中国药典、美国药典对色谱条件的可调范围规定

月旭

2022/10/24 11:03

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所谓药典方法，顾名思义，药典专论所收载的方法。在参考药典方法进行色谱分析与方法开发过程中，因实验室条件不同导致完全按照药典方法无法进行可靠的分析。我们应了解到：药典方法考虑到各个实验室的差异，有一定的可调范围。

下面我们具体来探讨一下这个问题吧!

中国药典2020规定

0512高效液相色谱法规定如下：

品种正文项下规定的色谱条件（参数）除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适用性试验的要求。

调整流动相组分比例时：

当小比例组分的百分比例X小于33%时，允许改变范围为0.7X〜1.3X；

当X大于33%时，允许改变范围为X—10%〜X+10%。

由上文可知，中国药典专论方法除填充剂种类、流动相组分（比例调整在规定范围内）、检测器类型不得改变外，其他条件改变了，还是认为是药典方法。

但中国药典没有规定方法确认之说，所以，即使是中国药典方法，也是应该按分析方法验证的相关规定进行全套的方法验证。

美国药典规定

USP43<621>CHROMATOGRAPHY规定如下：

为符合系统适用性的要求而调整的操作条件是允许的，除非专论项下另有规定。下述为所列的最大的可调范围，应该按分析方法验证的相关规定进行全套的方法验证。多条件的调整，将对系统性能产生累积影响，实施前需仔细考虑。

流动相缓冲液的pH（HPLC）：±0.2单位以内或规定范围以内调节，适用梯度及等度。

流动相缓冲液盐浓度（HPLC）：±10%（pH允许情况下），适用梯度及等度。

流动相中组分比例（HPLC）：组分比例≤50%的组分可以相对调节±30%，但是任意一组分比例的调节不应超过±10%（相对于总的流动相），含三组分的流动相的调节可以分组分进行，含双组分的流动相的调节可在最小的组分进行。

双组分调节实例：例如流动相50：50，其中一组分50%的30%是15%，但是它超过了占总体比例±10%的规定，所以这个流动相比例的调节范围应以±10%为限，可以在不超过40：60~60：40的范围之间调节。再例如流动相比例为2:98，其中小组分2%的30%是0.6%，这个值不超过占总体比例±10%的规定，此流动相的比例可以在不超过1.4：98.6~2.6：97.4的范围之间调节。

三组分调节实例：流动相60：35：5，它的次组分35%的30%是10.5%，但是它超过了占总体比例±10%的规定，所以这个流动相比例中的次组分的调节范围应以±10%为限。对于最小组分5%的30%是1.5%。可以在不超过50：45：5~70：25：5或58.5：35：6.5~61.5：35：3.5的范围之间调节。

紫外检测器的波长（HPLC）：专论中规定的检测波长不允许改变，检测器供应商的程序或另一个验证程序来说明，波长检测误差，最多不得超过±3nm。

固定相：

色谱柱长度（GC）：可以在±70%范围内调节。

色谱柱长度（HPLC）：见粒径项下。

色谱柱内径（HPLC）：如果线速度保持恒定，可以调整。见HPLC流速。

色谱柱内径（GC）：最大可调整至±50%。

膜厚（毛细管柱GC）：最大可在−50%至100%调整。

粒径(HPLC)：等度洗脱：粒径和柱长均可以修改，但柱长（L）与粒径（dp）的比值（L/dp）恒定或在规定柱长与粒径的比值的-25%~+50%范围内。或者（对于将粒度调节应用于表面多孔颗粒时），其它柱长（L）和粒度（dp）的柱子可以使用，但理论塔板数（N）应在规定柱的-25%~+50%范围内。如果调节导致更高的理论塔板数时应注意，这样将产生更小的峰体积，应通过缩小额外柱外峰拓宽的因素调整，例如仪器的管路、检测池的体积、采样速率和进样体积。当专论中未规定粒度时，该比值应采用规定柱的最大粒度计算。

粒径(GC)：如果色谱图的符合系统适用性要求以及粒径范围比相同，粒度大小可以从大变小或从小变大，粒径范围比的定义是最大粒度直径除以最小粒度直径。

流速（GC）：流速可以最大在±50%调整。

流速(HPLC)：当粒度改变时，流速也许需要调整，因为为达到相同的性能，小粒度的柱子需要更高的线速度（测量通过较少塔板高度），流速、柱内径、粒度通过下面公式换算。

F2=F1×[（dc2²×dp1）/（dc1²×dp2）]

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