关于鸦片面膜中的禁限用物质——“糖皮质激素”的检测全面解决方案汇总

样品前处理

称取 0.2 g 样品，加入3 mL饱和食盐水和2 mL乙腈（2次）涡旋（IKA Vortex Genius 3）提取目标物。合并二次提取的 4 mL 乙腈，加入 40 mL 水、0.2 mL亚铁氰化钾、0.2 mL 醋酸锌，混匀后 5000 rpm 离心 10 min。上清液倒入 Bond Elut Plexa 聚合物小柱 60 mg/3 mL（上接 50 mL磨口漏斗），按固相萃取净化过程获得液质上机液。

色谱和质谱条件

仪器： 1260Infinity 液相色谱/6410三重四极杆液质联用系统

色谱柱：ZORBAXSB-C18，2.1 × 50 mm，1.8 μm，

部件号 827700-902

进样量：2μ-L

流动相： A) 含 0.1% 乙酸的水溶液

B) 含 0.1% 乙酸的乙腈溶液

梯度洗脱：

时间/min     %B

     0           32

    3.0         32

   12.0        75

   14.0        75

   14.1        32

流速：0.3 mL/min

柱温：30℃

分离时间：16 min

离子源：ESI

干燥气流量：5 L/min

干燥气温度：350℃

雾化器压力：38 psi

仪器方法

色谱系统：Accela 600快速液相色谱系统

色谱柱：Hypersil Gold C18(50×2.1mm, 1.9μm)

流动相：水（含0.1%甲酸）/乙腈（含0.1%甲酸）

流速：400μL/min；

进样量：10μL

梯度条件：

质谱系统：TSQ Quantum Access Max三重四极杆

质谱条件：

离子化方式：HESI-Ⅱ

极性模式：正离子

雾化温度：300℃

鞘气：40 arb

辅助气：15 arb

离子传输管温度：300℃

质谱扫描参数：

扫描方式：t-SRM

扫描循环时间：0.3 s

分辨率：Q1分辨率分别设置为0.4和0.7 FWHM

标准曲线样品及基质样品的配制

取含41种糖皮质激素的混合对照品溶液，各组分浓度均为0.5 μg/ml，稀释至0.5ng/mL、1.0ng/ml、2.5ng/ml、5.0ng/ml、10ng/ml、25ng/ml、50ng/ml、100ng/ml，作为标准曲线工作样品。分别取空白爽肤水及精华液基质溶液，过滤膜后，配制成含20%乙腈的基质溶液，并以此基质溶液稀释样品至0.1ng/mL和0.5ng/mL。

结果与讨论

色谱条件的优化

色谱柱的选择：分别考察了Hypersi l Gold C18 (50×2.1mm, 1.9μm)和Hypersil ODS C18(10×2.1mm, 3μm) 2根规格不同的C18色谱柱对41种激素成分的分离效果。结果表明，前者对41中组分中色谱保留行为非常相似的物质能实现更好的分离，且由于前者粒径小，能获得更高的柱效。同时，由于Accela 600液相泵系统耐压能力强，可使用高流速而大大减少色谱分离所需时间。

流动相及洗脱条件的选择：分别考察了甲醇/水（0.1%甲酸）、乙腈/水（0.1%甲酸）等流动相系统对于41种激素成分的分离效果。结果表明，采用乙腈（0.1%甲酸）/水（0.1%甲酸）系统进行梯度洗脱更有利于41种激素的色谱分离。考虑到化妆品基质的影响，延后目标组分的保留时间可减小基质的干扰，因此降低初始流动相中乙腈的比例至20%，得到的谱图。

质谱条件的优化

根据待测糖皮质激素分子结构及参考国标[12] ,选择ESI(+) 作为离子化模式 ,将0.5μg/ml的标准液通过蠕动泵连续进样，由TSQ Tune质谱参数优化软件自动获得最佳的子离子、碰撞能量及透镜电压。最终所选择的母离子、特征离子和碰撞能量详见表 1。图3为部分糖皮质激素的提取离子流图（0.5ng/mL）。附表1：离子对信息：母离子、特征离子、碰撞能量和扫描时间。

方法学考察

灵敏度及线性：将标准曲线样品（0.5ng/ml、1.0ng/ml、2.5ng/ml、5.0ng/ml、10ng/ml 、25ng/ml、50ng/ml 、100ng/ml）依次进样，以峰面积对浓度绘制标准曲线，各激素成分在0.5-100ng/ml范围内的线性相关系数大于0.99（见表2）；基质中各种激素的最低检出限为0.1ng/ml，最低定量限为0.5ng/mL。精密度：取0.5ng/ml基质加标溶液重复进样5次，各色谱峰保留时间稳定，精华液基质中各组分峰面积的RSD≤9.74%（见表2）；爽肤水基质中各组分峰面积的RSD≤9.77%（见表2）。结果表明该方法稳定、可靠。

不同分辨率设置对方法灵敏度的影响以精华液基质样品为例，考察仪器分辨率设置对灵敏度的影响：下图中同行左侧色谱图为0.7FWHM条件下获得，右侧为0.4FWHM条件下获得。

实验结论

本实验应用TSQ Quantum Access Max三重四极杆液质联用系统，建立了41种糖皮质激素同时测定的方法，以基质样品为主考察了方法的灵敏度及重现性，同时考察了仪器不同分辨率设置对化合物检测的影响。本方法对化妆品基质中41种糖皮质激素的定量下限为0.5ng/mL，最低检测限可达0.1ng/mL。通过提高Q1的分辨率能有效降低基质干扰，提高部分化合物的灵敏度。分别以爽肤水空白基质、精华液空白基质与对照液进样比较，由色谱图可看出所建立的方法特异性高，能用于化妆品中41种糖皮质激素的检测。分别在爽肤水基质、精华液基质中添加41种糖皮质激素，浓度均为0.5ng/mL，各连续重复进样5针方法重现性良好。TSQ QuantumAccess Max三重四极杆液质联用系统配有可加热的电喷雾电离源、聚焦离子束的透镜组件、90度弯曲碰撞池等，可有效提高信号响应，并降低中性噪音，是化妆品中痕量非法添加成分检测的最佳选择。