新冠疫情下环境微生物的监控

新冠疫情下，许多人对环境中的病毒以及传播方式忐忑不安，尤其是报道了空气气溶胶对新冠病毒传播的影响，并且也对环境和空间消毒后的效果心存疑虑。目前，关于开展空气微生物气溶胶采样研究较多，根据不同原理制造的采样器广泛用于各领域。如：单级或多级撞击式采样器、离心式采样器、气旋式采样器、液体冲击式采样器、过滤式采样器等，在这些类型采样器中，以安德森空气微生物采样器采样效率及高，所采粒子数较多。在分级采集不同粒度气溶胶的时候，经常采用安德森采样器。早在2010年，中国医学科学院病原学研究所就进行过用安德森空气生物采样器采集病毒气溶胶的研究。

当然，一般情况下，我们要直接对空气中的病毒进行采样和检测还相对比较困难，但是，我们通过对空气中常规微生物进行采样和检测，可以反应出整体环境的洁净度，从而评估我们环境的整体受污染程度和消毒效果。

1.空气沉降菌：

通过自然沉降原理收集在空气中的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。沉降菌的采样属于被动式采样，反映最终落在地面或物体表面的灰尘中携带的微生物。

检测标准：GB/T 18204.3-2013公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物

                GB/T 16294-2010 医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法

检测方法：常用的检验方法是沉降平板法，即测定在一定时间内从空气中降落到单位面积地面上的微生物个数。

操作步骤：将融化的营养琼脂培养基或大豆酪蛋白琼脂培养基（霉菌监测用沙氏培养基）倒入90mm无菌培养皿中制成平板（或购买商品化沉降皿），按标准要求布设在监测点上（监测点按标准选择和布局），打开皿盖暴露在监测环境中5～30min（动态监测不大于4小时），让空气中的微生物降落在平板表面，盖好皿盖，然后倒置放入培养箱中，培养48h后计菌落数（SDA培养5天）。

环凯牌三层无菌包装沉降皿

2.空气浮游菌

用计数浓度法，即通过收集悬游在空气中的生物性粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。浮游菌的采样属主动采样，反映洁净区内空气中生物粒子的浓度。

检测标准：《GB/T16293-2010医药工业洁净室（区）浮游菌的测试方法》

检测方法：常用撞击式浮游微生物采样器，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，从而将悬浮在空气中的微生物（浮游菌）采集到专门的平板培养基上，经实验室培养后得到进行菌落计数。

2.1单级浮游微生物采样器

基于安德森撞击原理（撞击法），采集口风速与洁净室内风速基本一致的等速采样理论设计，直接采样，空气浮游微生物高速通过微孔被撞击在培养皿内的琼脂表面，撞击速度20m/s，相当于安德森撞击6级，保证大于1微米的颗粒全被捕获收集。

采样步骤：将浮游微生物采样器放置在监测点上，卸下多孔采样头和保护盖，用75%酒精对多孔采样头和保护盖、培养皿座及外表进行擦拭消毒，然后将预先制作好装有TSA或SDA培养基的培养皿（或购买商品化平板）放置于培养皿座上，并将培养皿调整至水平，装好多孔采样头，设定采样参数，开机进行采样。采样结束后，打开多孔采样头，取出培养皿，盖回原培养皿盖，贴上标签或写上编号，置于已到达设定温度的恒温培养箱内，进行倒置培养。

环凯牌浮游微生物采样器

2.2 六级浮游微生物采样器

整套仪器由六级采样撞击器 、采样控制主机 、六级采样撞击器专用三角架组成。六级采样撞击器是由六个带有经硬质氧化的铝质多孔撞击采样圆盘组成的 ，多孔撞击采样圆盘上可放置已有采样介质的无菌平皿 ，所有多孔撞击采样圆盘由三个弹簧挂钩把多孔撞击采样圆盘紧密地连接在一起。同级多孔撞击采样圆盘上环形排列着400个孔径相同的微孔 ，不同级撞击采样圆盘的孔径不同 。当含有微生物粒子的空气进入采样口后 ，采样主机气体采样流量恒定 ，而气体通过每一级采样圆盘不同孔径的筛孔时 ， 不同大小的微生物粒子按空气动力学特性分别以不同的速度撞击在相应的采样介质表面上。一级-二级类似人体上呼吸道捕获的粒子 ，第三级－第六级类似下呼吸道捕获的粒子 ，这就在相当程度上模拟了这些粒子在呼吸道的穿透作用和沉着部位。

采样步骤：

1) 将六级采样撞击器用75％酒精进行擦拭灭菌（或置于高压蒸汽灭菌器121℃灭菌30分钟），并妥善保管撞击器备用。

2) 将撞击器三角架支开并锁紧，把三角架顶部调至水平，撞击器放在三角架的云台上，主机放在桌上或地上，用橡胶管连接撞击器出气口→主机进气口。

3) 顺序在撞击器中放入采样平皿，一手打开平皿盖，另一手迅速盖上采样头（撞击盘），然后按住撞击器上部，挂上三个弹簧挂钩。放入和取出采样平皿时，必须戴口罩，以防口鼻排出微生物污染平皿。

4) 打开电源开关，设定相关参数，将撞击器置于监测点，打开撞击器进气口上盖，离开采样点2米之外，即可启动采样。

5) 采样完成后，松开拉钩弹簧，逐层打开多孔采样头（撞击盘），取出培养皿，盖回原培养皿盖，贴上标签或写上编号，置于已到达设定温度的恒温培养箱内，进行倒置培养。