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产品介绍:
PureCube Rho1D4 Agarose是针对Rho1D4标签膜蛋白的亲和层析产品,Rho1D4是一种含有9个氨基酸的长链亲和标记物(TETSQVAPA),可用于高特异性亲和蛋白纯化。库柏生物的PureCube Rho1D4琼脂糖纯化树脂是为FPLC蛋白的纯化测定而制造的。具有Rho1D4标签的膜蛋白可以通过PureCube Rho1D4 Agarose,利用Rho-tag高特异性来纯化,它在蛋白质产量和纯度方面甚至胜过更常用的Flag-Tag标记。本产品由通过Rho1D4抗体进行功能化40 μm琼脂糖微球组成。德国Cube Biotech研发团队拥有逾40年经验在膜蛋白的表达、纯化和结晶等研究经验,为您提供专用于膜蛋白纯化的Rho1D4系列高质量PureCube Rho1D4琼脂糖填料、磁珠和预装柱,以及具有较高流速XL琼脂糖同系列产品。
产品优势:
1)德国制造,欧美优质膜蛋白纯化产品供应商;
2)膜蛋白纯化的理想解决方案,可以获得纯净且活性的膜蛋白;
3)结合能力可高达3-4mg/mL;
4)高度特异性纯化带有标签的重组膜蛋白;
5)可重复再生使用;
6)良好的流量分布和最小空隙体积;
7)兼容常用的色谱仪器;
8)配合Nanodisc使用,是目前非常有效的膜蛋白提取解决方案,数家科研院校正在使用;
9)高性价比的膜蛋白纯化产品!
产品详解:
对膜蛋白提取有高特异性和高产量
每个批次的PureCube凝胶均是按照严格的质量标准体系生产并严格检验,以确保每一批分装的产品都有高的蛋白结合能力。通过与特异性抗原表位相互作用,辅以优化过的纯化操作步骤,能使目标蛋白在洗脱组分中有高产出量。图1是对CXC趋化因子受体4(CXCR4)的纯化溶于Fos-Choline®-14的带标签蛋白通过大肠杆菌表达,再经由含PureCube Rho1D4琼脂糖的层析柱纯化。用Rho1D4多肽作为洗脱液,4次洗脱组分每毫升共收集到0.8mg、1.0mg、0.85mg和0.6mg目标蛋白。蛋白印迹结果说明CXCR4大约是65 kDa和35 kDa。这些条带是39.7 kDa膜蛋白的二聚体和单体。单体、二聚体的分离以及去除洗脱肽段,可以通过排阻层析的方法实现。
图1:用PureCube Rho1D4琼脂糖纯化CXCR4。
大肠杆菌裂解液(TL)溶解在Fos-Choline®-14中,溶解的组分(SF)与装有Rho1D4抗体的免疫亲和层析柱相结合。平衡组分中没有测得损失目标蛋白,经分光光度计测定,CXCR4在洗脱组分(E1-E4)中得浓度范围在0.6-1.0mg/mL。
蛋白 | 表达系统 | 纯度 | 产率(所有回收蛋白) | 采取的纯化步骤 |
hVN1R1 | 可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物) | 90% | 1mg/1g细胞 | Rho1D4 IAC+SEC |
FPR3 | 可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物) | 90% | 2mg/6g细胞 | Rho1D4 IAC+SEC |
TAAR5 | 可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物) | 90% | 1mg/9g细胞 | Rho1D4 IAC+SEC |
OR131-2 | 可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物) | 90% | 2.9mg/10g细胞 | Rho1D4 IAC |
hOR17-4 | 可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物) | 90% | 7.5mg/2.5L培养物 | Rho1D4 IAC+SEC |
hOR17-4 | 无细胞小麦胚芽提取物 | 70%* | 0.3mg/mL | Rho1D4 IAC+SEC |
CD81 | 可诱导的HEK293S细胞系(哺乳动物) | >95% | 26μg/3×10^7 | Rho1D4 IAC |
AE1 | S.啤酒系BJ5457 | 93% | 2.5mg/18L | Rho1D4 IAC |
表1:有文献报道的使用Rho1D4系统纯化膜蛋白的纯度和产率。
尽管很多用Rho1D4系统纯化的膜蛋白均为G蛋白偶联受体家族,该系统也可以有助于辨别其他如转运体之类的膜蛋白。 IAC:免疫亲和层析;SEC:排阻层析。
在20世纪80年代发现Rho1D4表位和配对抗体,当时通过将抗体偶联到Sepharose®上来纯化在猴肾细胞中表达的牛视紫红质。自此,Rho1D4系统(标签,偶联抗体的亲和基质,洗脱肽)开始用于少量膜蛋白的纯化,包括G蛋白偶联受体(GPCR),ATP结合转运体,溶质反向转运体和一个四次跨膜蛋白。
图2:假设有3个跨膜域的膜蛋白。Rho1D4标签加到膜蛋白C端,它的序列是T-E-T-S-Q-V-A-P-A
通过转基因修饰在目标膜蛋白的C端(或N端)加上Rho1D4标签(如图1)。一旦配有该序列,即可用装载有Rho1D4抗体的亲和基质捕获目标蛋白,并随后通过添加过量Rho1D4多肽,产生竞争性结合基质表面抗体来洗脱目标蛋白,用此方法洗脱比改变pH值等方式更加温和。
Rho1D4系统的一大优势是抗体与表位相互作用特异性非常高。而其另一大优势是洗脱目的蛋白收率相当高。利用Rho1D4纯化的目标蛋白可用于功能性研究,如:配体结合的特性,蛋白与蛋白间的相互作用。
*纯度是从低浓度经一步Rho1D4 IAC在反应溶液中得出的;产率是在洗脱成分浓缩并过SEC柱后计算。
技术参数:
用途 | Rho1D4 (TETSQVAPA)标记蛋白的高特异性亲和纯化 |
特异性 | 与Rho1D4标记蛋白的亲和性 |
特殊功能 | 强烈推荐用于膜蛋白的纯化 |
结合力 | 3-4 mg / ml 琼脂糖 |
磁珠配体 | Rho1D4 抗体 |
粒径大小 | 40 μm |
螯合剂稳定性 | 在含有10 mM DTT 和 1 mM EDTA的缓冲液中稳定 |
罐装量 | 以 50?%悬浮液进行运送 |
所需设备 |
· 裂解液 · 洗涤缓冲液 · 洗脱缓冲液 · 冰水浴 · 可用50?mL离心管的可预冷离心机 (最小转速 10,000 x g) · 50?mL 离心管 · 微量移液枪和微量移液枪尖 · 一次性重力柱,带盖底出口,2ml · pH计 · 回转摇床 · SDS-PAGE缓冲液,试剂和设备 可选择:Western Blot试剂和设备 |
推荐流速和保存温度 | 0.25-1.0mL/min,4℃ |
相关产品:
1. 所有PureCube系列琼脂糖产品均提供用于自动液相色谱系统(如:FPLC)的预装柱(提供1mL);
2. 用于稀释样品或用于pull-down实验,我们推荐使用PureCube Rho1D4 Magbeads磁珠;
3. Rho1D4抗体:这种抗体作为分离物质来生产PureCube的Rho1D4琼脂糖。也可以在Western Blot实验或者ELISA实验中检测rho-tagged蛋白;
4. Rho1D4多肽:在洗脱缓冲液中,Rho1D4多肽竞争结合到亲和层析凝胶上然后释放标签蛋白,相对于改变洗脱液的pH值来说提供了更温和的洗脱环境。Cube Biotech 提供了一系列的Rho1D4肽段,这些肽段已经被PureCube Rho1D4琼脂糖验证;
5. 配合Nanodisc产品使用,是有效的膜蛋白提取解决方案。
6. Rho1D4多肽可以单独购买,也可以购买PureCube Rho1D4试剂盒套装。详情请参见订货信息以及公司官网。
What our customers say:
订购信息:
33101 | PureCube Rho1D4 Agarose (1 ml) |
33102 | PureCube Rho1D4 Agarose (5 ml) |
33103 | PureCube Rho1D4 Agarose (10 ml) |
33301 | PureCube Rho1D4 Cartridge (1x1 ml) |
33305 | PureCube Rho1D4 Cartridge (1x5 ml) |
33199 | Rho Starter Set 1: PureCube Rho1D4 Agarose (1 ml) + Rho1D4 peptide (5 mg) |
33299 | Rho Starter Set 2: PureCube Rho1D4 MagBeads (1 ml) + Rho1D4 peptide (5 mg) |
33399 | Rho Starter Set 3: PureCube Rho1D4 Cartridge (1x1 ml) + Rho1D4 peptide (5 mg) |
16201 | Rho1D4 peptide (5 mg) |
16203 | Rho1D4 peptide (25 mg) |
40020 | Rho1D4 Antibody (200 μg) |
是否可延长保修期: 否
现场技术咨询: 无
免费培训: N/A
免费仪器保养: N/A
保内维修承诺: N/A
报修承诺: N/A
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