兔P选择素（P-selectin）免疫组化试剂盒

兔P选择素（P-selectin） 免疫组化试剂盒
该试剂盒以HRP 标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，
HRP-SA）为基础，可用于检测细胞、组织内的特异性P-selectin 抗原。该试剂
盒具有灵敏度高、特异性强、定性定位准确、背景清晰。在所用的P-selectin
一抗与相应靶抗原结合后，用生物化二抗与一抗特异性结合，最后加入HRP-SA，
形成抗原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA 复合物，显微镜下观察成像。
试剂盒所含试剂：
试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）
试剂B 封闭缓冲液（封闭用） 20 mL
试剂C （原装进口分装）已稀释的即用型P-selectin 一抗（2.5ml）
试剂D （原装进口分装）生物素化羊抗兔IgG 1 支
兔P选择素（P-selectin） 免疫组化试剂盒
（浓度1.5 mg/mL，稀释比为1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml
试剂E HRP-SA 复合物1 支（浓度1 μM，稀释比1:50~1:200）100 μL
试剂F DAB 显色液 5ml
用户自备试剂：
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）
三羟基氨基甲烷1.21g
氯化钠7.6g
加蒸馏水800mL，浓盐酸调pH 值至7.2~7.4，最后定容至1000mL
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积比）
2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）
10mM pH6.0 柠檬酸缓冲液
柠檬酸0.38g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水900mL，浓盐酸调pH 值至6.0，最后定容至1000mL
或：0.5M EDTA 修复液（pH8.0）
EDTA·2H2O 186.1g
兔P选择素（P-selectin） 免疫组化试剂盒
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏水700mL，用10mM NaOH 调pH 值至8.0，最后定容至1000Ml
3. 缓冲甘油封固剂10 mL
4. Tween 20 5 mL
石蜡包埋组织切片免疫染色
实验步骤（建议方案）：
石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度
1.烤片： 将待做切片置于切片架上，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；
2.脱蜡： 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min；
3.水化： 切片经下行酒精水化，无水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%
乙醇2 min；75%乙醇2min，自来水冲洗，ddH2O 洗2×2min；
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温
度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然冷却，自来水冲洗，ddH2O 洗2×
2min，TBS 洗涤（2×2min）（具体修复方法见附1）* 注：有些抗原勿需修复，
直接进入第5 步封闭。
5.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；
7.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
8.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育10 min；
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育
30 min；
10.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min）；
11.封闭： 滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；
12.加HRP-SA： 滴加用抗体稀释液稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20 nM），
37℃湿盒中孵育30 min；
13.洗涤： TBS-T 洗涤（3×5 min），TBS 洗涤（2×5 min）；
14.显色：应用DAB 溶液（试剂F）显色；
15.复染：自来水充分冲洗，复染，脱水，透明；
16.封片： 待组织标本干后，用试剂缓冲甘油封固剂封片；
17.观察成像： 显微镜下观察成像。
兔P选择素（P-selectin） 免疫组化试剂盒
注意事项：
1. 修复后缓冲液须自然冷却，自来水冲洗后方能把切片取出，骤冷有可能导致
结晶或抗原封闭。
2. 缓冲液的量必须保证所有切片都能浸泡到，用过的柠檬酸缓冲液不能反复使
用。
3. 若试剂为微量浓缩液，用前应低速离心，将内盖和管壁附着的溶液离到底部。
4. 封片前一定要换用TBS 充分洗涤，以便洗去组织上残留的Tween 20，否则会
影响结果观察。
5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封
片。
附1：
抗原修复方法
常用抗原修复液：柠檬酸缓冲液（0.01M pH6.0）、EDTA 抗原修复液（pH8.0 或
9.0）等等。
一、酶消化修复法
切片脱蜡水化处理，TBS 冲洗，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育
20~30min 后TBS 冲洗即可。
二、微波抗原修复法
微波盒中加入抗原修复液微波加热至沸腾，将脱蜡水化后的切片置于耐高温塑料
切片架上，放入已沸腾的缓冲液中，中档或高档继续微波10~15min，取出微波
盒冷却至室温后，自来水冲洗，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，
须自行调整。
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至沸腾，将组织切片置于耐高温切片架上，修复
液沸腾后放入切片架，盖上锅盖，待喷气后计时1.5~2.5min 即可脱离热源，自
然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔水式高压抗原修复法
不锈钢高压锅中加自来水加热至沸腾，微波盒中加入修复液于微波炉中加热至沸
腾，将切片放入微波盒中，再将微波盒放入高压锅中盖上锅盖，待喷气后计时
4~8 min 即可关闭热源，自然冷却至室温后自来水冲洗，取出切片。此方法适用
于较难检测或核抗原的修复。

人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)ELISA试剂盒    

人血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)ELISA试剂盒    

人血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)ELISA试剂盒    

人血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA试剂盒    

人血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA试剂盒     

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人白介素2可溶性受体α链(IL-2sRα/CD25)ELISA试剂盒    

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人白介素16(IL-16)ELISA试剂盒    

人白介素13(IL-13)ELISA试剂盒    

人白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒    

人白介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒    

人白介素11(IL-11)ELISA试剂盒    

人白介素10(IL-10)ELISA试剂盒     

人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)ELISA试剂盒    

人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA试剂盒    

人胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)ELISA试剂盒    

人胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)ELISA试剂盒    

人胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒    

人胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒     

人γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒     

人细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA试剂盒     

人肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒     

人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒    

人胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒    

人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒    

人中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA试剂盒    

人趋化因子(fractalkine/CX3CL1) ELISA试剂盒    

人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA试剂盒    

人碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISA试剂盒    

人碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)ELISA试剂盒    

人酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)ELISA试剂盒    

人凋亡相关因子配体(FASL)ELISA试剂盒    

人凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒    

人E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒     

人嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA试剂盒    

人鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒    

人内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒    

人睫状神经营养因子(CNTF)ELISA试剂盒    

人CD30分子(CD30)ELISA试剂盒    

人CXC趋化因子受体1(CXCR1)ELISA试剂盒    

人XC趋化因子受体1(XCR1)ELISA试剂盒    

人二级淋巴组织趋化因子(SLC/CCL21)ELISA试剂盒     

人E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒    

人脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒    

人白细胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA试剂盒    

人活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒    

人神经调节蛋白1(NRG-1)ELISA试剂盒    

人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒    

人多巴胺D2受体(D2R)ELISA试剂盒    

人内吗啡肽-2(EM-2)ELISA试剂盒    

人α-内吗啡肽(α-EP)ELISA试剂盒    

人抑制素(INH)ELISA试剂盒    

人神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA试剂盒     

人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA试剂盒    

人促睡眠肽(DSIP)ELISA试剂盒    

人6-羟多巴胺(6-OHDA)ELISA试剂盒     

人心纳素(ANF)ELISA试剂盒     

人神经髓鞘蛋白(p2)ELISA试剂盒     

人精氨酸加压素(AVP)ELISA试剂盒