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葡萄酒中白藜芦醇苷和白藜芦醇的测定解决方案
2019/01/04 14:51
阅读：356
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方案摘要：
方案详情：
1、适用范围
本方案适用于葡萄酒中顺反式白藜芦醇苷和顺反式白藜芦醇的检测。
2、标准品配制
(1) 标品
① 储备液：
反式白藜芦醇苷1000 μg/mL：溶剂为甲醇；
反式白藜芦醇1000 μg/mL：溶剂为甲醇。
② 混合标准溶液制备：
顺反式白藜芦醇苷混标：取1 mL反式白藜芦醇苷1000 μg/mL储备液于透明10 mL带盖玻璃管中，在254 nm和365 nm混合波长下避光照2 h，取40 μL用30%乙腈水稀释至1 mL，同时制备40 μg/mL反式白藜芦醇苷溶液，进行HPLC分析，采用外标法以峰面积进行计算，得反式白藜芦醇苷浓度295 μg/mL、即顺式白藜芦醇苷浓度705 μg/mL；
顺反式白藜芦醇混标：取1 mL反式白藜芦醇1000 μg/mL储备液于透明10 mL带盖玻璃管中，在254 nm和365 nm混合波长下避光照2 h，取40 μL用30%乙腈水稀释至1 mL，同时制备40 μg/mL反式白藜芦醇溶液，进行HPLC分析，采用外标法以峰面积进行计算，得反式白藜芦醇浓度405 μg/mL、即顺式白藜芦醇浓度595 μg/mL；
四种物质混合标准溶液：取等体积的顺反式白藜芦醇苷混标和顺反式白藜芦醇混标混匀，得到四种物质混标，浓度分别为：反式白藜芦醇苷浓度147.5 μg/mL、顺式白藜芦醇苷浓度352.5 μg/mL、反式白藜芦醇浓度202.5 μg/mL、顺式白藜芦醇浓度297.5 μg/mL；
(2) 加标方法：取四种物质混合标准溶液400 μL，加至5 mL样品中。
3、样品制备
取约50mL样品于100 mL烧杯中，用氨水调节样品pH至6.0，取出5 mL待净化（如需进行回收率测试，在此步骤加入混合标准品）。
4、净化——ProElut BLC 6 mL（Cat.# 65918）
a活 化： 依次加入5 mL甲醇、5 mL水，流出液弃去；
b上 样： 加入待净化液，流出液弃去；
c淋 洗： 加入5 mL 30%甲醇水，流出液弃去，推干小柱；
d洗 脱： 加入5 mL甲醇，收集流出液；
e重新溶解： 将流出液在55 ℃下氮吹至低于1 mL，用流动相定容至5 mL，供HPLC分析。
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