胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白3(IGF2BP3)重组蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor 2 mRNA Binding Protein 3 (IGF2BP3)FOR IN VITRO AND RESEARCH USE ONLY, NOT FOR USE IN CLINICAL DIAGNOSTIC PROCEDURES!Organism species    Homo sapiens (Human)    Product No.    XY617Hu01    Source    Prokaryotic expression    Host    E.coli    Purity    > 95%    UOM    50ug    Predicted Molecular Mass    41.6kDa    Concentration    8.5    Applications    SDS-PAGE; WB; ELISA; IP.    Endotoxin Level    Formulation    Supplied as lyophilized form in PBS, pH7.4, containing 5% trehalose, 0.01% sarcosyl.    SEQUENCESThe target protein is fused with two N-terminal Tags, His-tag and T7-tag, its sequence is listed below.MGSSHHHHHH SSGLVPRGSH MASMTGGQQM GRGSEF- NKLYIGNLS ENAAPSDLES IFKDAKIPVS GPFLVKTGYA FVDCPDESWA LKAIEALSGK IELHGKPIEV EHSVPKRQRI RKLQIRNIPP HLQWEVLDSL LVQYGVVESC EQVNTDSETA VVNVTYSSKD QARQALDKLN GFQLENFTLK VAYIPDEMAA QQNPLQQPRG RRGLGQRGSS RQGSPGSVSK QKPCDLPLRL LVPTQFVGAI IGKEGATIRN ITKQTQSKID VHRKENAGAA EKSITILSTP EGTSAACKSI LEIMHKEAQD IKFTEEIPLK ILAHNNFVGR LIGKEGRNLK KIEQDTDTKI TISPLQELTL YNPERTITVK GNVETCAKAE EEIUSAGEReconstitute in sterile PBS, pH7.2-pH7.4.STORAGE AND STABILITYStorage: Avoid repeated freeze/thaw cycles. Store at 2-8oC for one month. Aliquot and store at -80oC for 12 months.Stability Test: The thermal stability is described by the loss rate of the target protein. The loss rate was determined by accelerated thermal degradation test, that is, incubate the protein at 37oC for 48h, and no obvious degradation and precipitation were observed. (Referring from China Biological Products Standard, which was calculated by the Arrhenius equation.) The loss of this protein is less than 5% within the expiration date under appropriate storage condition.About the MARKER (complimentary)Effective Size Range: 10kDa to 70kDa.Protein bands: 10kDa, 14kDa, 18kDa, 22kDa, 26kDa, 33kDa, 44kDa and 70kDa.Double intensity bands: The 26kDa, 18kDa, 10kDa bands are at double intensity to make location and size approximation of proteins of interest quick and easy.Ready-to-use: No need to heat, dilute or add reducing agents before use.

美国塔夫茨大学生物学家不改变基因组序列就成功诱导一种扁虫长出了另一种扁虫的头形和脑结构。这一成果表明生理线路可作为一种新的表观遗传信息，决定生物体内较大的结构。11月版的《国际分子科学》杂志对此研究做了详细介绍。该研究发现，由基因组决定的头部形状并非固定不变，控制体内的电突触能改变基因表征，因此在某种程度上，物种间差异可以通过生物电网络来决定。实验所用的是再生能力很强的真涡扁虫。研究人员通过打乱扁虫细胞间的缝隙连接（蛋白质通道），让它们长出了不同的头形、脑结构和成熟干细胞。他们还发现，扁虫改变头形的难易与进化有关，变形前后两个物种之间的关系越近，改变越容易。这些实验加强了物种在进化历史上的联系，也表明生理线路调节或许是进化中改变动物体型的另一种工具。“人们普遍认为，染色质（构成染色体的遗传物质）的序列和结构决定了一种生物的体型，但新研究显示，生理网络的作用能超越物种之间所空缺的结构。”论文高级作者、塔夫茨大学再生与发育生物学中心主管迈克尔·莱文说，“通过电突触调节细胞之间的缝隙连接，我们能让一种有着正常基因组的动物长出另一种动物的头形和脑花纹。”掌握如何确定及影响机体形状非常重要，这些知识可以帮助生物学家修复生物体的出生缺陷，使其在受伤后长出新的身体结构。以往的研究曾把几种扁虫永久性地变成了双头虫。而这次变形是暂时的，扁虫完全长出另一种头形后的几周里，会再次调整变回原来的头形，但为何如此还需进一步研究。论文第一作者、该校生物学本科生玛雅·埃蒙斯-贝尔说，在扁虫的头再生期间，细胞间的电信号连接为种间头形的改变提供了重要信息，这种信息对推动再生医学发展，更好地理解生物进化非常重要。

华东理工大学教授龙亿涛小组在单细胞内p53蛋白原位成像检测研究领域取得新进展，相关研究在线发表于《德国应用化学》。p53是一种肿瘤抑制蛋白，具有反式激活功能和广谱的肿瘤抑制作用。在肿瘤细胞内，p53蛋白通常会发生变异，干扰细胞的正常生长调控机制。“p53蛋白一直是近年来生命科学领域的研究热点。”因此，原位检测细胞内p53蛋白的表达对肿瘤的监测和诊疗具有重要意义。研究人员在该项研究中制备了一种可同时检测细胞内野生型和变异p53蛋白的纳米囊泡，囊泡内部包裹有能特异性识别野生型p53蛋白的纳米金，同时，囊泡表面修饰有异硫氰酸荧光素标记的抗变异p53蛋白抗体。囊泡进入细胞后，采用等离子体共振成像以及荧光成像技术，利用显微镜对细胞内p53蛋白进行原位成像，可以实现单细胞层面上野生型和变异p53蛋白的同时成像检测。该工作展示了活细胞内p53蛋白的分布图，发现变异p53蛋白在肿瘤细胞内过表达，而正常p53蛋白受到抑制。专家认为，该发现表明了p53蛋白通路异常与肿瘤发生之间存在一定的关联机制，为研究p53蛋白参与的生物通路以及发展p53蛋白相关的抗肿瘤药物提供了新方法。

人多肽YY/酪酪肽(PYY)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：                                                          96T10pg/ml-240pg/ml 使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中多肽YY/酪酪肽(PYY)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人多肽YY/酪酪肽(PYY)水平。用纯化的人多肽YY/酪酪肽(PYY)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入多肽YY/酪酪肽(PYY)，再与HRP标记的多肽YY/酪酪肽(PYY)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的多肽YY/酪酪肽(PYY)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人多肽YY/酪酪肽(PYY)浓度。 试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   标准品（480pg/ml）   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   标准品稀释液   1.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。240pg/ml   5号标准品   150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液   120pg/ml   4号标准品   150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液   60pg/ml   3号标准品   150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液   30pg/ml   2号标准品   150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液   15pg/ml   1号标准品   150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液     2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：  计算  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月 

大鼠17-羟皮质类固醇（17-OHCS）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：                                                          96T1.5μg/L -36μg/L 使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中17-羟皮质类固醇（17-OHCS）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠17-羟皮质类固醇（17-OHCS）水平。用纯化的大鼠17-羟皮质类固醇（17-OHCS）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入17-羟皮质类固醇（17-OHCS），再与HRP标记的17-羟皮质类固醇（17-OHCS）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的17-羟皮质类固醇（17-OHCS）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠17-羟皮质类固醇（17-OHCS）浓度。 试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   标准品（72μg/L）   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   标准品稀释液   1.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。36μg/L   5号标准品   150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液   18μg/L   4号标准品   150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液   9.0μg/L   3号标准品   150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液   4.5μg/L   2号标准品   150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液   2.25μg/L   1号标准品   150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液     2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：  计算  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月 

全球艾滋病病毒感染者达3690万人联合国艾滋病规划署日前发布的一份报告显示，据估测，全球有3690万艾滋病病毒（HIV）感染者，其中70%生活在撒哈拉以南的非洲。同时，在这些感染者中，有49%的人不知道自己的HIV状况，约57%的人没有服用抗逆转录病毒药物。该报告在12月1日世界艾滋病日前夕出炉，是为了庆祝截至今年6月已使1580万人服用抗逆转录病毒药物所取得的进步。不过，报告同时指出，还有诸多国家在满足世界卫生组织于9月发布的指导原则方面还有很远的距离。指导原则呼吁每个受感染的人都接受治疗。让所有感染者开始服用抗逆转录病毒药物的大规模、持续性举措源自一份最新证据，即早期开始治疗不仅对感染者的健康有益，还使他们传播病毒的可能性变得极低，前者是如果能完全抑制自身感染的话。不过，报告指出，在撒哈拉以南的非洲，估计有68%的感染者没有抑制体内的HIV水平。报告还突出了一些其他统计数据。比如，到2014年年底，全球约有3690万HIV感染者，而这是根据估测的3430万～4140万感染者取的中间值。到2014年年底，有200万人（190万～220万人）新感染HIV。自2010年起，新发HIV病例下降了35%。同时，2014年，有120万人（98万～160万人）死于同艾滋病相关的疾病。到今年6月，1580万HIV感染者获得抗逆转录病毒治疗，而2014年6月，这一数据为1360万人。

         人同型半胱氨酸（Hcy）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：                                                          96T0.2μmol/L – 8μmol/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中同型半胱氨酸（Hcy）含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人同型半胱氨酸（Hcy）水平。用纯化的人同型半胱氨酸（Hcy）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入同型半胱氨酸（Hcy），再与HRP标记的同型半胱氨酸（Hcy）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的同型半胱氨酸（Hcy）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人同型半胱氨酸（Hcy）浓度。 试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   标准品（16μmol/L）   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   标准品稀释液   1.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。8μmol/L   5号标准品   150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液   4μmol/L   4号标准品   150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液   2μmol/L   3号标准品   150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液   1μmol/L   2号标准品   150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液   0.5μmol/L   1号标准品   150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液     2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结： 计算  以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6．底物请避光保存。7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月 

       人单纯疱疹病毒1+2型抗体IgM（HSV-1+2 IgM）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。                                                                  96使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中单纯疱疹病毒1+2型抗体IgM（HSV-1+2 IgM）表达。实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人单纯疱疹病毒1+2型抗体IgM（HSV-1+2 IgM）表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中单纯疱疹病毒1+2型抗体IgM（HSV-1+2 IgM）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人单纯疱疹病毒1+2型抗体IgM（HSV-1+2 IgM）的存在与否。试剂盒组成 1   30倍浓缩洗涤液   20ml×1瓶   7   终止液   6ml×1瓶   2   酶标试剂   6ml×1瓶   8   阳性对照   0.5ml×1瓶   3   酶标包被板   12孔×8条   9   阴性对照   0.5ml×1瓶   4   样品稀释液   6ml×1瓶   10   说明书   1份   5   显色剂A液   6ml×1瓶   11   封板膜   2张     6   显色剂B液   6ml×1/瓶   12   密封袋   1个   标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）  2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl。然后在待测样品孔先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。  操作程序总结：  计算和结果判定：  试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10  临界值（CUT OFF）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15  阴性判定：样品OD值  阳性判定：样品OD值≥ 临界值（CUT OFF）者为单纯疱疹病毒1+2型抗体IgM（HSV-1+2 IgM）阳性。 注意事项1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物请避光保存。6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月 

新研究为肿瘤免疫治疗抗体开发找到新靶标最近，来自法国蒙特利尔临床研究所的一个研究团队对一类免疫细胞进行深入研究,发现一条可以促进肿瘤免疫治疗方法开发的新机制。 DNAM-1蛋白是NK细胞表面的一个受体，在正常情况下它能够与NK细胞表面的TIGIT受体竞争结合癌细胞，如果TIGIT受体与癌细胞发生结合就会降低NK细胞的杀伤效率。 这项最新研究表明抗TIGIT抗体或将作为肿瘤免疫治疗的新方法发挥重要作用，这类抗体能够增强DNAM-1蛋白的功能，进一步增强NK细胞摧毁肿瘤细胞的能力。研究人员表示上述机制将为下一代癌症治疗方法的开发带来重大影响。

检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-12 p40抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-12 p40会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-12 p40抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-12 p40抗体与结合在包被抗体上的人IL-12 p40结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-12 p40浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-12 p40的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为2000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制1000pg/mL标准品：取0.5mL2000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  2000 1000 500 250 125 62.5 31.25 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 18.75pg/mL。 ●检测范围：31.25–2000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-12 p40，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-12抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-12会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-12抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-12抗体与结合在包被抗体上的人IL-12结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-12浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-12的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为1000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制500pg/mL标准品：取0.5mL1000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  1000 500 250 125 62.5 31.25 15.625 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情 况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 9.375pg/mL。 ●检测范围：15.625–1000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-12，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-1β抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-1β会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-1β抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-1β抗体与结合在包被抗体上的人IL-1β结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-1β浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-1β的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为500pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.813、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制250pg/mL标准品：取0.5mL500pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  500 250 125 62.5 31.25 15.625 7.813 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 4.688pg/mL。 ●检测范围：7.813–500pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-1β，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

人白介素12(IL-12)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-12抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-12会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-12抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-12抗体与结合在包被抗体上的人IL-12结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-12浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-12的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为1000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：1000、500、250、125、62.5、31.25、15.625、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制500pg/mL标准品：取0.5mL1000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  1000 500 250 125 62.5 31.25 15.625 0 pg/mL 洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。 操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。 注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 9.375pg/mL。 ●检测范围：15.625–1000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-12，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算 

人白介素1β(IL-1β)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-1β抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-1β会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-1β抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-1β抗体与结合在包被抗体上的人IL-1β结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-1β浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-1β的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。 试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸 检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为500pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.813、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制250pg/mL标准品：取0.5mL500pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  500 250 125 62.5 31.25 15.625 7.813 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。 注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 4.688pg/mL。 ●检测范围：7.813–500pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-1β，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算 

人白介素8(IL-8)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！ 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-8抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-8会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-8抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-8抗体与结合在包被抗体上的人IL-8结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-8浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-8的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为2000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制1000pg/mL标准品：取0.5mL2000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  2000 1000 500 250 125 62.5 31.25 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 18.75pg/mL。 ●检测范围：31.25–2000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-8，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

Human BMP-10 ELISA Kit使用说明书特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人BMP-10抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人BMP-10会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人BMP-10抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人BMP-10抗体与结合在包被抗体上的人BMP-10结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，BMP-10浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中BMP-10的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为10ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品：取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  10 5 2.5 1.25 0.625 0.313 0.156 0 ng/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 0.094ng/mL。 ●检测范围：0.156–10ng/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 BMP-10，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

Human BMP-1 ELISA Kit使用说明书特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人BMP-1抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人BMP-1会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人BMP-1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人BMP-1抗体与结合在包被抗体上的人BMP-1结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，BMP-1浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中BMP-1的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为10ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL标准品：取0.5mL10ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  10 5 2.5 1.25 0.625 0.313 0.156 0 ng/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 0.094ng/mL。 ●检测范围：0.156–10ng/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 BMP-1，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

Human BALP ELISA Kit使用说明书特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人BALP抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人BALP会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人BALP抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人BALP抗体与结合在包被抗体上的人BALP结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，BALP浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中BALP的浓度。 样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为5000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：5000、2500、1250、625、312.5、156.25、78.125、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制2500pg/mL标准品：取0.5mL5000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。   4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  5000 2500 1250 625 312.5 156.25 78.125 0 pg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 46.875pg/mL。 ●检测范围：78.125–5000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 BALP，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

Human ITIH4 ELISA KitNote: *: [96T/48T] #: It’s OK to keep the kit in 4℃, if the kit is scheduled to be used up in one week. Please keep the reagent in -20℃ for long-term storage or repeated use. The reagent in each vial is slightly more that its volume written on label, please take out the required volume by certain tools (such as transferpettor, measuring cylinder), rather than pouring directly.  Human ITIH4 ELISA KitTest principle This ELISA kit uses Sandwich-ELISA as the method. The micro ELISA plate provided in this kit has been pre-coated with an antibody specific to Human ITIH4. Standards or samples are then added to the appropriate micro ELISA plate wells and combined to the specific antibody. Then a biotinylated detection antibody specific for Human ITIH4 and Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) conjugate is added to each micro plate well and incubated. Free components are washed away. The substrate solution is added to each well. Only those wells that contain Human ITIH4, biotinylated detection antibody and Avidin-HRP conjugate will appear blue in color. The enzyme-substrate reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color turn yellow. The optical density (OD) is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ± 2 nm. The OD value is  proportional to the concentration of Human ITIH4. You can calculate the concentration of ITIH4 in the samples by comparing the OD of the samples to the standard curve.  Human ITIH4 ELISA KitSample collection and storage Serum - Allow samples to clot for 2 hours at room temperature or overnight at 4°Cbefore centrifugation for 20 minutes at approximately 1000×g. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Blood collection tubes should be disposable, non-pyrogenic, and non-endotoxin.  Plasma - Collect plasma using EDTA-Na2 or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 15 minutes at 1000×g at 2 - 8°C within 30 minutes of collection. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Avoid hemolysis, high cholesterol samples. Human ITIH4 ELISA Kit Tissue homogenates– For general information, hemolysis blood may affect the result, so you should rinse the tissues with ice-cold PBS (0.01M, pH=7.4) to remove excess blood thoroughly. Tissue pieces should be weighed and then minced to small pieces which will be homogenized in PBS (the volume depends on the weight of the tissue. 9mL PBS would be appropriate to 1 gram tissue pieces. Some protease inhibitor is recommended to add into the PBS.) with a glass homogenizer on ice. To further break the cells, you can sonicate the suspension with an ultrasonic cell disrupter or subject it to freeze-thaw cycles. The homogenates are then centrifugated for 5minutes at 5000×g to get the supernate.  Cell culture supernate – Centrifuge supernate for 20 minutes to remove insoluble impurity and cell debris at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the clear supernate and carry out the assay immediately.  Human ITIH4 ELISA KitOther biological fluids –Centrifuge samples for 20 minutes at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. (You can refer to our website for detailed processing Sample preparation – Samples should be clear and transparent and be centrifuged to remove suspended solids. Note: Serum and plasma to be used within 7 days when stored at 2-8°C, otherwise samples must be divided and stored at -20°C (≤1 month) or -80°C (≤6 months) to avoid loss of bioactivity and contamination. Avoid freeze-thaw cycles. When performing the assay slowly bring samples to room temperature. If the sample concentration is higher than the maximum standard value, please dilute it with appropriate factor according to the actual situation. (A pre-test is recommended to determine the dilute factor).  Other supplies required  Microplate reader with 450nm wavelength filter High-precision transferpettor, EP tubes and disposable pipette tips 37°C Incubator, Deionized or distilled water Absorbent paper  Reagent preparation Bring all reagents to room temperature before use. Wash Buffer - Dilute 30mL of Concentrated Wash Buffer into 750 mL of Wash Buffer with deionized or distilled water. Put unused solution back at 4°C. If crystals have formed in the concentrate, you can warm it with 40°Cwater bath (Heating temperature should not exceed 50°C) and mix it gently until the crystals have completely dissolved. The solution should be cooled to room temperature before use. Standard- Centrifuge at 10,000×g for 1 minute, and reconstitute the Standard with 1.0mL of Reference Standard &Sample Diluent. Tighten the lid, let it stand for 10 minutes and turn it upside down for several times. After it dissolves fully, mix it thoroughly with a pipette. This reconstitution produces a stock solution of 200ng/mL. Then make serial dilutions as needed (Making serial dilution in the wells directly is not permitted). The recommended concentrations are as follows:200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、0ng/mL . As if you want to make standard solution at the concentration of 100ng/mL, you can take 0.5mL the standard at 200ng/mL, add it to an EP tube with 0.5mL Reference Standard &Sample Diluent, and mix it. The procedures of making the remaining concentrations are all the same. The undiluted standard serves as the highest standard (200ng/mL). The Reference Standard &Sample Diluent serves as the zero (0ng/mL). (500μL/tube，for example. Can also be diluted according to the actual amount，such as 200μL/tube)

Human APT ELISA KitNote: *: [96T/48T] #: It’s OK to keep the kit in 4℃, if the kit is scheduled to be used up in one week. Please keep the reagent in -20℃ for long-term storage or repeated use. The reagent in each vial is slightly more that its volume written on label, please take out the required volume by certain tools (such as transferpettor, measuring cylinder), rather than pouring directly.  Test principle This ELISA kit uses Sandwich-ELISA as the method. The micro ELISA plate provided in this kit has been pre-coated with an antibody specific to Human APT. Standards or samples are then added to the appropriate micro ELISA plate wells and combined to the specific antibody. Then a biotinylated detection antibody specific for Human APT and Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) conjugate is added to each micro plate well and incubated. Free components are washed away. The substrate solution is added to each well. Only those wells that contain Human APT, biotinylated detection antibody and Avidin-HRP conjugate will appear blue in color. The enzyme-substrate reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color turn yellow. The optical density (OD) is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ± 2 nm. The OD value is  proportional to the concentration of Human APT. You can calculate the concentration of APT in the samples by comparing the OD of the samples to the standard curve.  Human APT ELISA KitSample collection and storage Serum - Allow samples to clot for 2 hours at room temperature or overnight at 4°Cbefore centrifugation for 20 minutes at approximately 1000×g. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Blood collection tubes should be disposable, non-pyrogenic, and non-endotoxin.  Plasma - Collect plasma using EDTA-Na2 or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 15 minutes at 1000×g at 2 - 8°C within 30 minutes of collection. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Avoid hemolysis, high cholesterol samples.  Tissue homogenates– For general information, hemolysis blood may affect the result, so you should rinse the tissues with ice-cold PBS (0.01M, pH=7.4) to remove excess blood thoroughly. Tissue pieces should be weighed and then minced to small pieces which will be homogenized in PBS (the volume depends on the weight of the tissue. 9mL PBS would be appropriate to 1 gram tissue pieces. Some protease inhibitor is recommended to add into the PBS.) with a glass homogenizer on ice. To further break the cells, you can sonicate the suspension with an ultrasonic cell disrupter or subject it to freeze-thaw cycles. The homogenates are then centrifugated for 5minutes at 5000×g to get the supernate.  Cell culture supernate – Centrifuge supernate for 20 minutes to remove insoluble impurity and cell debris at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the clear supernate and carry out the assay immediately.  Human APT ELISA KitOther biological fluids –Centrifuge samples for 20 minutes at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. (You can refer to our website for detailed processing Sample preparation – Samples should be clear and transparent and be centrifuged to remove suspended solids. Note: Serum and plasma to be used within 7 days when stored at 2-8°C, otherwise samples must be divided and stored at -20°C (≤1 month) or -80°C (≤6 months) to avoid loss of bioactivity and contamination. Avoid freeze-thaw cycles. When performing the assay slowly bring samples to room temperature. If the sample concentration is higher than the maximum standard value, please dilute it with appropriate factor according to the actual situation. (A pre-test is recommended to determine the dilute factor).  Other supplies required  Microplate reader with 450nm wavelength filter High-precision transferpettor, EP tubes and disposable pipette tips 37°C Incubator, Deionized or distilled water Absorbent paper  Reagent preparation Bring all reagents to room temperature before use. Wash Buffer - Dilute 30mL of Concentrated Wash Buffer into 750 mL of Wash Buffer with deionized or distilled water. Put unused solution back at 4°C. If crystals have formed in the concentrate, you can warm it with 40°Cwater bath (Heating temperature should not exceed 50°C) and mix it gently until the crystals have completely dissolved. The solution should be cooled to room temperature before use. Standard- Centrifuge at 10,000×g for 1 minute, and reconstitute the Standard with 1.0mL of Reference Standard &Sample Diluent. Tighten the lid, let it stand for 10 minutes and turn it upside down for several times. After it dissolves fully, mix it thoroughly with a pipette. This reconstitution produces a stock solution of 10ng/ml. Then make serial dilutions as needed (Making serial dilution in the wells directly is not permitted). The recommended concentrations are as follows:10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0ng/ml . As if you want to make standard solution at the concentration of 5ng/ml, you can take 0.5mL the standard at 10ng/ml, add it to an EP tube with 0.5mL Reference Standard &Sample Diluent, and mix it. The procedures of making the remaining concentrations are all the same. The undiluted standard serves as the highest standard (10ng/ml). The Reference Standard &Sample Diluent serves as the zero (0ng/ml). (500μL/tube，for example. Can also be diluted according to the actual amount，such as 200μL/tube)   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  10 5 2.5 1.25 0.625 0.313 0.156 0 ng/ml   Human APT ELISA KitBiotinylated Detection Ab —Calculate the required amount before experiment (100μL/well). In   actual preparation you should prepare 100~200μL more. Dilute the concentrated Biotinylated Detection Ab to the working concentration using Biotinylated Detection Ab Diluent(1:100). Concentrated HRP Conjugate — Calculate the required amount before experiment (100μL/well). In actual preparation you should prepare 100~200μL more. Dilute the Concentrated HRP Conjugate to the working concentration using Concentrated HRP Conjugate Diluent(1:100).  Washing Procedure: 1. Automated washer: add 350μL wash buffer into each well, the interval between injection and suction should be set about 60s. 2.Manual wash: add 350μL wash buffer into each well, soak it for 1~2minutes, suck(no inside wall touching) or get rid of liquid within the micro ELISA plate and pat it dry on thick clean absorbent paper.  Assay procedure Allow all reagents to reach room temperature All the reagents should be mixed thoroughly by gently swirling before pipetting. Avoid foaming. 1. Add Sample: Add 100μL of Standard, Blank, or Sample per well. The blank well is added with Reference Standard &Sample Diluent. Solutions are added to the bottom of micro ELISA plate well, avoid inside wall touching and foaming to the best of your ability. Mix it gently. Cover the plate with sealer we provided. Incubate for 90 minutes at 37°C. 2. Biotinylated Detection Ab: Remove the liquid of each well, don't wash. Immediately add 100μL of Biotinylated Detection Ab working solution to each well. Cover with the Plate sealer. Gently tap the plate to ensure thorough mixing. Incubate for 1 hour at 37°C. 3. Wash: Aspirate each well and wash, repeating the process three times. Wash by filling each well with Wash Buffer (approximately 350μL) using a squirt bottle, multi-channel pipette, manifold dispenser or automated washer. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Buffer by aspirating or decanting. Invert the plate and pat it against thick clean absorbent paper. 4. HRP Conjugate: Add 100μL of HRP Conjugate working solution to each well. Cover with the Plate sealer. Incubate for 30 minutes at 37°C. 5. Wash: Repeat the wash process for five times as conducted in step 3. 6. Substrate: Add 90μL of Substrate Solution to each well. Cover with a new Plate sealer. Incubate for about 15 minutes at 37°C. Protect the plate from light. The reaction time can be shortened or extended according to the actual color change, but not more than 30minutes. When apparent gradient appeared in standard wells, you can terminate the reaction. 7. Stop: Add 50μL of Stop Solution to each well. Color turn to yellow immediately. The adding order of stop solution should be as the same as the substrate solution. 8. OD Measurement: Determine the optical density (OD value) of each well at once, using a  microplate reader set to 450nm. You should open the microplate reader ahead, preheat the instrument, and set the testing parameters. 9. After experiment, put all the unused reagents back into the refrigerator according to the specified storage temperature respectively until their expiry.  Important Note: 1. Storage: All the reagents in the kit should be stored following the instructions. Exposure of reagents to strong light should be avoided in the process of incubation and storage. All the taps of reagents should be tightened to prevent evaporation and microbial contamination, or erroneous results may occur. 2. ELISA Plate: Little water-like substance may appear in the ELISA Plate just opened, this is normal and will not have any impact on the experiment results. Keep the remaining plates in spare aluminum foil bag, and keep it in temperature suggested before. 3. Add Sample: The interval of sample adding between the first well and the last well should not be too long, otherwise will cause different pre-incubation time, which will significantly affect the experiment’s accuracy and repeatability. The interval controlled within 10minutes is good. Parallel measurement is recommended. 4. Incubation: To prevent evaporation, proper adhesion of plate sealers during incubation steps is necessary. Do not allow wells to sit uncovered for extended periods between incubation steps. Do not let the strips dry at any time during the assay. Strict compliance with the given incubation time and temperature. 5. Washing: The wash procedure is critical. Insufficient washing will result in poor precision and falsely elevated absorbance readings Residual liquid in the reaction wells should be pat dry against absorbent paper in the washing process. But don't put absorbent paper into reaction wells directly. Note that clear the residual liquid and fingerprint in the bottom before measurement, so as not to affect the microtiter plate reader. 6. Reagent Preparation: As the volume of Concentrated Biotinylated Detection Ab and Concentrated HRP Conjugate is very small, liquid may adhere to the tube wall or tube cap when being transported. You better hand-throw it or centrifugal it for 1 minute at 1000rpm. Please pipette the solution for 4-5 times before pippeting. Please carefully reconstitute Standards, working solutions of Biotinylated Detection Ab and HRP Conjugate according to the instructions. To minimize imprecision caused by pipetting, ensure that pipettors are calibrated. It is recommended to suck more than 10μL for once pipetting. Do not reuse standard solution, working solution of Biotinylated Detection Ab and HRP Conjugate, which have been diluted. If you need to use standard repeatedly, you can divide the standard into small pack according to the amount of each assay, keep them at -20～-80°C and avoid repeated freezing and thawing 7. Reaction Time Control: Please control reaction time strictly following this product description! 8. Substrate: Substrate Solution is easily contaminated. Please protect it from light.   9. Mixing: You’d better use microoscillator at the lowest frequency, as sufficient and gentle mixing is particularly important to reaction result. If there is no microsocillator available, you can knock the ELISA plate frame gently with your finger before reaction. 10. Security: Please wear lab coats and latex gloves for protection. Especially detecting samples of blood or other body fluid, please perform following the national security columns of biological laboratories. 11. Do not use component from different batches of kit(washing buffer and stop solution can be an exception) 12. To avoid cross-contamination, change pipette tips between adding of each standard level, between sample adding, and between reagent adding. Also, use separate reservoirs for each reagent. Otherwise, the results will be inaccurate!  Calculation of results Average the duplicate readings for each standard and samples and subtract the average zero standard optical density. Create a standard curve by plotting the mean OD value for each standard on the y-axis or x-axis against the concentration on the x-axis or y-axis and draw a best fit curve through the points on the graph. It is recommended to use some professional software to do this calculation, such as curve expert 1.3 or 1.4. In the software interface, a best fitting equation of standard curve will be calculated using OD values and concentrations of standard sample. The software will calculate the concentration of samples after entering the OD value of samples. If samples have been diluted, the concentration calculated from the standard curve must be multiplied by the dilution factor. If the OD of the sample surpasses the upper limit of the standard curve, you should re-test it after appropriate dilution. The actual concentration is the calculated concentration multiplied dilution factor.  Human APT ELISA KitSensitivity The minimum detectable dose of Human APT is 0.094ng/ml (The sensitivity of this assay, or Lower Limit of Detection (LLD) was defined as the lowest protein concentration that could be differentiated from zero).  Detection Range 0.156–10ng/ml.  Specificity This kit recognizes recombinant and natural Human APT. No significant cross-reactivity or interference was observed.  Repeatability Coefficient of variation were

Human bFGF/FGF2 ELISA Kit*: [96T/48T] #: It’s OK to keep the kit in 4℃, if the kit is scheduled to be used up in one week. Please keep the reagent in -20℃ for long-term storage or repeated use. The reagent in each vial is slightly more that its volume written on label, please take out the required volume by certain tools (such as transferpettor, measuring cylinder), rather than pouring directly.  Test principle This ELISA kit uses Sandwich-ELISA as the method. The micro ELISA plate provided in this kit has been pre-coated with an antibody specific to Human bFGF/FGF2. Standards or samples are then added to the appropriate micro ELISA plate wells and combined to the specific antibody. Then a biotinylated detection antibody specific for Human bFGF/FGF2 and Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) conjugate is added to each micro plate well and incubated. Free components are washed away. The substrate solution is added to each well. Only those wells that contain Human bFGF/FGF2, biotinylated detection antibody and Avidin-HRP conjugate will appear blue in color. The enzyme-substrate reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color turn yellow. The optical density (OD) is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ± 2 nm. The OD value is   proportional to the concentration of Human bFGF/FGF2. You can calculate the concentration of bFGF/FGF2 in the samples by comparing the OD of the samples to the standard curve.  Human bFGF/FGF2 ELISA KitSample collection and storage Serum - Allow samples to clot for 2 hours at room temperature or overnight at 4°Cbefore centrifugation for 20 minutes at approximately 1000×g. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Blood collection tubes should be disposable, non-pyrogenic, and non-endotoxin.  Plasma - Collect plasma using EDTA-Na2 or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 15 minutes at 1000×g at 2 - 8°C within 30 minutes of collection. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Avoid hemolysis, high cholesterol samples.  Tissue homogenates– For general information, hemolysis blood may affect the result, so you should rinse the tissues with ice-cold PBS (0.01M, pH=7.4) to remove excess blood thoroughly. Tissue pieces should be weighed and then minced to small pieces which will be homogenized in PBS (the volume depends on the weight of the tissue. 9mL PBS would be appropriate to 1 gram tissue pieces. Some protease inhibitor is recommended to add into the PBS.) with a glass homogenizer on ice. To further break the cells, you can sonicate the suspension with an ultrasonic cell disrupter or subject it to freeze-thaw cycles. The homogenates are then centrifugated for 5minutes at 5000×g to get the supernate.  Human bFGF/FGF2 ELISA KitCell culture supernate – Centrifuge supernate for 20 minutes to remove insoluble impurity and cell debris at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the clear supernate and carry out the assay immediately.  Other biological fluids –Centrifuge samples for 20 minutes at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. (You can refer to our website for detailed processing Sample preparation – Samples should be clear and transparent and be centrifuged to remove suspended solids. Note: Serum and plasma to be used within 7 days when stored at 2-8°C, otherwise samples must be divided and stored at -20°C (≤1 month) or -80°C (≤6 months) to avoid loss of bioactivity and contamination. Avoid freeze-thaw cycles. When performing the assay slowly bring samples to room temperature. If the sample concentration is higher than the maximum standard value, please dilute it with appropriate factor according to the actual situation. (A pre-test is recommended to determine the dilute factor).  Other supplies required  Microplate reader with 450nm wavelength filter High-precision transferpettor, EP tubes and disposable pipette tips 37°C Incubator, Deionized or distilled water Absorbent paper  Reagent preparation Bring all reagents to room temperature before use. Wash Buffer - Dilute 30mL of Concentrated Wash Buffer into 750 mL of Wash Buffer with deionized or distilled water. Put unused solution back at 4°C. If crystals have formed in the concentrate, you can warm it with 40°Cwater bath (Heating temperature should not exceed 50°C) and mix it gently until the crystals have completely dissolved. The solution should be cooled to room temperature before use. Standard- Centrifuge at 10,000×g for 1 minute, and reconstitute the Standard with 1.0mL of Reference Standard &Sample Diluent. Tighten the lid, let it stand for 10 minutes and turn it upside down for several times. After it dissolves fully, mix it thoroughly with a pipette. This reconstitution produces a stock solution of 800pg/mL. Then make serial dilutions as needed (Making serial dilution in the wells directly is not permitted). The recommended concentrations are as follows:800、400、200、100、50、25、12.5、0pg/mL . As if you want to make standard solution at the concentration of 400pg/mL, you can take 0.5mL the standard at 800pg/mL, add it to an EP tube with 0.5mL Reference Standard &Sample Diluent, and mix it. The procedures of making the remaining concentrations are all the same. The undiluted standard serves as the highest standard (800pg/mL). The Reference Standard &Sample Diluent serves as the zero (0pg/mL). (500μL/tube，for example. Can also be diluted according to the actual amount，such as 200μL/tube)   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  800 400 200 100 50 25 12.5 0 pg/mL   Human bFGF/FGF2 ELISA KitBiotinylated Detection Ab —Calculate the required amount before experiment (100μL/well). In  actual preparation you should prepare 100~200μL more. Dilute the concentrated Biotinylated Detection Ab to the working concentration using Biotinylated Detection Ab Diluent(1:100). Concentrated HRP Conjugate — Calculate the required amount before experiment (100μL/well). In actual preparation you should prepare 100~200μL more. Dilute the Concentrated HRP Conjugate to the working concentration using Concentrated HRP Conjugate Diluent(1:100).  Washing Procedure: 1. Automated washer: add 350μL wash buffer into each well, the interval between injection and suction should be set about 60s. 2.Manual wash: add 350μL wash buffer into each well, soak it for 1~2minutes, suck(no inside wall touching) or get rid of liquid within the micro ELISA plate and pat it dry on thick clean absorbent paper.  Assay procedure Allow all reagents to reach room temperature All the reagents should be mixed thoroughly by gently swirling before pipetting. Avoid foaming. 1. Add Sample: Add 100μL of Standard, Blank, or Sample per well. The blank well is added with Reference Standard &Sample Diluent. Solutions are added to the bottom of micro ELISA plate well, avoid inside wall touching and foaming to the best of your ability. Mix it gently. Cover the plate with sealer we provided. Incubate for 90 minutes at 37°C. 2. Biotinylated Detection Ab: Remove the liquid of each well, don't wash. Immediately add 100μL of Biotinylated Detection Ab working solution to each well. Cover with the Plate sealer. Gently tap the plate to ensure thorough mixing. Incubate for 1 hour at 37°C. 3. Wash: Aspirate each well and wash, repeating the process three times. Wash by filling each well with Wash Buffer (approximately 350μL) using a squirt bottle, multi-channel pipette, manifold dispenser or automated washer. Complete removal of liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Buffer by aspirating or decanting. Invert the plate and pat it against thick clean absorbent paper. 4. HRP Conjugate: Add 100μL of HRP Conjugate working solution to each well. Cover with the Plate sealer. Incubate for 30 minutes at 37°C. 5. Wash: Repeat the wash process for five times as conducted in step 3. 6. Substrate: Add 90μL of Substrate Solution to each well. Cover with a new Plate sealer. Incubate for about 15 minutes at 37°C. Protect the plate from light. The reaction time can be shortened or extended according to the actual color change, but not more than 30minutes. When apparent gradient appeared in standard wells, you can terminate the reaction. 7. Stop: Add 50μL of Stop Solution to each well. Color turn to yellow immediately. The adding order of stop solution should be as the same as the substrate solution. 8. OD Measurement: Determine the optical density (OD value) of each well at once, using a  microplate reader set to 450nm. You should open the microplate reader ahead, preheat the instrument, and set the testing parameters. 9. After experiment, put all the unused reagents back into the refrigerator according to the specified storage temperature respectively until their expiry.  Human bFGF/FGF2 ELISA KitImportant Note: 1. Storage: All the reagents in the kit should be stored following the instructions. Exposure of reagents to strong light should be avoided in the process of incubation and storage. All the taps of reagents should be tightened to prevent evaporation and microbial contamination, or erroneous results may occur. 2. ELISA Plate: Little water-like substance may appear in the ELISA Plate just opened, this is normal and will not have any impact on the experiment results. Keep the remaining plates in spare aluminum foil bag, and keep it in temperature suggested before. 3. Add Sample: The interval of sample adding between the first well and the last well should not be too long, otherwise will cause different pre-incubation time, which will significantly affect the experiment’s accuracy and repeatability. The interval controlled within 10minutes is good. Parallel measurement is recommended. 4. Incubation: To prevent evaporation, proper adhesion of plate sealers during incubation steps is necessary. Do not allow wells to sit uncovered for extended periods between incubation steps. Do not let the strips dry at any time during the assay. Strict compliance with the given incubation time and temperature. 5. Washing: The wash procedure is critical. Insufficient washing will result in poor precision and falsely elevated absorbance readings Residual liquid in the reaction wells should be pat dry against absorbent paper in the washing process. But don't put absorbent paper into reaction wells directly. Note that clear the residual liquid and fingerprint in the bottom before measurement, so as not to affect the microtiter plate reader. 6. Reagent Preparation: As the volume of Concentrated Biotinylated Detection Ab and Concentrated HRP Conjugate is very small, liquid may adhere to the tube wall or tube cap when being transported. You better hand-throw it or centrifugal it for 1 minute at 1000rpm. Please pipette the solution for 4-5 times before pippeting. Please carefully reconstitute Standards, working solutions of Biotinylated Detection Ab and HRP Conjugate according to the instructions. To minimize imprecision caused by pipetting, ensure that pipettors are calibrated. It is recommended to suck more than 10μL for once pipetting. Do not reuse standard solution, working solution of Biotinylated Detection Ab and HRP Conjugate, which have been diluted. If you need to use standard repeatedly, you can divide the standard into small pack according to the amount of each assay, keep them at -20～-80°C and avoid repeated freezing and thawing 7. Reaction Time Control: Please control reaction time strictly following this product description! 8. Substrate: Substrate Solution is easily contaminated. Please protect it from light.  9. Mixing: You’d better use microoscillator at the lowest frequency, as sufficient and gentle mixing is particularly important to reaction result. If there is no microsocillator available, you can knock the ELISA plate frame gently with your finger before reaction. 10. Security: Please wear lab coats and latex gloves for protection. Especially detecting samples of blood or other body fluid, please perform following the national security columns of biological laboratories. 11. Do not use component from different batches of kit(washing buffer and stop solution can be an exception) 12. To avoid cross-contamination, change pipette tips between adding of each standard level, between sample adding, and between reagent adding. Also, use separate reservoirs for each reagent. Otherwise, the results will be inaccurate!  Calculation of results Average the duplicate readings for each standard and samples and subtract the average zero standard optical density. Create a standard curve by plotting the mean OD value for each standard on the y-axis or x-axis against the concentration on the x-axis or y-axis and draw a best fit curve through the points on the graph. It is recommended to use some professional software to do this calculation, such as curve expert 1.3 or 1.4. In the software interface, a best fitting equation of standard curve will be calculated using OD values and concentrations of standard sample. The software will calculate the concentration of samples after entering the OD value of samples. If samples have been diluted, the concentration calculated from the standard curve must be multiplied by the dilution factor. If the OD of the sample surpasses the upper limit of the standard curve, you should re-test it after appropriate dilution. The actual concentration is the calculated concentration multiplied dilution factor.  Sensitivity The minimum detectable dose of Human bFGF/FGF2 is 7.5pg/mL (The sensitivity of this assay, or Lower Limit of Detection (LLD) was defined as the lowest protein concentration that could be differentiated from zero).  Human bFGF/FGF2 ELISA KitDetection Range 12.5–800pg/mL.  Specificity This kit recognizes recombinant and natural Human bFGF/FGF2. No significant cross-reactivity or interference was observed.  Repeatability Coefficient of variation were

Human ACA-IgG (Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗原夹心ELISA法。用抗原包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人ACA-IgG会与包被抗原结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗原和辣根过氧化物酶标记的亲和素。生物素化的抗原与结合在包被抗原上的人ACA-IgG结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，ACA-IgG浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中ACA-IgG的浓度。 Human ACA-IgG (Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可参考：6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  Human ACA-IgG (Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为320μg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：320、160、80、40、20、10、5、0μg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0μg/mL。如配制160μg/mL标准品：取0.5mL320μg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗原工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗原稀释液稀释浓缩生物素化抗原(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  320 160 80 40 20 10 5 0 μg/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。 Human ACA-IgG (Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit 操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗原工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ag及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗原工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ag时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 Human ACA-IgG (Anti-Cardiolipin Antibody IgG) ELISA Kit 灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 3μg/mL。 ●检测范围：5–320μg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 ACA-IgG，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL，37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗原工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

Human ACA-IgA (Anti-Cardiolipin Antibody IgA) ELISA Kit特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗原夹心ELISA法。用抗原包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人ACA-IgA会与包被抗原结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗原和辣根过氧化物酶标记的亲和素。生物素化的抗原与结合在包被抗原上的人ACA-IgA结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，ACA-IgA浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中ACA-IgA的浓度。 Human ACA-IgA (Anti-Cardiolipin Antibody IgA) ELISA Kit样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可参考：6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  Human ACA-IgA (Anti-Cardiolipin Antibody IgA) ELISA Kit试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为160μg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：160、80、40、20、10、5、2.5、0μg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0μg/mL。如配制80μg/mL标准品：取0.5mL160μg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗原工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗原稀释液稀释浓缩生物素化抗原(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  160 80 40 20 10 5 2.5 0 μg/mL  Human ACA-IgA (Anti-Cardiolipin Antibody IgA) ELISA Kit洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗原工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情 况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ag及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗原工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ag时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  Human ACA-IgA (Anti-Cardiolipin Antibody IgA) ELISA Kit灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 1.5μg/mL。 ●检测范围：2.5–160μg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 ACA-IgA，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均 操作概要 1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL，37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗原工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

Human IL-16 (Interleukin 16) ELISA Kit特别说明： *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整） #: 一周内使用可存于4℃，需长时间存放或多次使用建议存于-20℃. 相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些，请在使用时量取而非直接倒出！  检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-16抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-16会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-16抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-16抗体与结合在包被抗体上的人IL-16结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-16浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-16的浓度。 Human IL-16 (Interleukin 16) ELISA Kit样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可参考：6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  Human IL-16 (Interleukin 16) ELISA Kit试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸 检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为2000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制1000pg/mL标准品：取0.5mL2000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  2000 1000 500 250 125 62.5 31.25 0 pg/mL  Human IL-16 (Interleukin 16) ELISA Kit洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。 操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。 注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。 灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 18.75pg/mL。 ●检测范围：31.25–2000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-16，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均Human IL-16 (Interleukin 16) ELISA Kit操作概要  1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

Human LN (Laminin) ELISA KitNote: *: [96T/48T] #: It’s OK to keep the kit in 4℃, if the kit is scheduled to be used up in one week. Please keep the reagent in -20℃ for long-term storage or repeated use. The reagent in each vial is slightly more that its volume written on label, please take out the required volume by certain tools (such as transferpettor, measuring cylinder), rather than pouring directly.  Human LN (Laminin) ELISA KitTest principle This ELISA kit uses Sandwich-ELISA as the method. The micro ELISA plate provided in this kit has been pre-coated with an antibody specific to Human LN. Standards or samples are then added to the appropriate micro ELISA plate wells and combined to the specific antibody. Then a biotinylated detection antibody specific for Human LN and Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) conjugate is added to each micro plate well and incubated. Free components are washed away. The substrate solution is added to each well. Only those wells that contain Human LN, biotinylated detection antibody and Avidin-HRP conjugate will appear blue in color. The enzyme-substrate reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color turn yellow. The optical density (OD) is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ± 2 nm. The OD value is  proportional to the concentration of Human LN. You can calculate the concentration of LN in the samples by comparing the OD of the samples to the standard curve.  Sample collection and storage Serum - Allow samples to clot for 2 hours at room temperature or overnight at 4°Cbefore centrifugation for 20 minutes at approximately 1000×g. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Blood collection tubes should be disposable, non-pyrogenic, and non-endotoxin.  Human LN (Laminin) ELISA KitPlasma - Collect plasma using EDTA-Na2 or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 15 minutes at 1000×g at 2 - 8°C within 30 minutes of collection. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Avoid hemolysis, high cholesterol samples.  Tissue homogenates– For general information, hemolysis blood may affect the result, so you should rinse the tissues with ice-cold PBS (0.01M, pH=7.4) to remove excess blood thoroughly. Tissue pieces should be weighed and then minced to small pieces which will be homogenized in PBS (the volume depends on the weight of the tissue. 9mL PBS would be appropriate to 1 gram tissue pieces. Some protease inhibitor is recommended to add into the PBS.) with a glass homogenizer on ice. To further break the cells, you can sonicate the suspension with an ultrasonic cell disrupter or subject it to freeze-thaw cycles. The homogenates are then centrifugated for 5minutes at 5000×g to get the supernate.  Cell culture supernate – Centrifuge supernate for 20 minutes to remove insoluble impurity and cell debris at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the clear supernate and carry out the assay immediately.  Other biological fluids –Centrifuge samples for 20 minutes at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. (You can refer to our website for detailed processing Sample preparation – Samples should be clear and transparent and be centrifuged to remove suspended solids. Note: Serum and plasma to be used within 7 days when stored at 2-8°C, otherwise samples must be divided and stored at -20°C (≤1 month) or -80°C (≤6 months) to avoid loss of bioactivity and contamination. Avoid freeze-thaw cycles. When performing the assay slowly bring samples to room temperature. If the sample concentration is higher than the maximum standard value, please dilute it with appropriate factor according to the actual situation. (A pre-test is recommended to determine the dilute factor).  Human LN (Laminin) ELISA KitOther supplies required  Microplate reader with 450nm wavelength filter High-precision transferpettor, EP tubes and disposable pipette tips 37°C Incubator, Deionized or distilled water Absorbent paper  Reagent preparation Bring all reagents to room temperature before use. Wash Buffer - Dilute 30mL of Concentrated Wash Buffer into 750 mL of Wash Buffer with deionized or distilled water. Put unused solution back at 4°C. If crystals have formed in the concentrate, you can warm it with 40°Cwater bath (Heating temperature should not exceed 50°C) and mix it gently until the crystals have completely dissolved. The solution should be cooled to room temperature before use. Standard- Centrifuge at 10,000×g for 1 minute, and reconstitute the Standard with 1.0mL of Reference Standard &Sample Diluent. Tighten the lid, let it stand for 10 minutes and turn it upside down for several times. After it dissolves fully, mix it thoroughly with a pipette. This reconstitution produces a stock solution of 10ng/mL. Then make serial dilutions as needed (Making serial dilution in the wells directly is not permitted). The recommended concentrations are as follows:10、5、2.5、1.25、0.625、0.313、0.156、0ng/mL . As if you want to make standard solution at the concentration of 5ng/mL, you can take 0.5mL the standard at 10ng/mL, add it to an EP tube with 0.5mL Reference Standard &Sample Diluent, and mix it. The procedures of making the remaining concentrations are all the same. The undiluted standard serves as the highest standard (10ng/mL). The Reference Standard &Sample Diluent serves as the zero (0ng/mL). (500μL/tube，for example. Can also be diluted according to the actual amount，such as 200μL/tube) Human LN (Laminin) ELISA Kit

Human AAP (Alanine Aminopeptidase) ELISA KitNote: *: [96T/48T] #: It’s OK to keep the kit in 4℃, if the kit is scheduled to be used up in one week. Please keep the reagent in -20℃ for long-term storage or repeated use. The reagent in each vial is slightly more that its volume written on label, please take out the required volume by certain tools (such as transferpettor, measuring cylinder), rather than pouring directly.  Human AAP (Alanine Aminopeptidase) ELISA KitTest principle This ELISA kit uses Sandwich-ELISA as the method. The micro ELISA plate provided in this kit has been pre-coated with an antibody specific to Human AAP. Standards or samples are then added to the appropriate micro ELISA plate wells and combined to the specific antibody. Then a biotinylated detection antibody specific for Human AAP and Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) conjugate is added to each micro plate well and incubated. Free components are washed away. The substrate solution is added to each well. Only those wells that contain Human AAP, biotinylated detection antibody and Avidin-HRP conjugate will appear blue in color. The enzyme-substrate reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color turn yellow. The optical density (OD) is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ± 2 nm. The OD value is  proportional to the concentration of Human AAP. You can calculate the concentration of AAP in the samples by comparing the OD of the samples to the standard curve.  Human AAP (Alanine Aminopeptidase) ELISA Kit Sample collection and storage Serum - Allow samples to clot for 2 hours at room temperature or overnight at 4°Cbefore centrifugation for 20 minutes at approximately 1000×g. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Blood collection tubes should be disposable, non-pyrogenic, and non-endotoxin.  Plasma - Collect plasma using EDTA-Na2 or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 15 minutes at 1000×g at 2 - 8°C within 30 minutes of collection. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Avoid hemolysis, high cholesterol samples.  Tissue homogenates– For general information, hemolysis blood may affect the result, so you should rinse the tissues with ice-cold PBS (0.01M, pH=7.4) to remove excess blood thoroughly. Tissue pieces should be weighed and then minced to small pieces which will be homogenized in PBS (the volume depends on the weight of the tissue. 9mL PBS would be appropriate to 1 gram tissue pieces. Some protease inhibitor is recommended to add into the PBS.) with a glass homogenizer on ice. To further break the cells, you can sonicate the suspension with an ultrasonic cell disrupter or subject it to freeze-thaw cycles. The homogenates are then centrifugated for 5minutes at 5000×g to get the supernate.  Cell culture supernate – Centrifuge supernate for 20 minutes to remove insoluble impurity and cell debris at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the clear supernate and carry out the assay immediately.  Other biological fluids –Centrifuge samples for 20 minutes at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. (You can refer to our website for detailed processing Sample preparation – Samples should be clear and transparent and be centrifuged to remove suspended solids. Note: Serum and plasma to be used within 7 days when stored at 2-8°C, otherwise samples must be divided and stored at -20°C (≤1 month) or -80°C (≤6 months) to avoid loss of bioactivity and contamination. Avoid freeze-thaw cycles. When performing the assay slowly bring samples to room temperature. If the sample concentration is higher than the maximum standard value, please dilute it with appropriate factor according to the actual situation. (A pre-test is recommended to determine the dilute factor).   Human AAP (Alanine Aminopeptidase) ELISA Kit Other supplies required  Microplate reader with 450nm wavelength filter High-precision transferpettor, EP tubes and disposable pipette tips 37°C Incubator, Deionized or distilled water Absorbent paper Reagent preparation Bring all reagents to room temperature before use. Wash Buffer - Dilute 30mL of Concentrated Wash Buffer into 750 mL of Wash Buffer with deionized or distilled water. Put unused solution back at 4°C. If crystals have formed in the concentrate, you can warm it with 40°Cwater bath (Heating temperature should not exceed 50°C) and mix it gently until the crystals have completely dissolved. The solution should be cooled to room temperature before use. Standard- Centrifuge at 10,000×g for 1 minute, and reconstitute the Standard with 1.0mL of Reference Standard &Sample Diluent. Tighten the lid, let it stand for 10 minutes and turn it upside down for several times. After it dissolves fully, mix it thoroughly with a pipette. This reconstitution produces a stock solution of 100ng/mL. Then make serial dilutions as needed (Making serial dilution in the wells directly is not permitted). The recommended concentrations are as follows:100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.563、0ng/mL . As if you want to make standard solution at the concentration of 50ng/mL, you can take 0.5mL the standard at 100ng/mL, add it to an EP tube with 0.5mL Reference Standard &Sample Diluent, and mix it. The procedures of making the remaining concentrations are all the same. The undiluted standard serves as the highest standard (100ng/mL). The Reference Standard &Sample Diluent serves as the zero (0ng/mL). (500μL/tube，for example. Can also be diluted according to the actual amount，such as 200μL/tube) 

Human AFGF/FGF1 (Acidic Fibroblast Growth Factor 1) ELISA KitNote: *: [96T/48T] #: It’s OK to keep the kit in 4℃, if the kit is scheduled to be used up in one week. Please keep the reagent in -20℃ for long-term storage or repeated use. The reagent in each vial is slightly more that its volume written on label, please take out the required volume by certain tools (such as transferpettor, measuring cylinder), rather than pouring directly. Test principle Human AFGF/FGF1 (Acidic Fibroblast Growth Factor 1) ELISA KitThis ELISA kit uses Sandwich-ELISA as the method. The micro ELISA plate provided in this kit has been pre-coated with an antibody specific to Human AFGF/FGF1. Standards or samples are then added to the appropriate micro ELISA plate wells and combined to the specific antibody. Then a biotinylated detection antibody specific for Human AFGF/FGF1 and Avidin-Horseradish Peroxidase (HRP) conjugate is added to each micro plate well and incubated. Free components are washed away. The substrate solution is added to each well. Only those wells that contain Human AFGF/FGF1, biotinylated detection antibody and Avidin-HRP conjugate will appear blue in color. Human AFGF/FGF1 (Acidic Fibroblast Growth Factor 1) ELISA KitThe enzyme-substrate reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color turn yellow. The optical density (OD) is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm ± 2  nm. The OD value is proportional to the concentration of Human AFGF/FGF1. You can calculate the concentration of AFGF/FGF1 in the samples by comparing the OD of the samples to the standard curve. Sample collection and storage Serum - Allow samples to clot for 2 hours at room temperature or overnight at 4°Cbefore centrifugation for 20 minutes at approximately 1000×g. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Blood collection tubes should be disposable, non-pyrogenic, and non-endotoxin. Plasma - Collect plasma using EDTA-Na2 or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 15 minutes at 1000×g at 2 - 8°C within 30 minutes of collection. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. Avoid hemolysis, high cholesterol samples. Tissue homogenates– For general information, hemolysis blood may affect the result, so you should rinse the tissues with ice-cold PBS (0.01M, pH=7.4) to remove excess blood thoroughly. Tissue pieces should be weighed and then minced to small pieces which will be homogenized in PBS (the volume depends on the weight of the tissue. 9mL PBS would be appropriate to 1 gram tissue pieces. Some protease inhibitor is recommended to add into the PBS.) with a glass homogenizer on ice. To further break the cells, you can sonicate the suspension with an ultrasonic cell disrupter or subject it to freeze-thaw cycles. The homogenates are then centrifugated for 5minutes at 5000×g to get the supernate. Cell culture supernate – Centrifuge supernate for 20 minutes to remove insoluble impurity and cell debris at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the clear supernate and carry out the assay immediately. Other biological fluids –Centrifuge samples for 20 minutes at 1000×g at 2 - 8°C. Collect the supernatant and carry out the assay immediately. (You can refer to our website for detailed processing Sample preparation – Samples should be clear and transparent and be centrifuged to remove suspended solids. Note: Serum and plasma to be used within 7 days when stored at 2-8°C, otherwise samples must be divided and stored at -20°C (≤1 month) or -80°C (≤6 months) to avoid loss of bioactivity and contamination. Avoid freeze-thaw cycles. When performing the assay slowly bring samples to room temperature. If the sample concentration is higher than the maximum standard value, please dilute it with appropriate factor according to the actual situation. (A pre-test is recommended to determine the dilute factor). Other supplies required Microplate reader with 450nm wavelength filter High-precision transferpettor, EP tubes and disposable pipette tips 37°C Incubator, Deionized or distilled water Absorbent paper  Human AFGF/FGF1 (Acidic Fibroblast Growth Factor 1) ELISA KitReagent preparation Bring all reagents to room temperature before use. Wash Buffer - Dilute 30mL of Concentrated Wash Buffer into 750 mL of Wash Buffer with deionized or distilled water. Put unused solution back at 4°C. If crystals have formed in the concentrate, you can warm it with 40°Cwater bath (Heating temperature should not exceed 50°C) and mix it gently until the crystals have completely dissolved. The solution should be cooled to room temperature before use. Standard- Centrifuge at 10,000×g for 1 minute, and reconstitute the Standard with 1.0mL of Reference Standard &Sample Diluent. Tighten the lid, let it stand for 10 minutes and turn it upside down for several times. After it dissolves fully, mix it thoroughly with a pipette. This reconstitution produces a stock solution of 2000pg/mL. Then make serial dilutions as needed (Making serial dilution in the wells directly is not permitted). The recommended concentrations are as follows:2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL . As if you want to make standard solution at the concentration of 1000pg/mL, you can take 0.5mL the standard at 2000pg/mL, add it to an EP tube with 0.5mL Reference Standard &Sample Diluent, and mix it. The procedures of making the remaining concentrations are all the same. The undiluted standard serves as the highest standard (2000pg/mL). The Reference Standard &Sample Diluent serves as the zero (0pg/mL). (500μL/tube，for example. Can also be diluted according to the actual amount，such as 200μL/tube) 

Human IL-5  ELISA Kit本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-5抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-5与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-5抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-5抗体与结合在包被抗体上的人IL-5结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，人IL-5浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中人IL-5的浓度。Human IL-5  ELISA Kit英文名称    Human IL-5 (Interleukin 5) ELISA Kit    中文名称    人白介素5(IL-5)酶联免疫吸附测定试剂盒    货号    XY-H0191c    种属    Human/人    规格    96T/Kit (8*12 strips) 48T/Kit (8*6 strips)    检测方法    双抗体夹心法    检测范围    15.625~1000pg/mL    灵敏度    9.375pg/mL    

Human CD42 ELISA Kit检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人CD42抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人CD42会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人CD42抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人CD42抗体与结合在包被抗体上的人CD42结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，CD42浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中CD42的浓度。 Human CD42 ELISA Kit样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可参考：6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  Human CD42 ELISA Kit试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为200ng/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0ng/mL。如配制100ng/mL标准品：取0.5mL200ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）  Human CD42 ELISA Kit 1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  200 100 50 25 12.5 6.25 3.125 0 ng/mL  洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  Human CD42 ELISA Kit注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！ 结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  Human CD42 ELISA Kit灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 1.875ng/mL。 ●检测范围：3.125–200ng/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 CD42，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算

Human IL-12 p40 ELISA Kit检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗人IL-12 p40抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的人IL-12 p40会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人IL-12 p40抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗人IL-12 p40抗体与结合在包被抗体上的人IL-12 p40结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，IL-12 p40浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中IL-12 p40的浓度。 Human IL-12 p40 ELISA Kit样品收集: 1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。 3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。 4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测 具体处理方法可参考： 6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。 8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先做预实验，以确定稀释倍数）。  Human IL-12 p40 ELISA Kit试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水 4. 吸水纸  检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用。 3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为2000pg/mL）。然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/mL，标准品&样品稀释液直接作为空白孔0pg/mL。如配制1000pg/mL标准品：取0.5mL2000pg/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。  4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作浓度。当日使用。 5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。当日使用。 标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）   1 2 3 4 5 6 7 8 Tube  2000 1000 500 250 125 62.5 31.25 0 pg/mL  Human IL-12 p40 ELISA Kit洗涤方法: 1. 自动洗板机：每孔加入洗涤液350μL，注入与吸出间隔60秒。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350μL，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在厚的吸水纸上拍干。  操作步骤: 实验开始前，各试剂均应平衡至室温；试剂或样品配制时，均需充分混匀，并尽量避免起泡。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加标准品&样品稀释液 100μL，余孔分别加标准品或待测样品 100μL，注意不要有气泡，加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜，37℃孵育 90 分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每个孔中加入生物素化抗体工作液 100μL（在使用前 15 分钟内配制），酶标板加上覆膜，37℃温育 1 小时。 3. 弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，大约 350μL/每孔，甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。 4. 每孔加酶结合物工作液（临用前 15 分钟内配制）100μL，加上覆膜，37℃温育 30 分钟。 5. 弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，方法同步骤 3。 6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL，酶标板加上覆膜 37℃避光孵育 15 分钟左右（根据实际显色情况酌情缩短或延长，但不可超过 30 分钟。当标准孔出现明显梯度时，即可终止）。 7. 每孔加终止液 50μL，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。 8. 立即用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度（OD 值）。应提前打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。 9. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存。  注意事项： 1. 保存：试剂盒中各试剂请按说明书提示合理存放。在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染，否则可能会出现错误的结果。 2. 酶标板：刚开启的酶标板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。暂时不用的板条应拆卸后放入备用铝箔袋，按推荐温度存放！ 3. 加样：加样或加试剂时，第一个孔与最后一个孔的加样时间间隔如果太大，将会导致不同的“预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。每次的加样时间最好控制在10分钟内。推荐设置复孔。 4. 温育：为防止样品蒸发，实验时必须给酶标板覆膜；洗板后应尽快进行下步操作，避免酶标板处于干燥状态；严格遵守给定的温育时间和温度。 5. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在吸水纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水。在读数前要注意清除底部残留的液体和手指印，以免影响酶标仪读数。 6. 试剂配制：Concentrated Biotinylated Detection Ab及Concentrated HRP Conjugate体积较小，运输过程会使液体沾到管壁或瓶盖，因此使用前1000转/分离心1min，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液请根据所需用量配制，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取Concentrated Biotinylated Detection Ab时，一次不要小于10μL），以避免由于不准确稀释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液。若需要分次使用标准品应按照每一次用量分装，将其放在-20～-80℃贮存。避免反复冻融。 7. 显色时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如每隔5分钟），如梯度已很明显，请提前加入终止液终止反应，避免颜色过深影响酶标仪读数。 8. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。 9. 混匀：充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。 10. 安全：试验中请穿着实验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液样品时，请按国家生物试验室安全防护条例执行。 11. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外） 12. 试验中所用的EP管和吸头均为一次性使用，严禁混用，否则将影响试验结果！  Human IL-12 p40 ELISA Kit结果判断: 1. 每个标准品的OD值减去空白孔的OD值后作图，如设置复孔，则应取其平均值计算。以标准品的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。 2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 3. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。  灵敏度、检测范围、特异性和重复性: ●灵敏度：最小可测 18.75pg/mL。 ●检测范围：31.25–2000pg/mL。 ● 特异性：可检测重组或天然的人 IL-12 p40，且与其它相关蛋白无交叉反应。 ● 重复性：板内，板间变异系数均1. 在各孔中加入标准品或样品各 100μL， 37℃孵育 90 分钟 2. 倒去孔内液体，加入 100μL 生物素化抗体工作液，37℃孵育 60 分钟 3. 洗涤 3 次 4. 加入 100μL 酶结合物工作液， 37℃孵育 30 分钟 5. 洗涤 5 次 6. 加入 90μL 底物溶液， 37℃孵育 15 分钟左右 7. 加入 50μL 终止液，立即在 450nm 波长处测量 OD 值 8. 结果计算