MS1 小鼠胰岛内皮细胞 XY-M111

一、MS1 小鼠胰岛内皮细胞基本信息

二、细胞培养操作

1. 细胞复苏-悬浮细胞

第一步：准备一个T25的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支15ml离心管，离心管中加入4-5ml细胞完全培养基。

第二步：取出细胞冻存管，在37度水浴中快速解冻，将管子擦干消毒后迅速拿回生物安全柜。

第三步：将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000转离心5分钟。

第四步：倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。

第五步：将重悬好的细胞转移到T25细胞培养瓶，补充培养基到5ml左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。

2. 细胞传代

第一种方法：

细胞密度达到1×10⁶细胞/ml时，1000转离心5分钟收集细胞，弃上清，加入新鲜培养基，使细胞密度在3-4×10⁵细胞/ml.

第二种方法：

细胞密度达到1×10⁶细胞/ml时，将培养瓶中的细胞悬液分装到新的培养瓶，并补充新鲜培养基，使细胞密度在3-4×10⁵细胞/ml.

3. 细胞冻存

将培养瓶中的细胞悬液转移到离心管中，1000转离心5分钟收集细胞，弃上清，加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度1-2×10⁶细胞/ml。将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。

1. 细胞复苏-贴壁细胞

    1.1 离心法

        第一步：准备一个 T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支 15ml离心管，离心管中加入 4-5ml 细胞完全培养基。

        第二步：取出细胞冻存管，在 37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

        第三步：将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000 转离心 5 分钟。

        第四步：倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。

        第五步： 将重悬好的细胞转移到 T25 细胞培养瓶，补充培养基到 8ml 左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。

    1.2 不离心法

        第一步：准备一个 T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加入 8ml 左右培养基。

        第二步： 取出细胞冻存管，在 37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

        第三步：将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养，接种 16 小时后更换培养基。

2. 细胞传代

第一步：准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。

第二步：弃上清，并加 2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 次。

第三步：加入 1ml 胰酶，室温或者 37 度消化，直到细胞成片脱落，加入 3-4ml 完全培养基终止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。

第四步：收集细胞悬液，1000 转离心 5 分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。

第五步：将重悬好的细胞按比例分装至 T25 细胞培养瓶，补充培养基到 8ml 左右，十字摇晃， 将细胞铺匀后放入培养箱培养。

3. 细胞冻存

第一步：准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。

第二步：弃上清，并加 2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 次。

第三步：加入 1ml 胰酶，室温或者 37 度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。

第四步：收集细胞悬液，1000 转离心 5 分钟，弃上清。

第五步：加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度 0.8-1.5×10⁶ 细胞/ml。

第六步：将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。

三、细胞系收货须知

收到的货物会包含以下几种类型，您的货物属于：

1. 细胞冻存管：收到货物后，请检查箱子里面是否还有干冰。

    1.1 若干冰已剩余不多，不能掩埋冻存管，请及时拍照，并第一时间联系销售。

    1.2 若干冰充裕，可以安排复苏细胞；不安排复苏，请将细胞冻存管转移到液氮进行保存。短期（一周内）的存放可以放在-80 冰箱，建议最好保存在液氮中。

2. 培养瓶的活细胞：收到请检查培养瓶是否完好，是否有漏液，培养基是否浑浊

    2.1 若出现以上问题请于当天和我们销售取得联系，我们会第一时间为您处理。

    2.2 若以上问题都没有出现:拆掉培养瓶的外包装，在显微镜下对细胞进行多个视野，不同倍镜拍照。然后用酒精对瓶身进行彻底消毒，放在 37 度二氧化碳培养箱中进行复温。1-2 小时后，拿出在显微镜下观察，并进行多个视野不同倍镜拍照。若细胞达到了可以传代的密度，请及时进行传代。若细胞密度不能进行传代，请回收培养瓶中的培养基，留适量培养基在瓶中，并将培养瓶放在培养箱继续培养即可。

3. 消化后的细胞悬液：收到请检查管子是否有漏液

    3.1 若漏液，请当天和我们销售取得联系，我们会第一时间为您处理。

    3.2 若完好，将管子用酒精彻底消毒，收集细胞悬液到离心管，1000 转，离心 5 分钟，弃上清，加入培养基重悬，按照比例分装到 T25 培养瓶，并补充培养基到 ml 即可。

四、注意事项

1、建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养基可回收使用，保存在4度可使用一周。

2、不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。

3、建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。

4、该细胞复苏存活率偏低，且状态恢复需要1-2周时间，复苏后一周内避免离心，细胞有少量增殖时，补加培养基即可。

5、该细胞在受到刺激后，会出现聚团增多现象。比如在运输时候，由于温度和二氧化碳浓度都达不到培养箱的标准，在收到货后会出现大量的聚团情况。这种状况在恢复正常培养条件后养1周左右就可以恢复。

仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。