HPLC色谱柱维护：延长HPLC色谱柱寿命的技巧

有关如何延长高效液相色谱 (HPLC) 色谱柱寿命的提示。

虽然高效液相色谱 (HPLC) 色谱柱的相对成本已经随着时间的推移而降低，但延长色谱柱寿命仍然是大多数实验室的重要考虑因素。以下提示有助于保护您的色谱柱并显着延长大多数固定相的使用寿命。

需要阅读制造商有关色谱柱推荐压力、洗脱液 pH 值和温度操作范围的文献，并遵守这些范围

请注意，较高的操作温度通常与降低的pH操作范围密切相关。在低pH值下，色谱柱降解的主要症状通常是柱效损失（峰展宽），而在高pH值下，峰拖尾和柱背压增加。

每次启动洗脱液时，避免柱床的机械冲击（掉落柱）并缓慢增加压力和流速（1mL/min/min 是理想的）

大多数现代HPLC设备都能够通过二级仪器设置自动实现这种流量-压力斜坡。由于压力冲击导致的床空洞通常通过分裂或非常严重的拖尾峰表现出来。如果替代品不易获得，可以将色谱柱倒转进行分析；然而，色谱柱的效率可能会下降得更快，因为床最终会向相反的方向坍塌，导致相同的色谱症状。

如果色谱柱变干，请使用至少含有 50% 乙腈的洗脱液非常缓慢地启动流速 (0.1mL/min/min)

如果怀疑“标准”（非“水溶液”或非极性嵌入相类型）反相色谱柱因使用 100 %水性流动相而出现相崩溃（缩短保留时间、效率低下），则应在高流速下重新激活色谱柱60 °C下的100 % 乙腈（注意不要从柱内剩余的洗脱液中沉淀任何固体缓冲液）。在这两种情况下，可能需要50到1  00个柱体积才能正确重新平衡或重新激活相。

每次使用后应正确清洗色谱柱

推荐的洗涤程序可能是：

1、当前含量为90%乙腈，每2个柱体积为10%有机物，并保持10个柱体积（再次注意通过缓慢增加乙腈浓度来避免固体缓冲液沉淀，如此处推荐的那样）。

2、每2个柱体积加入10%乙腈到50:50的乙腈-水并保持10个柱体积。

3、从系统中取出端盖并存放。色谱柱的封端对于避免相变干非常重要。

人们可能会使用较旧的 HPLC 系统作为色谱柱“清洗站”，这可以在“实时”仪器上节省大量操作时间。

如果样品可能含有颗粒物，请选择具有适当筛孔尺寸的优质在线过滤器；传统色谱柱为 0.45 μm，U  HPLC色谱柱为0.2μm是典型值

如果样品基质或稀释剂可能会损害吸附剂（例如，由于pH值）或者化学性质特别脏或难以处理，则可以使用保护柱，并且该相应与分析柱的相匹配。在选择保护柱的尺寸和连接到分析柱时要格外小心，以确保分离效率不会受到影响。

如果由于峰分裂或效率损失而怀疑色谱柱或筛板污染，可以反转色谱柱的方向以进行反冲洗，并且上述色谱柱洗涤程序是实现此目的的一个很好的“配方”

应将色谱柱从检测器上拆下以避免结垢，并注意反向冲洗只能作为最终的手段，并且可能无法达到色谱柱的原始效率。

请记住，柱体积可以使用估算π × r2 × L × 0.6（用于 HPLC 柱填充材料的硅㬵的近似间隙孔隙率）

因此，对于150×4.6mm色谱柱，这将近似为：

3.142×(2.3)2×150×0.6=1496μL或1.5mL