What？又是方法重现性！（下篇）

当溶剂与流动相起始有机相比例有差异时，在不同仪器上会呈现出不同的检测效果。

图中为同一个项目在两台不同仪器上的检测效果。该项目的溶剂为50%乙腈，流动相起始比例为25%乙腈。图1为在柱前管路内径较大的仪器上的效果图，图2为内径管理较细的仪器上的效果图。较大的管路内径使样品在进柱子前得到充分的混合，消除了溶剂效应，呈现比较好的峰型。这种有溶剂效应的项目，可以通过使用较粗的管线的仪器，或降低进样量的方法来解决，当然，更加保险的方法就是把样品溶剂更换后与初始流动相极性更为接近的溶剂。

进样量过大，进样阀-色谱柱-检测器之间、检测池、接头体积大，都会引起柱外效应，导致峰型异常。因此，这类样品，在方法中需对仪器的要求更加详细。

缓冲液选择不正确，如缓冲盐浓度太低、超出有效的缓冲pH值范围，都可能导致重现性不好的情况。有些对pH值特别敏感的样品，流动相的pH值的细微变化都会导致无法重现。这类样品，在缓冲液选型时应特别注意缓冲的的缓冲范围和浓度，以保证流动相体系能给样品检测提供一个稳定的pH值。

有些样品对有机相的变化特别敏感，这类样品，建议流动相选择在线混合。

很多样品都会因柱温变化而产生不同的选择性。因此，如果不用柱温进行控制，会导致样品因柱温的变化而产生重现性问题。建议在方法开发时，对柱温进行±10℃温度 的耐用性进行验证，如对柱温变化敏感的，应把检测柱温列入方法。

此外，还有柱平衡慢，柱超载、仪器故障等问题也会造成方法无法重现。