Tandex LH-20是在葡聚糖凝胶Tandex G-25的基础上经羟丙基化处理后得到的产物,不仅可在水中应用,也可在极性有机溶剂或他们与水组成的混合溶剂中膨润使用,适合中药有效成分的分离纯化以及抗生素和化学药物的精细纯化。
一、原理
Tandex LH-20的分离原理主要有两方面:以凝胶过滤作用为主,兼具反相分配的作用(在反相溶剂中)。因为凝胶过滤作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗脱下来,小分子的化合物保留强,zui后出柱。如果使用反相溶剂洗脱,Tandex LH-20对化合物还起反相分配的作用,所以极性大的化合物保留弱,先被洗脱下来,极性小的化合物保留强,后出柱。如果使用正相溶剂洗脱,这主要靠凝胶过滤作用来分离。 二、溶剂系统 Tandex LH-20常选用单一的溶剂系统,应用最多的是极性强弱不同的如下五种:水、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷。根据溶剂极性的不同,样品分别发生正相或反相分配作用。 除水以外,甲醇是多年来一直使用的极性最强的流动相。当甲醇作为流动相时,Tandex LH-20的保留行为:芳香族化合物>脂环族化合物>脂肪族化合物。甲醇作为流动相的另一个特点是:对不同芳香族化合物可选择性保留,这取决于苯环上存在的官能团及杂原子性质、数目和位置。苯环上存在的官能团及杂原子减弱了苯环本身的性质。苯环上所带的OH-越多,极性越强,在Tandex LH-20上滞留的时间越长。碱性物质比酸性或中性物质在Tandex LH-20上滞留的时间更长。 三、样品的处理和洗脱溶剂的选择 如果样品极性大,选用反相溶剂洗脱(甲醇-水),样品用最少体积的甲醇-水(尽可能甲醇少一些)溶解,过滤后,湿法上样(必须要进行过滤,否则造成Tandex LH-20堵塞后,就必须将葡聚糖凝胶LH-20的柱头部分弃去,造成不必要的浪费)。如果样品极性小,选用正相溶剂洗脱(氯仿-甲醇),样品用最少体积的氯仿-甲醇溶解,过滤后,湿法上样。 四、葡聚糖凝胶LH-20的分离技巧 ● 流速要控制好,流速不可太快,为了快加压,分子筛效果会降低:过慢会导致样品在柱子扩散严重,达不到分离效果。 ● 柱子尽可能长,Tandex LH-20柱长的增加将极大地改善分离,所以不要吝惜填料,宁可将填料全装在一根大柱子中,不要将填料装成几根小柱。 ● 馏分一定要接的细,可1/10,或1/20个保留体积接成一馏分。 ● 洗脱体积一般为2-3个保留体积,对特殊保留强的化合物,可洗脱5个保留体积。 ● 如果黄酮类化合物粗提物中有鞣质,那么你就要小心了,Tandex LH-20对鞣质几乎是死吸附的。如果不考虑填料,可用Tandex LH-20分鞣质。 ● 填料可反复使用,每次用完,可用甲醇将柱子洗干净,然后用下一次分离的起步溶剂将甲醇替换出来。 五、注意事项 1. 上样之前,样品必须经过膜过滤及去除色素,否则杂质及色素会被吸附到填料上,影响填料的正常使用; 2. 在使用过程中,避免使用高浓度的强酸强碱,酸和碱的浓度应低于0.15摩尔。碱会使流速变慢; 3. 不同的样品,吸附和洗脱方法不相同,可以根据相关的文献进行。 六、性能参数
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