别八卦王宝强离婚案了，我们来看看蛋白分析的那些三氟乙酸

 Hi，我是Dr.Lu。广州绿百草的专业技术人员。

今天我和美花花一起，和大家讲解蛋白和多肽分析的那些三氟乙酸。

美花花

大家好，我是花姐。真有点不好意思，又是我。

美丽的花姐，一周不见都有点想你了。

小Lu

美花花

小样的，别贫嘴。赶紧的。讲完我还要回去看宝宝呢。

美花花

呵呵。Dr.Lu，你还是直接上吧。

三氟乙酸（TFA）是一种强羧酸。pKa=-0.23。有轻微的毒性，化学反应式：CF3COF+H2O=CF3CO2H+HF。无色挥发性发烟液体。与醋酸气味相似。有吸湿性及刺激臭。能与水、氟代烷烃、甲醇、苯、乙醚、四氯化碳和己烷混溶。

小Lu

美花花

Lu男神，真是不明觉厉。

美花花

LuLu欧巴，我今天做了多肽分析实验。

效果怎样？

小Lu

美花花

开始用普通流动相和C18色谱柱，拖尾异常严重。

肯定的，这主要是因为色谱柱中疏水键合相会残留部分硅醇基，实验中蛋白质和多肽会与其极性表面作用，从而导致拖尾。

小Lu

美花花

原来是这样~

后来前辈教我，要添加三氟乙酸。你能想象多神奇吗？

简直是神仙水，峰型马上棒棒哒。

流动相中的三氟乙酸可以跟刚刚说到的硅醇基以多种模式相互作用，从而改善峰形、克服峰展宽和拖尾问题。

小Lu

美花花

Dr.Lu，我知道离子修饰剂其实有很多，为啥做蛋白分析最好要用三氟乙酸？

主要原因是三氟乙酸易挥发，能很方便的从制备样品中出去。

另外，三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于200nm，对多肽在低波长处的检测干扰很小。

小Lu

美花花

哦~ 原来是易除去，干扰小！

美花花

小LuLu，这个问题我知道！！

上次我做实验，三氟乙酸添加在流动相中的浓度是 0.1%。

没错，一般是0.1%。

另外，改变三氟乙酸的浓度，可以细微地调整多肽在反相色谱上的选择性哦~ 这一影响对于优化分离条件、增大复杂色谱分析（如多肽的指纹图谱）的信息量是非常有益的。

小Lu

美花花

你说三氟乙酸是易挥发的，那浓度岂不是很难控制？

美花花

嗦嘎~

美花花

三氟乙酸真是蛋白分析的神仙水，那是不是倒越多越好？

然而并不是。

前面我有提到，三氟乙酸是强酸，所以在实际使用过程中容易残留从而导致色谱柱键合相水解加剧，减少柱子寿命。

小Lu

美花花

影响柱子寿命？？！！！

这问题可大了，我还是倒少点，安全！！

汗~~！！

当三氟乙酸浓度大大低于这个水平时，大部分色谱柱做出来的峰展宽和拖尾就变得十分明显。特别是部分封端做得不大好的色谱柱，要添加很多才能达到要求。所以我们还是要根据不同色谱柱的情况，调整浓度哦~

小Lu

美花花

真是鱼与熊掌不可兼得！

那Dr.Lu，有没有色谱柱是不用添加三氟乙酸，就能很好分析蛋白和多肽的呢？

还是要看实验的要求！

有一些聚合物基质色谱柱，以及优化键合相C18色谱柱，在不添加三氟乙酸的情况下也能做出不错的峰型。例如英国Hichrom旗下的ACE 300? 多肽分析反相 C18柱。

但是三氟乙酸会影响蛋白质和多肽的选择性，一般都是建议加上，从而更好的保证峰型。

小Lu

美花花

恩恩，根据实验要求匹配方案，才是正道呢。