小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)ELISA试剂盒

小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
1.2ng/L -40 ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含
量。
实验原理      小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)ELISA试剂盒

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平。用纯化
的小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中
依次加入低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，再与HRP 标记的低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)抗体
结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP
酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的低密度
脂蛋白胆固醇(LDL-C)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标
准曲线计算样品中小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶
2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（72ng/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份
5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张
6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个
标本要求        小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)ELISA试剂盒

1. 血清：
   室温血液自然凝固10-20 分钟后，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保
   存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
   2. 血浆：
   应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心20
   分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
   尿液：
   用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀
   形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
   4.细胞培养上清：
   小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)ELISA试剂盒

2. 检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。
   5.培养细胞:         小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)ELISA试剂盒检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml 左右。
   通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左
   右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
   6.组织标本:
   切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化
   后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀
   浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检
   测，其余冷冻备用。
   7.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进
   行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
   8.不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
   操作步骤
   1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
   释。
   36 ng/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
   18 ng/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
   9 ng/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
   4.5 ng/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
   2.25 ng/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
   2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
   待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
   然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
   量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
   3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
   4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
   5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
   重复5 次，拍干。
   6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
   7. 温育：操作同3。
   8. 洗涤：操作同5。
   9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
   10 分钟.
   10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
   11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
   液后15 分钟以内进行。
   操作程序总结：
   小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)ELISA试剂盒

3. 计算
   以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
   OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
   准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
   即为样品的实际浓度。
   小鼠低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)ELISA试剂盒

4. 注意事项
   1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
   用完，板条应装入密封袋中保存。
   2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
   3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
   控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
   4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
   大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
   算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
   5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
   6．底物请避光保存。
   7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
   8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
   9．本试剂不同批号组分不得混用。
   保存条件及有效期
   1．试剂盒保存：；2-8℃。
   2．有效期：6 个月

5.