Gelfree 8100 微量蛋白质制备系统(多通道凝胶洗脱液相组分截留电泳)

随着生物质谱技术的快速发展，蛋白质和多肽分析的分辨率、灵敏度、准确性、鉴定能力大为提高。尤其是Top-down蛋白质鉴定方法大量使用后，传统的一维、二维电泳或液相色谱等样品制备技术已经不能满足需要。分析前如何降低样品的复杂程度、获得完整蛋白质、富集低丰度蛋白质、降低高丰度蛋白质对低丰度蛋白质的干扰、保留蛋白质的各种翻译后修饰状态、提高样品处理通量等，已成为蛋白质样品制备方法的重要前提。

 英国Expedeon公司推出了一套新型的微量蛋白质制备系统(多通道凝胶洗脱液相组分截留电泳) — Gelfree 8100Fractionation System。该系统使用凝胶洗脱液相组分截留电泳技术（gel-eluted liquid fraction entrapment electrophoresis，GELFREE），基于蛋白质分子量的不同，对完整蛋白质进行分组，使用移液器在液相中回收蛋白质。该系统能在短时间内同时处理8个样品。在3.5kDa—500kDa范围内，相对于其它传统分组方法，具有上样量大、重现性好、分辨率高、回收率高、分离速度快和操作简单的优点。能增大蛋白质组分析的覆盖范围，改善后期质谱分析的结果，提高蛋白质鉴定结果的可信度。

特点及应用 

• 基于分子量的不同对完整蛋白质进行分离纯化，收集；

• 蛋白质样品在液相中回收，避免了传统一维、二维电泳后的染色和条带或点位切割步骤；

• 蛋白质分离范围高达3.5kDa—500kDa；

• 8个分组通道，满足高通量样品处理的要求，每个通道最多可将样品分为30个组分；

• 用户可根据需要自行设置蛋白质分组程序，分离纯化特定的目标蛋白；

• 样品容量大，每个通道蛋白质上样量最高可达1mg，是普通一维电泳的5倍以上，有利于富集低丰度蛋白质；

• 回收率高，>80%；

• 重现性好，CV<15%；

• 分离过程不受蛋白质疏水性或等电点的影响,这就意味着你几乎覆盖整个蛋白质组。

• 简化蛋白质组成的复杂程度，缩小复杂蛋白质样品的动态范围，便于使用LC-MS/MS进行Bottom-Up蛋白质组学研究；

• 蛋白质回收后保留其完整性，便于进行Top-Down蛋白质组学研究，分析翻译后修饰、蛋白质异构体、氨基酸衍生物等；

• 蛋白质回收后在溶液内消化，免去了费时的胶内消化步骤；

• 特别适合为LC-MS/MS、MALDI-TOF或免疫印迹等分析方法制备样品；

Gelfree 8100微量蛋白质制备电泳由主机和8通道电泳槽两部分构成。主机设计紧凑，能为8个独立的电泳通道提供电压,设置暂停用于收集组分。使用触摸屏，可以设置电压、组分系列和使用的通道数等参数，进行宽范围的组分分析或目标蛋白的富集。运行过程中，触摸屏实时显示每个通道电泳状态及电压电流值。

 电泳槽由五个部分组成，分别是：阴极缓冲液槽、上样槽、电泳凝胶管、样品收集槽、阳极缓冲液槽。电泳凝胶管是内装预制SDS-PAGE胶的玻璃管。缓冲液槽与上样槽及收集槽之间由一个截留分子量为3.5kDa的膜分隔开。

电泳槽套盒： 

一次性电泳槽套盒含8个独立通道，可同时或分别使用1—8个通道，处理1—8个样品，未使用的通道可保存供以后使用。针对不同的需求，提供四种电泳槽套盒供选择。

Gelfree 8100微量蛋白质制备电泳的工作原理：

                        样品和样品缓冲液混合后加入到上样槽内

                          电泳开始后，蛋白质首先在浓缩胶内浓缩

在分离胶内，较小的蛋白质移动更快，更先从胶内进入收集槽,

到达预设的收集时间时，电泳暂停，从收集槽中收集第一组分的蛋白质

使用Gelfree 8100（胶浓度为10%）将200微克酿酒酵母菌总蛋白分离成12个组分，

然后使用一维蛋白质电泳观察分组结果

对于不同的蛋白质上样量，优化好收集间隔时间，可以最大程度的提高蛋白质的回收效率

Gelfree 8100微量蛋白质制备电泳和质谱结合时，制备蛋白质样品的操作流程