Labbuy实验室商城助力肝素钠分析

低分子肝素（low-molecular-weight heparin，LMWH） 是近年发展起来的新一代肝素类抗血栓药物，其抗血栓作用优于肝素，而抗凝血作用低于肝素，且具有皮下注射吸收良好、生物利用度高、体内半衰期长、出血倾向小等优点，目前已广泛应用于临床。

根据LMWH的来源、生产工艺、末端结构的不同，LMWH 分为许多不同的种类，如达替肝素钠、依诺肝素钠、那曲肝素钙、帕米肝素钠、汀肝素钠等。达替肝素钠（Dalteparin Sodium）是低分子肝素的一种，由亚硝酸降解肝素得到，重均分子量5600～6400，峰位分子量6000，硫酸化程度为2.0～2.5/双糖单位。

本次以达替肝素钠为例，使用高效离子交换色谱法测定游离硫酸根含量。

样品前处理

精密称取达替肝素钠20 mg，加水溶解并稀释至10 mL，过0.22 µm滤膜。

色谱条件：

分析柱：IonPac AS11，250×4mm；

保护柱：IonPac AG11，50×4mm；

柱温：30℃；

淋洗液：3. 0 mmol/L 碳酸钠溶液；

流速：1.50 mL/min；

定量环：25 µL

抑制器：ASRS300 4 mm，自循环模式，电流为23 mA

检测方式：抑制型电导

结果和讨论

样品浓度的选择

达替肝素钠为多糖，在实验条件下保留在色谱柱上，不能被洗脱。样品浓度为2 mg/mL时，连续进样10次，硫酸根保留时间可提前0.3 min。为提高实验的稳定性，延长色谱柱使用时间，可在满足定量限的前提下，适当降低达替肝素钠的浓度。

色谱柱的选择及淋洗液梯度条件优化

样品中尽含有氯离子和硫酸根离子，非常易于分离。本实验选用IonPac AS11色谱柱、3.0 mmol/L碳酸钠溶液作为淋洗液，操作简单。、

重现性、线性和灵敏度

取达替肝素钠样品，平行处理六份，在选定的色谱条件下进行分离分析，硫酸根的重现性较好，峰面积、保留时间、峰高的相对标准偏差（RSD）均低于5%。选择一个样品重复六次进样，硫酸根的保留时间、峰面积和峰高的相对标准偏差（RSD）均低于5%，其结果见下图。

达替肝素钠样品中硫酸根的重现性结果

在选定色谱条件下配制适宜浓度范围的离子标准曲线，硫酸根在0.1~40 mg/L范围内具有良好的线性关系，其线性相关系数r=0.9995。在本实验条件下，基线噪音约为1.0 nS，根据三倍基线噪音计算出方法对硫酸根的定量限为31.7 µg/L，折合样品中硫酸根含量0.00015%。

实际样品分析及加标回收

取达替肝素钠样品测定并进行加标实验，硫酸根的加标回收率依次在99~102%之间。样品检测结果见下图。

实际样品检测结果及其加标回收率

采用本方法可以方便、快捷、准确检测达替肝素钠中的硫酸盐，操作较为简单，方法重现性较好，结果可靠。本实验所使用的色谱柱同时可用于肝素钠其它检测项目如多硫酸软骨素等项目的检测。

肝素钠中多硫酸软骨素的鉴别及测定

色谱条件：

色谱柱AS11离子分析柱250*2mm

AG11离子保护柱50*2mm

淋洗液A：0.04%NaH2PO4， pH3.0

淋洗液B：0.04%NaH2PO4/14%NaCIO4，pH3.0

流速：0.22mL/min

进样体积：10uL

二元梯度：

实际样品测定谱图

肝素钠产品中多硫酸软骨素的测定（参照中国药典2010及美国药典方法）

样品前处理：取样品，制成20mg/mL的水溶液。

肝素钠粗产品中多硫酸软骨素的测定

样品前处理：

取样品0.1g,加水2.5mL,混匀溶解后加2.5mL乙腈，混匀后，于冰箱中沉降10min，取出后用10000rpm高速离心机离心10min，取上层清液4ml，用氮气吹干后，用水定容至8ml，定容后的液体过0.22um尼龙滤膜，之后过OnGuard RP 柱，滤液上机分析。

Labbuy实验室商城精选的AS11色谱柱同时还可以用于肝素钠及肝素钠注射液中硫酸根、多硫酸软骨素、葡萄糖胺及半乳糖胺等多项目的检测。实验快速，效果灵敏度高、选择性好。

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