游离脂肪酸（NEFA）检测试剂盒

游离脂肪酸（NEFA）检测试剂盒原理采用间接竞争ELISA方法检测猪尿、组织、饲料中的沙丁胺醇，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的沙丁胺醇和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗沙丁胺醇抗体，再加入酶标二抗，用TMB底物显色，样品中的沙丁胺醇含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出沙丁胺醇含量。

游离脂肪酸（NEFA）检测试剂盒操作步骤

1．将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2．按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷冻。

3．加标准品/样本50 μL /孔，然后加入抗体工作液50 μL /孔，再振荡混匀，用封板膜盖板，37 ℃反应30 min。

4．洗板4-5次，每次浸泡30秒，拍干。

5．加入酶标记物100 μL /孔，用封板膜盖板，37 ℃反应20 min。

6．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。

7．显色：每孔加入底物缓冲液50 μL，再加底物液50 μL，轻轻振荡混匀，37 ℃环境避光显色10 min。

8．测定：每孔加入终止液50 μL，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450 nm处（在20 min内读完数据），测定吸光度值。

游离脂肪酸（NEFA）检测试剂盒安全性

1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

4． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

5． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

6． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

7． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

8． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

9． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

10． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

11． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

12． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

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