反相离子对色谱法建立的注意事项（四）

大家看过之前的文章后，对反相离子对色谱法已经有很清晰的认识了，今天小编为大家分享一个实际案例：

色谱柱：Ultimate^® LP-C18（4.6×250mm，5μm）。

流动相：0.1%七氟丁酸溶液/乙腈；

检测波长：210nm；

柱温：30℃；

流速：1mL/min；

进样量：10μL。

讨论：

甲酰肼与4-氨基三氮唑合并，3-氨基三氮唑峰前有倒峰干扰，三氮唑峰型不好，甲酰胺与二甲酰肼分离度未基线分离，增加离子对试剂浓度。

流动相：0.3%七氟丁酸溶液/乙腈

讨论：

增加离子对试剂浓度分离效果和基线都得到很好的改善，但约9分钟处有倒峰，甲酰胺与二甲酰肼分离度未基线分离，增加离子对试剂中碳原子的数量。

流动相：10mmol/L KH₂PO₄(含1g/L辛烷磺酸钠，pH1.6)/乙腈=85/15 

讨论：

改用辛烷磺酸钠以后无改善，改变离子对试剂种类。

流动相：10mmol/L KH₂PO₄(含2g/L己烷磺酸钠，pH1.5)/乙腈=90/10

讨论：

di一，二个峰分离良好，其他物质需要改善，调整有机相的比例。

流动相：10mmol/L KH₂PO₄(含2g/L己烷磺酸钠，pH1.5)/乙腈=95/5

测试结果：

保留及分离情况均良好，分离完全，三氮唑峰形能满足峰面积定量要求。

讨论：

在分离甲酰胺等6个物质时，这几个均为极性较大，反相色谱上保留弱，要达到六个成分的分离，首先需增加其保留，再根据情况，调整离子对试剂的量，pH值，有机相种类与浓度以达到分离，在实验中选择了耐受强酸条件的Ultimate^® LP-C8（pH耐受范围0.5-8）柱，通过调整离子对试剂的种类，浓度，有机相的比例，使得各物质得到良好的分离，满足日常检测需求。