CRISPR-Cas9技术原理：
CRISPR（clustered,regularlyinterspaced,shortpalindromicrepeats）是一种来自细菌降解 入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件。
目前，来自Streptococcuspyogenes的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9蛋白（含有两个核酸酶结构域），可以分别切割DNA两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。
由于PAM序列结构简单（5'-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前高效的基因组编辑系统。
CRISPR-Cas9技术优势：
1.效率高：可精确编辑基因组，敲除效率高
2.周期短：CRISPR-Cas9系统的构建和使用极为方便，极大降低了实验难度，缩短实验周期
3.高嵌合率，生殖遗传稳定；
4.多重编辑能力：可实现多个靶位点同时进行基因打靶；
5.可实现大片段DNA敲除、敲入、条件性敲除。
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