Mouse podocyte 小鼠肾足细胞系(株)传代基本技术
1.选用细胞生长状态好(80-90%)的细胞进行传代。
2.吸除细胞培养液。用含双抗的1×PBS(pH7.4)清洗细胞培养
瓶2次。加入1ml 消化液至细胞培养瓶,轻轻摇动,使细胞消化
液刚刚覆盖细胞表面。注:消化液配比为:0.25%胰蛋白酶+
0.02%EDTA。
3.将细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37℃培养箱静置培养数
分钟后,在显微镜下观察细胞的消化状态。注意:若贴壁细胞逐
渐趋于圆形或部分悬浮后,即可用手指轻轻拍打细胞培养瓶侧部
或底部使大部分贴壁细胞脱落,之后立即加入细胞终止液,终止
细胞消化。每种细胞的消化时间有差异,消化时注意观察,不要
消化太久。
4.吹打培养瓶中悬浮细胞若干次,吸出细胞悬浮液,转入15ml
离心管中,800rpm 离心5分钟。
5.弃离心管中上清液,加入细胞培养液重悬细胞。细胞计数,确
定细胞数量。
6.细胞分瓶后,加入适量细胞培养液至细胞培养瓶中,置于
5%CO2、95%空气、37℃培养箱静置培养24小时
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