细胞因子的质控以及表达体系比较

上海信裕

2016/04/01 14:10

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质控

生物学活性
不同的细胞因子用不同的方法进行相应的体外（ in vitro ）或体内（ in vivo ）活性检测。
重组细胞因子活性通常会以 ED50 （半数有效浓度）或 units （活性单位）来标识。因此 1mg 细胞因子中所含的活性单位（units ）可以理解为将 1mg/ml 细胞因子原液稀释成 ED50 的稀释倍数注： ED50 ( 半数有效浓度 ): 可诱导 50%最大反应的细胞因子浓度。

纯度测定

纯度：由以下方法测定纯度大于 95.0%
（ a ）高效液相色谱（ SEC-HPLC ）；
（ b ）还原和非还原银染 SDS-PAGE 。

· SDS 能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构

· 强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂

分子量
还原 SDS-PAGE 测定
本法测得的分子量，除单链蛋白质外，均不是天然蛋白质的完整分子量，而是组成这些蛋白质的亚基或肽链的分子量。本法对一些电荷异常，或构象异常，或带有大辅基的蛋白质不适用，如组蛋白 F1 和某些糖蛋白等。对一些结构蛋白如胶原蛋白等也不适用。

准确度比较：点喷雾质谱法 > 还原的 SDS-PAGE> 非还原的 SDS-PAGE>HPLC

此法测得的表观分子量由于翻译后修饰（磷酸化，糖基化），剪切，异构等原因，会比预期的分子量偏大。

N 末端氨基酸序列分析
重组蛋白经 N 末端氨基酸序列分析；必要时应用 SDS-PAGE, RP-HPLC 和质谱（ MS ）检测其真实性。

内毒素对活性的影响
内毒素（ Endotoxin ），是革兰氏阴性菌细胞壁的产物。当细菌死亡自溶或粘附在其它细胞时，表现毒性，内毒素的主要化学成分是脂多糖中的类脂 A 成分。
内毒素与细胞膜上的受体结合引起免疫反应，对细胞有较强的毒性作用。采用多种方法有效去除内毒素 , 使用鲎试剂（ Limulus Amebocyte,LAL ）测定含量小于 0.1ng/ug (1 EU/ug) 。

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