最新进展︱FcγRIIIa亲和色谱技术在曲妥珠单抗免疫学特性分析中的应用

近日，国际生物药权威期刊BioDrugs刊登了一篇复宏汉霖关于曲妥珠单抗HLX02相似性研究与评估的文章“Demonstrating Analytical Similarity of Trastuzumab Biosimilar HLX02 to Herceptin® with a Panel of Sensitive and Orthogonal Methods Including a Novel FcγRIIIa Affinity Chromatography Technology"。该研究将HLX02与两种来源的原研曲妥珠单抗（赫赛汀^®）在各项物化性质、生物学活性以及免疫学特性方面进行了质量属性比对。

该研究首次将东曹公司的TSKgel FcR-IIIA-NPR亲和色谱柱创新性地应用于曲妥珠单抗免疫学特性方面的相似性分析。此款色谱柱能够根据抗体与FcγRⅢa受体的亲和力来分离抗体。研究结果也表明，与传统的表面等离子体共振(SPR) 方法相比，TSKgel FcR-IIIA-NPR对曲妥珠单抗的FcγRⅢa亲和力变化表现出更高的敏感性，证明了这项新技术在生物相似性评估中的强大作用。

FcR色谱柱的分离原理

通过近几年的研究发现，抗体Fc区的N-糖链结构会影响抗体与Fc受体之间的亲和力，与Fc受体亲和力强的抗体，其细胞杀伤力即ADCC活性也越高，能增强抗癌药物的活性。根据这一机制原理，东曹公司将Fc受体之一的重组FcγRⅢA作为配基，键合到非多孔亲水性聚合物基质的填料上，并充填至PEEK色谱柱内，开发出了TSKgel FcR-ⅢA-NPR色谱柱，它给分析抗体糖链结构、测定ADCC活性提供了一种全新的方法。

FcR色谱柱的应用实例

下图是使用TSKgel FcR-ⅢA-NPR色谱柱对利妥昔单抗类似药和原研药进行比对分析的色谱图。洗脱峰面积比例的不同显示出了生物类似药和原研药在糖链结构和活性上存在差异。

此外，TSKgel FcR-ⅢA-NPR色谱柱也可用于抗体药物质量控制中批次差的检验。将两个批次的治疗性抗体药物A注入色谱柱中进行分析后，通过比对峰面积百分比的差异可以更加快速简便地发现药物质量的批间差。

几种抗体生物活性分析方法的比较

目前为止，传统的抗体活性检测方法主要有细胞ELISA法或SPR等手段，不仅需要昂贵的设备及繁琐的操作，且实验成本高耗时较长。使用TSKgel FcR-ⅢA-NPR色谱柱能非常简便地获得重复性良好的分析结果，且分析成本更低。下表中，我们列举了几种常用的ADCC活性和糖链分析方法的比较。

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