反相高效液相色谱(RP-HPLC)是液相色谱中最常用的模式,广泛应用于化工制药生物工程等领域。RP-HPLC中溶剂系统的选择和优化一直是液相色谱领域的热门研究课题,对于多组分目标物的分析与分离,有效选择并优化色谱溶剂系统仍存在很多问题,本研究考察了溶剂系统的强度,极性等参数对RP-HPLC分离性能的影响。
示例 色谱柱:UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm,5μm; 柱温:25℃; 检测器:UV225nm; 流速:1.0mL/min; 进样量:10μL。 流动相A :0.1%磷酸 B:ACN,A:B=3:7, 色谱柱:Xtimate® 4.6mm×150mm,5μm。
流动相A :0.1%磷酸 B:ACN,A:B=3:7,
色谱柱 :UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm,5μm。
由图谱判断8.6min峰内夹杂小峰未分开,UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm,5μm更适合分离。
考虑不同溶剂洗脱强度不同,有机相中加入甲醇,流动相A :0.1%磷酸 B:ACN:甲醇=8:2,A:B=3:7。
由图谱判断8.6min峰内夹杂小峰未分开,UItimate® ODS-3 4.6mm×150mm,5μm更适合分离。
考虑不同溶剂洗脱强度不同,有机相中加入甲醇,流动相A :0.1%磷酸 B:ACN:甲醇=8:2,A:B=3:7。
调整有机溶剂比例后可以得出10.7min和11.9min分离度增加到3.0。
优化方法,流动相A :0.1%磷酸 B:ACN:甲醇=7:3,A:B=4:6。
从图谱中可以看出将峰分开,分离度增大,适当的调整有机相种类及比例可以提高分离性能。
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