单克隆抗体(简称单抗)广泛用于疾病的诊断、预防和治疗。自1986年shou个单抗药物上市以来,已有近40种单抗药物上市,还有300多种单抗处于临床研究中。单抗药物已成为全球发展zui快的药物领域之一。
在单抗药物的生产过程中,对分离纯化工艺的效率和成本的要求非常高,单抗的分离纯化成本通常可占其生产成本的50-70%。Protein A亲和介质是抗体分离纯化最关键的材料,其性能和成本决定了单抗产品的纯度和收率和成本。
目前,绝大多数的抗体IgG分子纯化使用Protein A亲和层析。Protein A是金黄色葡萄球菌表面的蛋白,分子量42kDa,有5个不同的结构域可以结合IgG的Fc片段,具有很强的特异性亲和力,每个Protein A分子至少可以结合两个抗体IgG分子。
Protein A Tanrose 4FF
Protein A Tanrose 4FF 是用于分离和纯化单克隆抗体、多克隆抗体或 Fc-融合标签的通用性亲和层析介质,ProteinA 有五个IgG结合区域和一些未知功能的区域,重组protein A去除了与白蛋白及细胞表面结合位点,只含有五个 IgG 结合区域,减少了非特异性吸附。
Protein A Tanrose 4FF是以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质,可以在相对较高的流速下进行单克隆抗体和多克隆抗体的纯化,被工业客户普遍接受
缓冲液准备
所用水和缓冲液在使用之前建议用 0.22μm 或 0.45μm 滤膜过滤。
平衡/ 洗杂液: 20mM Na? HPO? , 0.15M NaCl, pH7.0;
洗脱液: 0.1M 甘氨酸,pH3.0;
中和液:1M Tris-HCl,pH8.5。
样品纯化
Protein A Tanrose 4FF 装填好后,可以用各种常规的中低压色谱系统。
将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中,打开下出口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。
用 3-5 倍柱体积的去离子水冲洗出储存缓冲液。
使用至少 5 倍柱床体积的平衡液平衡色谱柱。
利用泵或样品环上样。注:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
用洗杂液冲洗柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少 10-15 个柱体积)。
使用 5-10 倍柱体积的洗脱液洗脱,收集洗脱液,即目的蛋白组分。洗脱组分需要立即调成中性,一般建议使用洗脱组分体积 1/10 的中和液进行中和。
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