“单枪匹马”伏癌菌，免疫亲和柱新上市

   01、概述

 02、原理

‍‍净化的基础是抗原抗体反应，伏马毒素单克隆抗体连接在柱内凝胶介质上，样品中的伏马毒素经过提取、过滤、稀释，然后将样品提取液缓慢通过伏马毒素免疫亲和柱，在免疫亲和柱内，伏马毒素与抗体结合，洗涤液通过免疫亲和柱除去未被结合的杂质。最后采用甲醇-乙酸洗脱伏马毒素，然后进行相关分析。‍‍

‍‍03、净‍‍化步骤

1）准确称取20g（精确至0.01g）粉碎的样品；

2）先加入50mL样品提取液混合，摇床振荡提取30min，于4000r/min，离心5min，取出上清液于试剂瓶中；

3）将底部沉淀部分再加入50mL样品提取液混合，以摇床振荡提取30min，于4000r/min，离心5min，取出上清液，与前面的上清液合并混匀；

4）准确移取10mL上清液，加入40mL 1.5%吐温20-PBS稀释，用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。

5）准确移取15mL混匀滤液（相当于0.6g样品）过亲和柱。

6）3mL柱管上方堵头直接连接20mL针筒固定后使用（柱管内偶见有小气泡属正常现象，不影响亲和柱的使用）；

7）准确移取上述混匀滤液，注入注射器中，调节针筒压力使其以2秒/滴的速度缓慢通过免疫亲和柱；

8）先用10mL PBS冲洗柱子，再用3mL水冲洗柱子，弃去流出液，流速1秒/滴，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体；

9）准确加入3.0mL洗脱液洗脱，流速自然重力，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。收集全部洗脱液，进行相关测定。

（注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥！）

04、色谱条件

05、谱图展示

06、结果展示

【 产品信息 】