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不同溶剂类型与溶剂强度对分离的影响
色谱分离中，影响选择性和分离的因素有很多，其中流动相中的有机溶剂类型以及不同的溶剂强度就是影响因素之一。对于反相色谱模式，常用的有机溶剂有甲醇、乙腈、四氢呋喃等，我们可以通过改变流动相中有机相种类或调整其比例，来改变选择性和分离度，以呈现出不同的分离效果。
应用实例
4-（氯甲基）苯甲酸&3-（氯甲基）苯甲酸的分离
结构如图所示：
两种物质为间位与对位异构体，在乙腈体系下无法实现完全分离。改变有机相种类后，可实现较好分离。
色谱条件1
色谱柱：Ultimate® XS-C18 4.6*250mm，5μm
流动相：0.1%磷酸水和乙腈，梯度洗脱
分析：两目标峰有分离趋势，但分离不完全，将梯度调整成等度条件。
色谱条件2
色谱柱：Ultimate® XS-C18 4.6*250mm，5μm
流动相：0.1%磷酸水/乙腈=70/30
分析：分离有改善，但还是无法分离完全，且依靠调整溶剂强度已无法改善其分离。
色谱条件3
在该色谱柱柱上进行方法优化，用甲醇替换乙腈，再次进行测试
色谱柱：Ultimate® XS-C18 4.6*250mm，5μm
流动相：0.1%磷酸水/甲醇=60/40
结果：两目标物峰型良好，且可实现完全分离。
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