极性较大的化合物在分析测试过程中,通常在常规非极性柱上保留很弱,即便有机相比例降到很低,也很难实现保留增强,易受空白溶剂或空白辅料的干扰,于是排除干扰就成了方法设定中很重要的一个环节。
应用实例
氨基丁酰胺的极性大,紫外吸收弱,在常规C18柱上几乎无保留,辅料空白对其测定有干扰。
结构如图所示:
原条件
色谱柱:Ultimate® AQ-C18(4.6×250mm,5μm)。
流动相:磷酸盐缓冲液:乙腈=95:5;
分析
目标峰极性大,在C18柱上无保留,在3分钟左右出峰,与辅料空白重合,无法分离。
蓝色—辅料峰 黑色—目标物
方法开发思路
要使目标物质与辅料分离,必须增强目标化合物的保留能力。该物质结构上有两个氨基,可考虑流动相中加离子对试剂的模式测定,结合其检测波长(205nm),可选择在流动相体系中加入十二烷基硫酸钠进行测定,通过方法调整优化,可排除空白辅料对杂质的干扰。
调整后的色谱条件
色谱柱:Ultimate® XB-C18(4.6×250mm,5μm)。
流动相:0.01mol/L磷酸二氢钾+0.5g/L十二烷基硫酸钠(pH2.5)/乙腈=70/30。
分析
与预期一致,目标化合物的保留在该体系下增强明显,不受辅料空白影响,可实现较好的保留与分离。
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