DYP0530 人诱导型多能干细胞 XY-H244

一、DYP0530 人诱导型多能干细胞基本信息

二、细胞培养操作

1. 细胞复苏

    1.1 离心法

        第一步：准备一个 T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支 15ml离心管，离心管中加入 4-5ml 细胞完全培养基。

        第二步：取出细胞冻存管，在 37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

        第三步：将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000 转离心 5 分钟。

        第四步：倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。

        第五步： 将重悬好的细胞转移到 T25 细胞培养瓶，补充培养基到 8ml 左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。

    1.2 不离心法

        第一步：准备一个 T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加入 8ml 左右培养基。

        第二步： 取出细胞冻存管，在 37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

        第三步：将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养，接种 16 小时后更换培养基。

2. 细胞传代

第一步：准备细胞完全培养基，细胞培养瓶，胰酶（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。

第二步：弃上清，并加 2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 次。

第三步：加入 1ml 胰酶，室温或者 37 度消化，直到细胞成片脱落，加入 3-4ml 完全培养基终止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。

第四步：收集细胞悬液，1000 转离心 5 分钟，弃上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。

第五步：将重悬好的细胞按比例分装至 T25 细胞培养瓶，补充培养基到 8ml 左右，十字摇晃， 将细胞铺匀后放入培养箱培养。

3. 细胞冻存

第一步：准备细胞冻存液，细胞冻存管，胰酶（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA），DPBS。

第二步：弃上清，并加 2-3mlDPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 次。

第三步：加入 1ml 胰酶，室温或者 37 度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。

第四步：收集细胞悬液，1000 转离心 5 分钟，弃上清。

第五步：加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度 0.8-1.5×10⁶ 细胞/ml。

第六步：将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。

三、细胞系收货须知

收到的货物会包含以下几种类型，您的货物属于：

1. 细胞冻存管：收到货物后，请检查箱子里面是否还有干冰。

    1.1 若干冰已剩余不多，不能掩埋冻存管，请及时拍照，并第一时间联系销售。

    1.2 若干冰充裕，可以安排复苏细胞；不安排复苏，请将细胞冻存管转移到液氮进行保存。短期（一周内）的存放可以放在-80 冰箱，建议最好保存在液氮中。

2. 培养瓶的活细胞：收到请检查培养瓶是否完好，是否有漏液，培养基是否浑浊

    2.1 若出现以上问题请于当天和我们销售取得联系，我们会第一时间为您处理。

    2.2 若以上问题都没有出现:拆掉培养瓶的外包装，在显微镜下对细胞进行多个视野，不同倍镜拍照。然后用酒精对瓶身进行彻底消毒，放在 37 度二氧化碳培养箱中进行复温。1-2 小时后，拿出在显微镜下观察，并进行多个视野不同倍镜拍照。若细胞达到了可以传代的密度，请及时进行传代。若细胞密度不能进行传代，请回收培养瓶中的培养基，留适量培养基在瓶中，并将培养瓶放在培养箱继续培养即可。

3. 消化后的细胞悬液：收到请检查管子是否有漏液

    3.1 若漏液，请当天和我们销售取得联系，我们会第一时间为您处理。

    3.2 若完好，将管子用酒精彻底消毒，收集细胞悬液到离心管，1000 转，离心 5 分钟，弃上清，加入培养基重悬，按照比例分装到 T25 培养瓶，并补充培养基到 ml 即可。

仅用于科研，不能用于临床诊断！所有产品仅供科研使用，不得用于人或动物的治疗等任何其他用途，不为任何个人提供产品和服务。以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。