如何建立稳健的杂质控制分析方法

稳健的分析方法意味着其可以忽略工作和环境条件改变对方法的影响。稳健性好的杂质分析方法可以在不同实验室间顺利转移，分析结果可以不受操作中的微小变化的影响，且对技术、设备等条件的变化有缓解作用。对于HPLC分析方法，影响方法转移的最关键因素为色谱柱和色谱仪。

反相高效液相色谱法（RP-HPLC）广泛应用于药品质量的控制，包括鉴别、含量测定、有关物质检查等。反相色谱法主要采用C18柱，各国药典包括《中国药典》、《美国药典》（USP）、《欧洲药典》（EP）等在液相方法的描述中，通常仅给出色谱柱的简单信息，如《中国药典》中的“用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂”，USP中的“L1填料（octadecylsilanebonded silica gel）”，EP中有时还给出色谱柱孔径（pore size），颗粒大小（particle size），比表面积（specific surface area）等信息，但均未对C18色谱柱的具体品牌，型号等进行规定和推荐。目前药典中给出的色谱柱信息对选择合适的色谱柱分析样品没有太多帮助。

市场上有600多种不同品牌的C18色谱柱，且不断有新品牌的色谱柱出现。采用不同品牌，不同型号的色谱柱分析具体样品时，由于色谱柱选择性的差异，溶质的保留值，色谱峰之间的分离度甚至色谱峰顺序都可能出现较大的差异。另外，在重复某一HPLC方法时，当无法获得方法中所用色谱柱时，需要寻求选择性相似的色谱柱代替。因此采用适宜的方法表征色谱柱的特性是建立稳健的药品标准杂质控制分析方法和应用该分析方法的关键。

月旭Ultimate^® 系列液相色谱柱对某药物的系统适用性溶液分析谱图

依据药物降解反应机理制备混合杂质对照品用于系统适用性试验，可以有效评价色谱体系对各杂质的分离效能，且利用混合对照品中各杂质的色谱保留信息和UV光谱信息，可准确定位样品中的主要杂质。利用混合杂质对照品得到的系统适用性试验色谱图，可以方便地确定不同实验室得到的色谱图是否具有可比性，并能同时确认方法的精密度、定量限（LOQ）和／或检测限（LOD）。

月旭Xtimate^® 系列液相色谱柱对某药物的有关物质分析谱图

药物杂质HPLC分析方法常采用梯度洗脱系统。对于不同品牌的HPLC仪器，因实现梯度洗脱的装置或原理不同，比例阀与色谱柱进口间的体积不同，会引起梯度滞后的时间不同，造成仪器间梯度行为有差异。采用动态法表示梯度程序［即以与系统滞后时间（t_D）的差异建立梯度表］，可以有效消除管路及仪器装置差异对梯度的影响，使梯度方法有良好的分离重现性。