在双硫磷的检测中,我们进行了多种不同提取方法实验方案探究。
首先我们按标准方法操作:标准中采用猪肉试样称取5g,加入25ml乙腈-甲醇混合液(4:1,v/v),超声20 min。以6000 rpm离心5min,移取上清液于一分液漏斗中。再分别用3×15 mL甲醇洗涤试样三次,洗液与前述上清液合并于同一分液漏斗中。在上述分液漏斗中加入50 mL硫酸钠水溶液及25 mL三氯甲烷,振荡5min,静置分层后,接下层有机相,再分别用25 mL三氯甲烷提取两次,合并三氯甲烷提取液,在旋转蒸发器上40℃浓缩至干,加入5mL正己烷以溶解残渣,待净化。
SPE柱:月旭Welchrom® Florisil PR,
规格:4g/12mL。
活化:20mL正己烷,弃去;
上样:待净化液全部上样,弃去流出液;
淋洗:10mL正己烷,弃去流出液;
洗脱:20mL 乙酸乙酯-正己烷(3:7),收集流出液于50mL鸡心瓶中;
40℃旋蒸至干,准确加入1mL正己烷溶解残渣,GC-MS检测。
但在实际提取中并未从猪肉提取目标物,无回收。
在改进提取方法中考虑双硫磷为有机磷,所以参考有机磷的提取方法分别作出以下三种改进:
方法Ⅰ(参考GB 23200.93-2016):
猪肉试样称取5g,加入5ml乙腈,加入20ml丙酮,10g无水硫酸钠超声提取20min,6000r/min离心5min,吸取澄清液于浓缩瓶中,残渣中加入20ml丙酮重复提取1遍,合并提取液,于30℃旋蒸至干,加入5ml正己烷待净化。回收率72%。
方法Ⅱ(参考GB/T 2795-2008):
猪肉试样称取5g,加入5ml乙腈饱和正己烷,加入20ml正己烷饱和乙腈,超声提取20min,6000r/min离心5min,吸取澄清液于浓缩瓶中,残渣中加入20ml正己烷饱和乙腈重复提取1遍,合并提取液,于30℃旋蒸至干,加入5ml正己烷,待净化(参考GB/T 23204-2008加入正己烷除油脂),回收率54%。
方法Ⅲ:
猪肉试样称取5g,加入20ml乙酸乙酯-环己烷(1:1)超声提取20min,6000 r/min离心5min,吸取澄清液于浓缩瓶中,残渣中加入20ml乙酸乙酯-环己烷(1:1)重复提取1遍,合并提取液,于30℃旋蒸至干,加入5ml正己烷待净化,回收率15%。
对比以上3个方法发现,方法Ⅰ的加标回收率优于方法Ⅱ、方法Ⅲ,但依然不够理想。据此分析原因发现:
方法Ⅰ中提取液旋蒸温度为30℃,比原方法(GB 23200.93-2016)的40℃低,但浓缩时依然存在较为严重的爆沸,导致回收率偏低。
降低浓缩温度至25℃后,回收率比较理想,得到以下的最终优化方法。
样品提取:
猪肉试样称取5g(j确至0.1g),加入5mL乙腈,加入20mL丙酮,10g无水硫酸钠超声提取20min,6000r/min离心5min,吸取澄清液于浓缩瓶中,残渣中加入20mL丙酮重复提取1遍,合并提取液,于25℃旋蒸至干,加入5mL正己烷带待化。
SPE净化步骤
SPE柱:月旭Welchrom® Florisil PR,规格:4g/12mL。
活化:20mL正己烷,弃去;
上样:待净化液全部上样,弃去流出液;
淋洗:10mL正己烷,弃去流出液;
洗脱:20mL 乙酸乙酯/正己烷,收集流出液于50mL鸡心瓶中;
40℃旋蒸至干,准确加入1mL正己烷溶解残渣,GC-MS检测。
气相条件
质谱条件
色谱图或者加标回收率结果如下:
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