Flash柱
对于有机合成和药物化学而言,前期往往需要筛选大量的潜在化合物,一旦发现相关活性化合物之后,就需要将这一具有高附加值的化合物纯化出来,在这个过程中,选择Flash柱进行纯化是很常用的方法。
常规Flash柱填料量从小到4g,大到330g,大大小小有数种,那该如何选择合适规格的Flash柱呢,这主要取决于你的样品上样量。
在分离纯化过程中,上样量是最关注的参数。在制备纯化中上样量通常指在确保纯度和收率的条件下为了提高效率、降低耗材使用成本而得到的最大制备样品量。
上样量的定义
在制备纯化中,上样量可以细化为两类:理论最大上样量和有效最大上样量。
理论最大上样量指的是不考虑任何分离因素的影响,仅仅考虑填料对样品的承受能力。对于不同种类的色谱填料,因为基质不同,键合相不同,分离作用原理不同,造成单位重量的填料对样品的分离能力也有所差异。例如z常见的裸硅胶填料和C18硅胶填料,键合相分别是硅醇基团和C18。通常裸硅胶的理论最大上样量是硅胶量的1/10, C18硅胶填料的理论最大上样量是填料量的1/50。
而在实际使用中,样品的分离度,样品的溶解度都会影响我们上样情况。因此实际上我们在日常中提到的分离度更多指的是有效最大上样量。
分离度和溶解度对上样量的影响主要决定是否要超载进样和超载进样的方式。
首先是分离度,当目标物和杂质分离度很高,可以加大进样量。随着进样量的加大,分离度变小,直到会影响到分离纯化收率和纯度要求。如果分离度不好就降低上样量。因此分离度决定是否要采取超载进样。
其次是溶解度,它决定了超载进样的方式。样品溶解性好,则s选浓度超载。进样体积不变,增加样品浓度,样品峰从对称高斯峰形转变成三角形,峰展宽较小,分离效果好。样品溶解性差,则选择体积超载。增加进样体积,峰高稳定,峰形变宽,成平头峰。但是选择体积超载会存在样品析出风险。
图1 不同进样方式和色谱峰形
如何根据上样量选择Flash柱或者根据已有Flash柱规格选择上样量
各位小伙伴如果无法直接判断上样量或选择柱子规格,可以选择月旭WelFlash中低压制备色谱柱使用说明书中列出的Flash柱规格和样品上样量作为参考。
图2 WelFlash 说明书推荐上样量
月旭科技研发生产高性能的色谱填料,提供高品质HPLC分析柱和制备柱,旨在为您解决各种分离纯化应用难题。本公司的WelFlash中低压制备色谱柱有全多孔球形硅胶、无定型硅胶、氧化铝、聚苯乙烯-二乙烯基苯(PSDVB)等多种基质,键合相种类丰富。采用聚丙烯柱体,坚固耐用,支持多次使用,具有标准的Luer-Lock进液口和出液口,兼容多种快速制备系统。
图3 WelFlash 中低压制备色谱柱
各位小伙伴想了解更多Flash柱的知识,请咨询月旭当地销售人员。
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