结晶状态引起潮解，库房温度就不宜超过28℃，要保持在保温库房内。相对湿度应保持在75％以下。　　三、压缩和液化气体：　　仓库温度应不宜超过32℃，相对湿度应控制在80％以下，以防止钢瓶生锈。　　四、自燃物品：　　仓库温度应在28—30℃左右，相对湿度应保持在80％以下。储存黄磷库房，冬季库房温度最低不能低于3℃。　　五、防潮物品：　　库房温度应在30℃左右。相对湿度一般应在75℃以下，要特别注意采取防潮的措施。　　六、易燃液体：　　必须严格控制库内温度，防止库内温度过高，特别要根据液体的沸点与闪点的高低来控制温度。　　七、易燃固体：　　湿度过高或湿度过大，都会影响易燃固体的安全储存。如硝化棉的贮存需含有30％的湿润剂乙醇，库内温度应控制30℃以下。樟脑、精茶等相对湿度应在80％以下。储存二级易燃固体的仓库，温度不得超过32℃。　　八、毒害品：　　毒害品仓库温度不宜超过32℃，相对湿度应控制在80％以下。对于氰化物，库内要保持干燥，因为氰化物与潮湿空气接触可产生剧毒的氰化氢气体。　　九、腐蚀性物品：　　这类物品，品种较多，性能各异，固、液体都有，为此必须根据其性质，对温、湿度加以控制。　　如对一些吸湿潮变质或冒烟的腐蚀物品如五氧化二磷、三氯化磷、氰化硫酰、氯化亚砜等，仓库要保持干燥，相对湿度应保持在75％以下。对易挥发的溴素，易分解的过氧化氢双氧水含量在40％以下，库温应保持在28℃以下，最好是25℃左右。对怕冷怕冻的腐蚀性物品。如受冻结冰的冰醋/酸，受冻聚合沉淀的甲醇等，库房温度应保持在15℃左右，冬季要保暖。

　　化学品性质不相同，如何区别对待？　　1. 低沸点的化合物、需要低温保存的药品须按要求放入所需的环境（低温冰箱）；　　2. 避光保存的药品及其所配制的试剂，均应按要求用棕色容器（瓶）保存，或用深色纸包裹。　　3. 药品一律放入化学品安全柜内，不得与配制的溶液混在一起放置；　　4. 液体药品放置矮柜，固体药品与液体药品分开放置；　　5. 酸碱不能混放，氧化剂和还原剂不能混放，如果混合会发生剧烈反应的试剂不混放，防止可能因为倾倒，破碎等意外原因引发事故；　　6. 对于一些常温环境下存放的药品，一定要注意防潮，否则会发生固体结块现象　　7. 液体样品结块好像以前只遇到冰醋酸，放在温度高些的地方就能变成液态了；　　8. 北方的冬季有点冷，部分实验室的空调一般只制冷，不制热，有一些凝固点和常温偏差不大的试剂，会出现冬天凝固，夏天又变成液体的情况。还要注意的是，试剂瓶一般都是普通玻璃生产的，非常厚，温度变化太剧烈的话容易炸裂。比如，对怕冷怕冻的腐蚀性物品。如受冻结冰的冰醋酸，受冻聚合沉淀的甲醇等，库房温度应保持在15℃左右，冬季要保暖；　　9. 硫酸和盐酸都不好保存，虽然都是酸，硫酸应该跟甲酸、乙酸、盐酸分开放置；　　10. 甲酸、乙酸、盐酸有强挥发性，应通风良好，把酸雾及时排出；　　11. 硫酸具有强氧化性和强脱水性，应该单独放置。

细胞学实验中，尤其是植物细胞实验，常常会遇到的细胞裂解的相关实验，目的是通过机械货非机械的方法打破细胞壁的束缚，从而在进行细胞质或细胞核内部完成DNA编辑相关操作的一种实验方法。细胞破碎的方法有哪些?总结方法主要有以下8种：一、细胞破碎的机械方法机械细胞破坏实际上就是这样：通过固体或液体剪切的方式强行打开细胞壁并溢出内容物。机械破碎的优点是不会引入可能干扰您想要提取的物质的化学物质。然而，容易造成大分子内容物失活。1.研钵和研杵研磨破壁法通常是将植物组织样本放在置于冷冻液氮中，通过组织研磨器的研磨来完成的。当组织材料被破坏时，可以通过添加溶剂来提取代谢物。2.珠磨法珠磨法是指在等量的细胞悬液和涡旋混合器中加入玻璃珠或磁珠用于通过固体剪切的作用来使细胞裂解的方法。这种细胞裂解法的机械剪切力足够温和，可以保持细胞器的完整性，具有较高的细胞破碎率可大规模使用，适 用于各种细胞破碎。缺点是：大分子内容物较易失活，并且浆液分离较为困难。3.超声波破碎仪超声波均质器的工作原理是在浸入细胞溶液中的钛探针中引起振动。发生称为空化的过程，其中微小气泡形成并爆炸，产生局部冲击波并通过压力变化破坏细胞壁。这种方法非常适用于植物和真菌细胞，但有一个缺点：噪音较大，所以使用时，必须在额外的房间内进行。4.均质机破碎法均质器在细胞上使用类似于珠法的剪切力。可以通过将细胞挤压到比它们略小的管子中来进行均质化，从而剪掉外层（法压）或使用搅拌机中的旋转刀片（转子-定子处理器）。5.冷冻破碎法冻融循环通过在解冻时形成冰晶和细胞膨胀来起作用，最终导致破裂。用于藻类和软植物材料。缺点是非常耗时。6.高温（微波、高压釜）破碎法高温（和压力）会破坏细胞壁内的键，也会使蛋白质变性。尽管速度很快，但如果您的应用受到热对电池其余部分的损害影响，您最好找到另一种方法。二、 非机械细胞破碎的方法有哪些?非机械方法会涉及到添加分解细胞壁成分相关的酶或化学品。它们通常与机械力结合使用，以确保完全破坏细胞。使用它们的缺点是细胞裂解后较难将细胞从这些物质中分离出来。1.酵素天然存在的酶可用于去除细胞壁，例如在分离原生质体（无壁细胞）时。根据您使用的生物组织样本，可以使用 纤维素酶、几丁质酶、溶菌酶（破坏肽聚糖）、甘露糖酶、聚糖酶（等）等溶菌酶。2.化学品醇、醚或lv仿等有机溶剂可以通过渗透细胞壁和细胞膜来破坏细胞壁。如果您想提取疏水性分子（如植物色素），它们会较为方便，因为它们会被收集在溶剂中。通常用于植物成分的萃取。EDTA主要用于破坏革兰氏阴性细菌的细胞壁，因为 其细胞壁含有脂多糖，这些脂多糖由 Mg 2+和 Ca 2+等阳离子稳定。EDTA 会螯合阳离子，从而在细胞壁上留下孔洞，使外来基因轻松穿透细胞壁到达细胞内部。

在许多细胞内蛋白表达、纯化及蛋白-蛋白互作等免疫实验（如WB、IP、Co-IP、ChIP）中，细胞裂解是关键一步。基本介绍根据不同细胞类型、蛋白定位及下游应用，需要不同的细胞裂解液进行细胞裂解及蛋白提取（表1）。表1 根据不同蛋白定位选择裂解液蛋白定位     裂解液全细胞     NP-40、RIPA细胞质（可溶性蛋白）     Tris-HCl细胞质（细胞骨架等不溶性蛋白）     Tris-Triton细胞膜     NP-40、RIPA细胞核     RIPA线粒体     RIPA差异化比较RIPA裂解液RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液，获得的蛋白样品可用于常规WB、IP等实验。组分：25 mM Tris-HCl, pH 7.6、150 mM NaCl、1% NP-40、1%去氧胆酸钠、0.1%十二烷基硫酸钠（SDS）。IP裂解液IP裂解液是一种改良后的RIPA裂解液，具中等强度效力，可高效溶解细胞蛋白，但不会像RIPA一样释放染色体组DNA或破坏蛋白复合物。适合下游免疫沉淀或亲和吸附应用。组分：25 mM Tris-HCl, pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、1% mM EDTA、5% 甘油。NP-40裂解液NP-40裂解液是一种很温和的非离子型去垢剂，与蛋白结合力强，尤其适用于膜蛋白非变性条件下的溶解。组分：50mM Tris-HCl pH 8.0、150mM氯化钠、1％NP-40；加蛋白酶抑制剂：抑肽酶、亮肽素、胃抑素，每种1μg / ml；使用前立即添加1mM PMSF。Tris-Triton裂解液Tris-Triton裂解液是非离子型表面活性剂，效力介于NP-40和SDS之间，下游应用有WB、ELISA、IP。组分：10mM 三羟甲基氨基甲烷(Tris)，pH值7.4、100mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1% Triton X-100、10% 甘油、0.1% SDS、0.5% 去氧胆酸钠。

　　红细胞裂解液　　一、基本介绍　　红细胞裂解液是一种去除红细胞最简便易行的方法，即用裂解液裂解红细胞，它 既不损伤有核细胞又能充分的去除红细胞。裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除 方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化，淋巴细胞的分离纯化以及组织细 胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不 含红细胞，可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和 提取等。　　二、使用说明　　①组织细胞样品　　1、新鲜组织经胰酶或胶原酶等消化分散成单个细胞悬液，离心弃去上清液。　　2、从4℃冰箱中取出 ELS裂解液，按 1:3-5 的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液（1ml 细胞压积加入 3-5ml裂解液），轻轻吹打混匀。　　3、 800-1000rpm离心 5-8 分钟，离心弃去上层红色清液。　　4、收集沉淀部分，加入Hank’s液或无血清培养液离心洗 2-3 次。　　5、如裂解不完全可重复步骤2和3。　　6、重悬细胞，用于后续实验；如提取RNA，最好是于步骤4开始使用DEPC水配制 的溶液中进行　　红细胞的生命周期非常短，一般只有120天，但是他繁殖的血特别快，用他的话就会特别的能体现细胞的分裂，然后他是所有细胞中分裂最快的所以这个细胞他是非常的有有价值的，所以对于细胞培养他非常的有用。就是它的构造非常简单，里面没有任何的细胞器，只有细胞膜跟蛋白质。

房屋是用一块块砖石砌筑起来的，生物体是由许多的细胞组成的，所以说，细胞是构成生物体的基本单位。既然生物体都是由细胞组成的，那么，植物细胞和动物细胞的结构都一样吗？植物细胞和动物细胞结构有相同的地方，也就是都有细胞核、细胞质和细胞膜，可也有明显不同的地方，就是植物细胞有细胞壁，动物细胞没有细胞壁，植物细胞里有叶绿体，动物细胞里没有，植物细胞里的液泡很明显，并且在植物的生命活动中起着重要的作用，而高等级的动物细胞里的液泡并不明显。我们到农村去看一看，田野里麦浪千重，小麦的茎秆那么纤细，是如何能够随风摇曳呢？这就是植物特有的细胞壁所起到的作用。细胞壁是由植物细胞分泌的纤维素形成的，包在细胞的外面，一般幼期的细胞壁很薄，在发育过程中，细胞的体积增大，细胞壁也逐渐增厚，这是，细胞的形状就固定下来了。植物体之所以能够挺拔，就是细胞壁所起的保护和支撑作用，动物细胞是没有细胞壁的。天热的时候，忘记给花浇水了，花的叶子就会无精打采地垂下来，这就是告诉我们，植物缺水了。如果我们及时地给它浇水，不久，叶子又神气活现地挺起来了。水为什么会使叶子挺起来呢？原来是细胞里的液泡起的作用。液泡占细胞体积的90%，就像是植物体内的大水库，除了一部分由于蒸腾作用而跑掉以外，大部分水会储存在液泡里，把液泡涨得鼓鼓的，形成一种膨压，植物体也因此而变得挺拔。如果缺水，液泡干瘪，植物的茎叶就萎蔫下来了。液泡里的水状液体就是细胞液，含有许多复杂的物质，如糖类、盐类、有机酸、单宁、生物碱和色素等等。西瓜的细胞液里含糖分较多，所以吃起来甜甜的。不同的水果味道不同，就是因为细胞液里所含的各种成分比例不一样。动物细胞与植物细胞的相同点和区别1、植物细胞和动物细胞的区别：有无细胞壁：植物细胞一般有细胞壁；动物细胞一般无细胞壁，有的有荚膜或细胞外基质等（广义的动物细胞概念）。有无中心体：高等植物细胞无中心体，细胞分裂时直接在细胞两极形成纺锤体；动物细胞有中心体。细胞分裂时是否形成细胞板：植物细胞形成细胞板；动物细胞分裂后期缢裂。有无叶绿体：高等植物细胞含有叶绿体；动物细胞无叶绿体。有无胞间连丝：高等植物细胞间有胞间连丝；动物细胞间无胞间连丝，而是桥粒和黏着带。是否有液泡：成熟的高等植物细胞内有大液泡；动物细胞中没有大液泡。2、相同点：都有细胞膜、细胞质、细胞核。

　　PBS缓冲液是什么　　缓冲液（Buffer solution）是一种可抵抗pH值变化的溶液，当受到稀释或向其中添加有限量的酸或碱时，其pH变化不大。它通常由弱酸（Weak acid）与共轭碱（Conjugate base），或弱碱（Weak base）与共轭酸（Conjugate acid）组成。磷酸缓冲盐溶液（Phosphate Buffered Saline, PBS）是一种生物学研究中常用的缓冲液，可维持一个稳定的pH环境。PBS缓冲液由水、氯化钠、氯化钾、弱酸KH2PO4和共轭碱Na2HPO4配制而成，通常将pH调至pH7.4。人体的pH值介于7.35至7.45之间，平均值为7.40。云舟，PBS缓冲液还模拟了人体渗透压和离子浓度。由于它对细胞无毒，因此被广泛用于洗涤细胞、组织运输和稀释。尤其在动物细胞培养实验中，常用于胰酶消化细胞前的细胞洗涤，彻底去除血清。　　除菌如何处理：高压灭菌　　运输条件：室温　　存储温度：室温　　pbs缓冲液的配制配方是10X的PBS母液，然后再对其母液进行1:10稀释即可获得PBS缓冲液。　　PBS是磷酸盐缓冲液（PhosphateBuffer Saline），是生物学实验室最常用的缓冲液之一。其主要成分包括：氯化钠（NaCl）、氯化钾（KCl）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）和磷酸二氢钾（KH2PO4）。　　配制步骤：　　清洗干净所需烧杯、转子和量筒，向一个烧杯装少量去离子水（约100ml）并放入一个转子后放在称量天平旁备用；向另一个烧杯装约800ml去离子水并在微波炉或者水浴锅（65°以上均可）中加热。　　注意：由于实验室所购买的Na2HPO4常常带有二水、七水或者十二水，与之对应的重量分别为1.78g、2.68g、3.58g。　　向烧杯中加入预热的去离子水，烧杯放置在磁力搅拌器上搅拌溶解。用量筒定容到1L，保存备用。　　取100ml 10X的PBS母液，加入900ml去离子水即可获得pH=7.4的PBS缓冲液（无需用pH计校准PH值）。 

　　分离培养　　成纤维细胞的分离培养一开始并不涉及成骨作用，而主要是用于研究细胞的老化、各种外来因子对细胞的损伤、细胞在体外条件下的恶性转化、以及某些先天性代谢异常、酶缺陷等。由于皮肤成纤维细胞易于获取，又易于在体外生长，皮肤成纤维细胞培养已在基础医学和临床医学研究中得到较广泛的运用，其分离培养技术已相对成熟，对其体外生长规律也有了较全面的认识。　　原代培养　　成纤维细胞的原代培养可用酶消化法或组织块法，其中组织块法又因其操作简便、条件易于控制而应用更为普遍。通常，以酶消化法获得的成纤维细胞悬液在接种后5～10min即可见细胞以伪足初期附着，与 底物形成一些接触点；然后细胞逐渐呈放射状伸展，胞体的中心部分亦随之变扁平；最快者大约在接种后30min，细胞贴附底物即较为完全，呈现成纤维细胞的形态。采用组织块法则大约在接种后2～3天到1周左右，在接种的皮肤组织块周围长出细胞。待细胞融合成片，铺满培养容器底壁大部分时即可进行传代。一般都采用 胰蛋白酶(trypsin)，将成纤维细胞从底壁消化下来后分瓶作传代培养。成纤维细胞在体外培养条件下能保持良好的分裂增殖能力。细胞分裂时变为球形；分裂后又平铺在附着物的表面成为有突起的扁平细胞。体外培养的成纤维细胞，其生命期限与物种等因素有关。　　例如：人胚成纤维细胞约可培养50代；恒河猴皮肤成纤维细胞能传代超过40代；鸡胚成纤维细胞则只有少数能培养30代；而小鼠成纤维细胞多数只能生长8代左右。另外，从老年个体取得的成纤维细胞的寿命要比取自年轻者短。由于在细胞传代和进行体外培养时，细胞的生物学特性会逐渐发生一些不同于体内的改变，故通常只将前10代视这正常细胞，可在此时将生长旺盛的成纤维细胞冻存起来，以备将来复苏使用，这在将培养的细胞由动物实验向人体实验过渡的过程中必须给予足够的重视。

实验中建立细胞系有以下要求：1、组织来源：细胞供体所属物种，来自人体或者动物；个体性别、年龄；取材的器官或组织。如系肿瘤组织，应说明临床和病理诊断，以及病li号等。2、细胞生物学检测：了解细胞一般和特殊的生物学性状，如细胞一般形态，特异结构，细胞生长曲线和分裂指数，倍增时间，接种率等。如为肿瘤细胞，为说明来源于原肿瘤组织并保持恶性，须做软琼脂培养，异体接种致瘤和对正常组织侵润力等实验。3、培养条件和方法；应说明细胞系（或株）适应的生存环境，即指明使用的培养基、血清种类、用量以及适宜PH值。细胞株、细胞系、原代细胞的概念细胞株(cell strain)是通过选择法或克隆形成法从原代培养细胞中获得具有特殊性质或标志物的细胞称为细胞株。一般认为，细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。细胞系(cell line)是原代细胞经首次传代成功后即为细胞系。泛指一般可能传代的细胞。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系，不能连续培养的称为有限细胞系。大多数二倍体细胞为有限细胞系。由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代，或传代次数有限， 可称为有限细胞系(finite cell line)， 如可以连续培养， 则称为连续细胞系(continuous cell line)， 培养50代以上并无限培养下去。人类肿瘤细胞，在体外培养半年以上，生长稳定，并连续传代的即可称为连续性株或系。原代细胞(primary cell)是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。

从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。这类细胞生命周期有限，在有限的生命周期内需掌握好细胞的生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的一致性。原代细胞生长缓慢，一般认为，原代细胞培养的第1代和传代到第10代以内统称为原代培养。原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长会出现停滞,大部分细胞衰老死亡。原代细胞是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。一般认为，培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。细胞株(cell strain)是通过选择法或克隆形成法从原代培养细胞中获得具有特殊性质或标志物的细胞称为细胞株。一般认为，细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。细胞系(cell line)是原代细胞经传代成功后即为细胞系。泛指一般可能传代的细胞。其中能够连续传代的细胞叫做连续细胞系或无限细胞系，不能连续培养的称为有限细胞系。大多数二倍体细胞为有限细胞系。由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。如果不能继续传代，或传代次数有限， 可称为有限细胞系(finite cell line)， 如可以连续培养， 则称为连续细胞系(continuous cell line)， 培养50代以上并无限培养下去。人类肿瘤细胞，在体外培养半年以上，生长稳定，并连续传代的即可称为连续性株或系。原代细胞与细胞系该如何选？原代细胞生长缓慢，一般认为，原代细胞培养的第1代和传代到第10代以内统称为原代培养。原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。但是有极少数的细胞能够度过“危机”而继续传下去，这些存活的细胞一般能够传到40-50代，这种传代细胞叫做细胞株。当细胞传至50代以后又会出现“危机”，这时有部分细胞的遗传物质发生了改变且带有癌变的特点，从而可能无限制地传代下去，这种传代细胞称为细胞系。细胞系因其容易培养、种类多、产量可观的优点一直是细胞水平研究的Shou选，且价格相对低廉，但细胞系“价廉却不一定物美”。研究发现，细胞系在连续培养的过程会不断发生突变，长时间的多次传代可能会导致细胞系的基因型和表型都发生变化，从而影响实验结果。例如有研究报道，HEK293经腺病毒转染后得到的细胞更接近未成熟神经元细胞；MDA-435作为乳腺癌细胞被广泛用于各种研究，但近年来越来越多证据表明其可能为一种黑色素瘤细胞。原代细胞则不存在这些问题，虽然原代细胞分离和培养的成本可能相对更高，但原代细胞作为更接近体内环境的研究模型，可让你的研究结论更加接近“事实”，且原代细胞的使用可减少动物实验所需的成本开支。另外在某些人体体内无法进行的实验，原代细胞因其高度保持了在体内的生物学特性，可在一定程度解决这个问题。由于永生化的细胞系与体内组织细胞的生物特性相差甚远，导致许多生理和病理的过程难以重复，近年来，原代细胞正逐步成为细胞和分子生物学研究的Shou选工具，为疾病机制、药物研发等提供了高质量的模型。但不可能否认的是，细胞系在科研中的地位仍十分重要，例如在标准化方案的确立上细胞系是良好的工具，某些需要大量细胞的研究如全基因组遗传筛选，由于原代细胞数量有限且对培养条件要求苛刻，细胞系也是第1选择。

 经常听到不少小伙伴抱怨——细胞养不出来，实验难以进行，其实这也正常，细胞身娇体贵难养活，养好细胞实属不易，细胞没养好，多半是你没有给你心爱的细胞建造一个温暖宜居的“房子”。首先，什么是细胞培养?细胞培养也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物，因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。细胞的生长需要营养环境，用于维持细胞生长的营养基质称为培养基，也就是上述所说的——“房子”，房子都没有搭建好，小细胞还怎么安家繁殖呢?选择培养基没有一定的标准，有几点建议可供参考：(1)建立某种细胞株所用的培养基应该是培养这种细胞首选的培养基。可以查阅参考文献，或在购买细胞株时咨询。(2) 其它实验室惯用的培养基不妨一试，许多培养基可以适合多种细胞。(3) 根据细胞株的特点、实验的需要来选择培养基。如小鼠细胞株多选 RPMI1640(4)用多种培养基培养目的细胞，观察其生长状态，可以用生长曲线、集落形成率等指标判断，根据实验结果选择最佳培养基，这是最客观的方法，但比较繁琐。 

标准品的命名规律：1、工作标准品首次标定的批号取四位数，前两位为代表标准品标定的年份，后两位为流水 号，例：2010年第一次标定批号为1001，第二次使用新制备的样品进行标定批号则为1002。2、若同一批次重新标定则在原批号加后缀，例如1001-1，第二次复标则为1001-2，依次类推。3、内部基准标准品按上述原则载加P，例如P1001。无特殊规定时，有效期及复标期如下：1、如无特殊情况，工作标准品的含量每半年复标一次或另取新生产的样品标定。当标准品暂不使用时，复标周期可能超过规定周期，在使用前进行复标，合格后可以继续使用。2、对于特定市场使用的工作标准品，复标可以按照当地药政局或者药典的规定的周期来进行。3  标准品若在使用过程中发现异常或者较大变化，应停止使用该标准品，并考虑采用更严格的包装和保存方式或缩短其复标期等措施。4、若老的基准标准品批号过期，则用此批基准标准品标定过的相应的工作标准品应按照新批号基准标准品进行重新标定，用此批标准品配制的储备溶液也应同时失效，应用新的批号基准标准品重新配制。5、基准标准品  按说明书要求，若标签或者化验单上没有指明有效期（失效期），可以到网站上查询，如USP，EP 标准品目录单，若无法查到，同本厂规定此种药品的有效期，若无法得知此批的标定日期，可以从收到标准品日期算起。6、对于省药检所，兽药检所标定的工作标准品，有效期（失效期）同该产品的有效期。标准品使用注意事项：（1）新开瓶标准品要在瓶上注明开瓶日期，应根据瓶号依次来使用（整瓶使用或者送样 情况除外），同一批号的标准品或工作对照品必须使用完一瓶后再开启另一瓶，标准品使用过程中，已取出的标准品严禁再放回原瓶中。（2） 同一瓶工作标准品的开启使用的次数不应超过20次，使用的时间不应超过1个月， 使用次数很少或具有吸湿性的工作标准品分装时应考虑一次性使用量分装。