【特征图谱】照高效液相色谱法(中国药典2020年版四部通则0512)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(柱长为250mm,内径为4.6mm,粒径为5µm);以乙腈-0.2%磷酸(0.5:99.5)为流动相;柱温25℃;流速为每分钟0.8mL;检测波长为270nm。理论板数按次黄嘌呤峰计算应不低于5000。
参照物溶液的制备 取水蛭(蚂蟥)对照药材1.5g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入水20mL,加热回流60分钟,取出,放冷,离心处理(转速10000r/min,时间10分钟),取出,取上清液滤过,作为对照药材参照物溶液。另取次黄嘌呤、尿嘧啶对照品适量,加10%甲醇制成每1mL各含0.2mg的混合对照品溶液,作为对照品参照物溶液。
供试品溶液的制备 取本品,研细,取约0.3g,精密称定,置具塞锥形瓶中,加入水10mL,超声处理(功率200W,频率53kHz)10分钟,取出,放冷,离心处理(转速10000r/min,时间10分钟),取出,取上清液滤过,即得。
测定法 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10µL,注入液相色谱仪,测定。
供试品色谱中应呈现5个特征峰,并应与对照药材参照物色谱中的5个特征峰的保留时间相对应,其中峰2、峰3分别应与尿嘧啶、次黄嘌呤参照物峰的保留时间相对应,与次黄嘌呤参照物相应的峰为S峰,计算峰1、峰4、峰5与S峰的相对保留时间,其相对保留时间应在规定值的±10%范围之内。规定值为:0.51(峰1)、1.41(峰4)、1.82(峰5)。
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