南墙
#液相色谱(LC)
岛津LC20A液相色谱仪使用十年常见问题分析
1、液相色谱常见问题－压力异常
(1)压力是液相色谱中最重要的指标，要关注压力及变化。
(2)保留时间的变化经常是由于压力不稳引起的。
(3)不同流动相在相同流速和温度的情况下压力是不同的（粘度有关）。
(4)记下仪器正常状态时，在固定条件下（流动相、流速、温度等）的压力值。
1.1压力异常问题－压力高
Ⅰ、LC-20A压力高的标准是什么？
a：LC-20A 新仪器系统压力是多少？
b：流动相是什么？流速是多少？
c: 参考标准：水 1、0 MP 以下（1 ml/min）
（注：进样器和检测器之间接双通）。
注意柱子的压差（真实压力值）
Ⅱ、怎么推断压力高的部件在哪儿？（首先排除柱子或保护柱压力高）
a：顺推法。
b：反推法。
(注意检测器双通的堵塞或者管路被憋紧堵塞）
Ⅰ、首先确认是保护柱或色谱柱堵塞还是系统堵塞(不能超声保护柱芯）
Ⅱ、色谱柱堵时，选择合适的冲洗液，不建议反冲。特殊柱子以说明书为准。
Ⅲ、系统堵塞，应确认是哪一部份堵塞，由前向后或由后向前逐部件进行排除。
容易发生堵塞的部件
(1)保护柱 。
(2)泵的管路过滤器和泵头管路（LC-10ATvp出口单向阀到右泵头）。
(3)混合器预混合室过滤器。（主混合器和预混合室建议不要拆洗）
(4)某些细内径的系统管路。
(5)自动进样器高压阀和细内径的出口管路（UFLC)。
(6)自动进样器的进样口到高压阀管路（LC2010)
(7)手动进样阀的定子堵塞。
(8)检测器流通池半微量池的入口管和背压管。
(9)自动进样针堵塞，（劣质进样垫）
1.建议用户使用保护柱来延长分析柱的寿命。
柱压高或者分析问题80％原因在保护柱，首先应该排除保护柱。
不建议自己为用户填补柱子。
柱子没有保修。
泵的管路过滤器堵塞 更换周期 半年∽1年
混合器预混合室过滤片 更换周期：半年－1年
自动进样器堵塞
高压阀转子：更换周期2年
转子槽磨损掉屑造成堵塞和吸样不准。
转子10万次不漏液（PEEK制，含盐流动相缩短次数）
LC-2010 的进样口到高压阀的PEEK管
1.2液相色谱常见问题-压力零
Ⅰ、如果压力为零：
(1)泵头中没有液体，充满气泡。
(2)单向阀完全堵死。
(3)吸滤头完全堵死。
(4)排液阀没关上。
(5)管路漏液。
(6)主板或者压力传感器。
(7)泵体锈蚀，柱塞杆不动或折断。
(8)低压梯度阀滤网堵塞。
Ⅱ、如果有压力但是压力比正常时低：
(1)泵头有气泡。
(2)柱塞密封垫漏液 。
(3)管路漏液。
(4)单向阀轻度堵塞。
(5)单向阀磨损。
(6)吸滤头堵塞
(7)排液阀没关紧。
(8)排液阀锣纹磨损或O圈磨损漏液
(9)传感器故障
1.3液相色谱常见问题－压力波动
Ⅰ、压力波动主要原因：
(1)泵头中有气泡。（建议甲醇赶气泡）
(2)单向阀脏、堵塞、磨损。
(3)单向阀非耐乙腈型
(4)柱塞密封垫漏液。
(5)柱塞杆磨损漏液
(6)流动相有气泡。
(7)吸滤头脏。
(8)脱气机脱气不良。
(9)泵参数值、原点位置不合适不准。
(10)泵轴承磨损。（更换压力传感器及泵体要更改参数）。
(11)LPGE不良。
Ⅱ、各型号的泵压力允许波动范围（流动相为纯水）。
1、0ml/min 日常运行标准(非安装标准):
LC-20AD : 0.2 MPa
LC-20AT : 0.3 MPa
LC-20AB : 0.2 MPa
LC-10ATvp : 0.5 MPa
LC-10ADvp: 0.2 MPa
LC-2010AHT: 0.5 MPa
超声清洗零部件步骤：
(1)纯水 15 min
(2)纯异丙醇 15 min（低极性溶剂清洗）
(3)特别脏的用5％硝酸15 min或者25％的磷酸（洗锈），再重复前面1、2 步骤。
系统管路清洗步骤-管路脏或者堵的冲洗
注意：不能接柱子！
流速： 1 ml/min
步骤 | 时间 |
(1)纯水 | 15 min |
(2)5％ 硝酸或 25％磷酸 | 60 min |
(3)纯水 | 15 min |
(4)纯异丙醇 | 60 min |
(5)甲醇 或 50％ 水/ 甲醇 | 30 min |
建议定期清洗（1∽2月一次）
2、液相色谱常见问题-漏液问题
经常漏液的部件：
(1)泵：柱塞密封垫（漏流动相）
排液阀
清洗垫（漏清洗液）
(2)手动进样器：转子密封垫
自动进样器：进样垫
样品环
(3)检测器：流通池堵塞（垫片损坏、透镜破碎）
(4)柱子接头处：（接头松动，接头磨损，接头不匹配）
3、液相色谱常见问题-基线问题
3.1基线噪音大-毛刺
基线噪音标准：
SPD-10Avp/20A 20 uv 流动相 纯水 250nm
SPD-M20A 50 uv 流动相 纯水 250nm 600nm
原因：
(1)流动相污染，使用低纯度溶剂。
(2)流动相、检测器流通池内有气泡。
(3)通过检测池的能量不够 (光路脏、氘灯老化、流动相、池子脏）。
(4)没接好地线。
(5)波长设定短（220nm以下）。
(6)电源电压波动几十伏。
(7)电路板故障。
(8)仪器振动。
3.2基线漂移－起伏和单向
基线漂移标准：
SPD-10Avp/20A: 600 uv /hour 纯水 250nm
SPD-M20A: 2mv /hour 纯水 250nm 600nm
原因：
(1)流动相污染，使用低纯度溶剂。
(2)检测器的温度受到环境波动（风口，空调口）。
(3)冲洗平衡柱子时间不够（半小时），柱子没恒温。
(4)柱子或管路太脏。
(5)波长设定短（220nm以下）。
(6)特殊流动相温控影响。（离子对试剂需要恒温较稳定）
(7)检测器要预热30min以上。
4、液相色谱常见问题-进样精度问题
4.1手动进样阀 7725i
CV：10ul 6针 面积 RSD 1％
(1)进样量不合适（10ul）。
(2)进样针定量不准。（不熟练）
(3)进样针有气泡。（慢提快打）
(4)进样口转子针密封松动（用橡皮顶紧）。
(5)进样针太细，插不紧。
(6)转子密封垫脏、磨损、漏液。
(7)定量环堵塞。
(8)废液管堵塞或者位置不对。
(9)进样的方法不正确。
进样针用完以后要及时清洗，否则针会粘住。
4.2自动进样器
10ul 6针 面积 RSD
SIL-10ADvp SIL-20A 0.3 %
SIL-10AF 模式 A 0.5 % 模式 F 1 %
SIL-10AP 1.0 %
(1)清洗液干了。（瓶子或管路）
(2)没有排气（purge）或排气时间（25min)不够。
(3)清洗液没脱气。（没有在线脱气机情况）
(4)高压阀转子密封垫堵塞或磨损。
(5)进样垫堵塞或磨损漏液。
(6)非岛津的瓶及瓶垫。
(7)针或定量环漏液或堵塞。
(8)计量泵轴承螺杆磨损。
(9)进样瓶拧得太紧。
(10)死体积。（后面有介绍）
(11)吸样速度不合适。
(12)样品稳定性（待审）
(13)DIP TIME改变了，峰形不好，积分不准确。（周建华提）
5、液相色谱常见问题-保留时间精度
保留时间重现性标准：
10ul 6针 保留时间 RSD （连接色谱柱）
7725i 和自动进样器： 0.5 ％
(1)泵输液送液不正常（压力波动、气泡）。
(2)柱温的变化（室温变化小于2℃）。
(3)流动相组分挥发变化（封口膜）。
(4)流动相的PH值不同，缓冲能力不够（样品影响）（低波长用磷酸盐，普通波长用醋酸盐。）
(5)色谱柱平衡时间不够（C18,15cm 30min-60min）。
(6)梯度洗脱未回初始流动相浓度比例或时间不够。
(7)纯有机试剂与高盐流动相混合。
(8)柱子问题。
(9)低压梯度阀不良。
(10)密封垫漏液，排液阀没拧紧。
发布时间：2023-08-01 22:40
液相色谱仪选型心得 更多
-
人生如逆旅，我亦是行人
处理岛津液相色谱工作站提示“未认证许可协议”的问题
处理岛津液相色谱工作站提示“未认证许可协议”的问题 前段时间使用岛津液相色谱仪的时候，不小心把电脑时间修改了，当天发现问题后就把电脑时间修改回了正常时间，但是过了两天发现岛津液相色谱仪的工作站无法打开了。如下图 提示“[12d4]未认证许可协议” 咨询工程师，工程师说要上门解决这个问题。 在等待工程师上面的期间，我猜测是电子加密狗出问题了，去电脑usb插口上面查找电子加密狗，结果没有找到电子加密狗。 这时候我猜测应该是使用电子授权，因为我修改时间，和他的电子授权冲突了，也可以说是他的电子授权算法有bug，导致无法打开工作站。 既然电子授权和时间有关系，我考虑是不是可以把时间再改到上次失误修改的时间试试，改完后，我发现工作站可以正常打开了。 时间不可能一直是错误的时间，否则会导致检验检测的日期错误，这是不被允许的。我又把时间修改为了当前日期的后一天，发现工作站可以正常打开，然后我又把时间修改为当前的准确日期，我发现工作站还可以正常打开。由此可以得出结论，如果电脑时间出现变化，软件就无法打开，岛津的工作站电子授权的算法存在严重的问题，也可以说是bug。如果电脑的cmos电池没有电了，每次开机时间都会出错，这种情况下岛津液相色谱的工作站要每次都打不开怎么办？不知道岛津有没有想到这个问题？
-
yqfxy
岛津液相 使用心得
【仪器心得】岛津液相 使用心得 岛津液相色谱仪检测应用广泛，和大家分享一下LC20。 1.关于仪器的使用经验：LC-20A组成，仪器由LC-20AT溶液输送单元、SIL-20AC自动进样器、检测器、DGU-20A3R脱气机、CTO-20AC柱温箱组成。安装色谱柱：将色谱柱的入口连接到自动进样器入口端，色谱柱出口接入检测器的入口端（蓝色标记）。注意色谱柱的方向。参数设置，点击打开“LabSolutions”主项目图标，在LabSolutions主项目窗口中单击“仪器”图标再点击“选择项目”从中选择项目或单击“管理工具”>“项目管理”>“添加”项目名称后再重复上述操作。点击“仪器类型”图标选择“LC”,双击图标打开工作站的操作页面。 2.仪器的优点和不足在这说说液相的排气吧，如果输液泵没有流动相流出，又无压力指示。原因可能是泵内有大量气体，这时可打开排液阀，使泵在大流速下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml针管在泵出口处帮助抽出气体。另一个原因可能是密封环磨损，需更换。在反相条件下，若检测样品的流动相是含有盐的流动相，则先用含有大量水的甲醇进行冲洗，再用纯甲醇冲洗并进行饱和。在正相条件下，若检测样品的流动相是含有少量水的流动相，则先用异丙醇过渡，再用正己烷冲洗并饱和。 3.总结关于检测器的寿命，检测本身没有问题，也要注意上面的耗材，比如紫外检测器中氘灯有使用寿命，自检通不过时应及时更换。在说说压力和流量不稳，原因可能是有气泡，需要排除；或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，浸入异丙醇内超声清洗，再用水超声清洗。
-
yqfxy
液相色谱仪 安捷伦1260 使用心得
【仪器心得】液相色谱仪 安捷伦1260 使用心得 安捷伦液相色谱仪检测行业的小伙伴家喻户晓的，从1200到1260再到1290整体上区别不大，且模块可以灵活安装，今天和大家分享一下，也请液相的专家老师批评指正。 1.关于仪器的使用经验：每台设备的配制不一样，和大家介绍一下使用的这台主要部分，四元泵、自动进样器、紫外检测器、脱气机、柱温箱、工作站、电脑等组成。检测器部分型号和种类很多，以紫外的为例和大家介绍吧。打开计算机进入工作站的操作页面。把流动相放入溶剂瓶中，打开Purge（冲洗）阀（逆时针旋由紧至松即可）。右键单击泵，出现参数设定菜单，单击设置方法选项，进入编辑。设流速：1-5ml/min，单击确定；单击泵，出现参数设定菜单，单击控制泵选项，选中启动，单击确定，则系统开始冲洗，直到管线内无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有通道无气泡影响为止。 2.仪器的优点和不足溶剂入口过滤芯为消耗品，不可以使用超声清洗，可以使用40%硝酸浸泡过夜或用铬酸洗液淋洗，然后用水充分冲洗至中性，以重复使用，不错的选择。安捷伦的售后是一个优势，回复及时并且能联系上的客服都是行业的专家老师。 3.总结对于溶剂入口过滤芯堵塞，可能造成系统压力过低或压力波动，这个建议半个月清洗一次；其他季节，整体上近几年没有更换过太多的备件，这台用的是DAD的两个，维生素AE可以同时双波长检测，避免了重复二次前处理的问题。
