兔P选择素(P-selectin) 免疫组化试剂盒
该试剂盒以HRP 标记的链霉亲和素复合物(HRP Streptavidin Conjugate,
HRP-SA)为基础,可用于检测细胞、组织内的特异性P-selectin 抗原。该试剂
盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的P-selectin
一抗与相应靶抗原结合后,用生物化二抗与一抗特异性结合,最后加入HRP-SA,
形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物,显微镜下观察成像。
试剂盒所含试剂:
试剂A 通透液:0.1% Triton-X 100 10 mL(选用)
试剂B 封闭缓冲液(封闭用) 20 mL
试剂C (原装进口分装)已稀释的即用型P-selectin 一抗(2.5ml)
试剂D (原装进口分装)生物素化羊抗兔IgG 1 支
兔P选择素(P-selectin) 免疫组化试剂盒
(浓度1.5 mg/mL,稀释比为1:300~1:500)50 μL+抗体稀释液20ml
试剂E HRP-SA 复合物1 支(浓度1 μM,稀释比1:50~1:200)100 μL
试剂F DAB 显色液 5ml
用户自备试剂:
1. 10mM TBS(pH7.2~7.4)
三羟基氨基甲烷1.21g
氯化钠7.6g
加蒸馏水800mL,浓盐酸调pH 值至7.2~7.4,最后定容至1000mL
TBS-T:TBS+Tween 20(0.05%体积比)
2.抗原修复液(依检测抗原不同而选择不同的修复液)
10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液
柠檬酸0.38g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水900mL,浓盐酸调pH 值至6.0,最后定容至1000mL
或:0.5M EDTA 修复液(pH8.0)
EDTA·2H2O 186.1g
兔P选择素(P-selectin) 免疫组化试剂盒
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水700mL,用10mM NaOH 调pH 值至8.0,最后定容至1000Ml
3. 缓冲甘油封固剂10 mL
4. Tween 20 5 mL
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤(建议方案):
石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度
1.烤片: 将待做切片置于切片架上,于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr;
2.脱蜡: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇5min,95%乙醇2 次(每次2min),85%
乙醇2 min;75%乙醇2min,自来水冲洗,ddH2O 洗2×2min;
4.抗原修复: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温
度达到98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O 洗2×
2min,TBS 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附1)* 注:有些抗原勿需修复,
直接进入第5 步封闭。
5.封闭: 滴加试剂B,37℃湿盒孵育30 min;
6.加一抗:滴加用试剂C(即用型一抗),37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜;
7.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
8.封闭: 滴加试剂B,37℃湿盒孵育10 min;
9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂D),37℃湿盒中孵育
30 min;
10.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
11.封闭: 滴加试剂Tween 20,37℃湿盒孵育封闭20 min;
12.加HRP-SA: 滴加用抗体稀释液稀释的试剂E(1:50~200,终浓度5~20 nM),
37℃湿盒中孵育30 min;
13.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min),TBS 洗涤(2×5 min);
14.显色:应用DAB 溶液(试剂F)显色;
15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;
16.封片: 待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;
17.观察成像: 显微镜下观察成像。
兔P选择素(P-selectin) 免疫组化试剂盒
注意事项:
1. 修复后缓冲液须自然冷却,自来水冲洗后方能把切片取出,骤冷有可能导致
结晶或抗原封闭。
2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到,用过的柠檬酸缓冲液不能反复使
用。
3. 若试剂为微量浓缩液,用前应低速离心,将内盖和管壁附着的溶液离到底部。
4. 封片前一定要换用TBS 充分洗涤,以便洗去组织上残留的Tween 20,否则会
影响结果观察。
5. 如须复染细胞核,则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封
片。
附1:
抗原修复方法
常用抗原修复液:柠檬酸缓冲液(0.01M pH6.0)、EDTA 抗原修复液(pH8.0 或
9.0)等等。
一、酶消化修复法
切片脱蜡水化处理,TBS 冲洗,在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶,37℃孵育
20~30min 后TBS 冲洗即可。
二、微波抗原修复法
微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料
切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档或高档继续微波10~15min,取出微波
盒冷却至室温后,自来水冲洗,取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异,
须自行调整。
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾,将组织切片置于耐高温切片架上,修复
液沸腾后放入切片架,盖上锅盖,待喷气后计时1.5~2.5min 即可脱离热源,自
然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔水式高压抗原修复法
不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾,微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸
腾,将切片放入微波盒中,再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖,待喷气后计时
4~8 min 即可关闭热源,自然冷却至室温后自来水冲洗,取出切片。此方法适用
于较难检测或核抗原的修复。
人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)ELISA试剂盒
人血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)ELISA试剂盒
人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)ELISA试剂盒
人血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA试剂盒
人血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒
人血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒
人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(sTRAIL)ELISA试剂盒
人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体4(TRAIL-R4)ELISA试剂盒
人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体3(TRAIL-R3)ELISA试剂盒
人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体1(TRAIL-R1)ELISA试剂盒
人肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒
人肿瘤坏死因子α(TNF-α)ELISA试剂盒
人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA试剂盒
人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒
人转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒
人转化生长因子α(TGF-α)ELISA试剂盒
人基质细胞衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)ELISA试剂盒
人干细胞因子受体(SCFR)ELISA试剂盒
人干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒
人可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒
人可溶性CD30配体(sCD30L)ELISA试剂盒
人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA试剂盒
人P选择素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA试剂盒
人血血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒
人血血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)ELISA试剂盒
人神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒
人神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒
人的神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒
人巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)ELISA试剂盒
人巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISA试剂盒
人巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)ELISA试剂盒
人巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA试剂盒
人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒
人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒
人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA试剂盒
人单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA试剂盒
人单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA试剂盒
人单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒
人L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒
人白介素9(IL-9)ELISA试剂盒
人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒
人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒
人白介素-5(IL-5)ELISA试剂盒
人白介素4(IL-4)ELISA试剂盒
人白介素3(IL-3)ELISA试剂盒
人白介素2可溶性受体β链(IL-2sRβ )ELISA试剂盒
人白介素2可溶性受体α链(IL-2sRα/CD25)ELISA试剂盒
人白介素2(IL-2)ELISA试剂盒
人白介素1α(IL-1α )ELISA试剂盒
人白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA试剂盒
人白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA试剂盒
人白介素16(IL-16)ELISA试剂盒
人白介素13(IL-13)ELISA试剂盒
人白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒
人白介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒
人白介素11(IL-11)ELISA试剂盒
人白介素10(IL-10)ELISA试剂盒
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人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA试剂盒
人胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)ELISA试剂盒
人胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)ELISA试剂盒
人胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒
人胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒
人γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒
人细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA试剂盒
人肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒
人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒
人胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒
人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒
人中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA试剂盒
人趋化因子(fractalkine/CX3CL1) ELISA试剂盒
人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA试剂盒
人碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISA试剂盒
人碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)ELISA试剂盒
人酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)ELISA试剂盒
人凋亡相关因子配体(FASL)ELISA试剂盒
人凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒
人E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒
人嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA试剂盒
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人内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒
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