多功能酶标仪 SpectraMax i3x

一种快速、高通量的病毒中和抗体检测方法

新冠病毒的出现导致了世界范围内的新冠大流行，为了理解病毒的发病机理并开发疫苗，亟需快速开发多种研究工具。检测病毒感染和疫苗接种后的免疫反应对新冠病毒的研究十分重要。由于中和抗体是免疫反应和疫苗效价的关键生物标志物，患者血清样本中的中和性抗体水平是用于监测有效性的重要参数。人体血清中和抗体的鉴定常使用传统方法例如蚀斑减少中和试验 (PRNT) 来检测。然而，该方法使用活的、具备感染性的病毒加入到靶细胞中，所以需要生物安全三级实验室以及耗时费力的细胞培养。数据结果的分析耗费时间并且不能自动化。此外，假病毒中和试验 (pVNT) 方法使用改良型的病毒，可以在生物安全二级实验室完成，但此方法需要细胞培养和荧光成像来测得中和抗体活性，因此，也不适用于样品的高通量筛选。 此 GeneScript cPass 新冠病毒中和抗体检测试剂盒采用免病毒中和测试法 (sVNT) 来克服传统的病毒中和实验的缺点。它采用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 的模式，如图 1 和图 2 所示。

使用 ScanLater Western Blot protein Ladder 估算蛋白分子量

简介 ScanLater Western Blot Protein Ladder 是 ScanLaterWestern Blot 检测系统的重要组成部分。该 protein ladder的主要应用包括蛋白质分子量的估计，凝胶电泳的可视化，以及从凝胶到印迹转移过程的评价。ScanLater Western Blot Protein Ladder 由 7 个生物素化的重组蛋白以及 3 个预先染色的标记蛋白组成。生物素化蛋白的检测是通过在二抗步骤的印迹中加入铕标记的链霉亲和素来实现的。 在 SpectraMax i3 或 SpectraMax Paradigm 多功能微孔板读板机上，使用ScanLaterWestern Blot 检测卡盒读取印迹。 ScanLater Western Blot Protein Ladder ScanLater Western Blot Protein Ladder 由 7 个 生物素化的重组蛋白组成，分别为 10、20、40、50、80、100 和 140 kD。用铕标记的链霉亲和素孵育的印迹检测它们，当用 ScanLaterWestern blot 检测盒读取时，它们显示为浅色条带 ( 图 1, 左 )。此外，在 18、31 和 70 kD 处有三个可见的预染色标记蛋白 ( 图1，右 )。这些蓝色条带在电泳凝胶和转移后的印迹上可见。当用扫描 Western Blot 检测系统读取ladder 时，它们也被视为暗条带。生物素化 ladder 蛋白的分子量与其在凝胶上的迁移距离之间的线性关系在图 2 中与参考标准进行了比较。

教你两步完成肝素效价的测定

肝素首先从肝脏发现而得名，它也存在于肺、血管壁、肠粘膜等组织中，是一种由动物结缔组织的肥大细胞合成的粘多糖，是由二种多糖交替连接而成的多聚体。它是一种天然的抗凝血物质，在体内外都有抗凝血作用，临床上常用其钠盐或钙盐。肝素钠或肝素钙注射液主要是从猪或牛的肠粘膜中提取 的硫酸氨基葡聚糖的钠盐或钙盐，作为迅速达到抗凝作用的首选药物，被广泛用于血栓栓塞性疾病、心肌梗死、心血管手术、心脏导管检查、体外循环、血液透析等。随着药理学及临床医学的进展，肝素的应用不断扩大。 肝素类产品的效价不能用化学或物理的方法进行确切测定，只能采用生物检定法测定，即利用药物对生物体的作用并与标准品加以比较以测定其效价和生物活性的一种方法。目前体外的抗凝活性实验主要有血浆法和生色底法，血浆法虽然可以全面衡量肝素的抗凝活性，却很难标准化；生色底物法测定 肝素钠的抗 IIa 因子和 Xa 因子活性虽然不能完全反映肝素钠的活性，但国际上通常采用这种方法来确定肝素钠的效价。欧洲药典 5.0 版和我国药典均采用该方法，美国药典从 2009 年开始采用生色抗 IIa 因子测定法代替此前药典中的羊血浆法测定肝素效价。生色底物法最大的优点是它在效价测定中的高度专一性，能够识别出此前药典中血浆法不能识别的肝素相似性潜在药物，并且酶标仪的使用使常规测定自动化和标准化。 生色底物法的原理是通过微量显色法比较肝素钠标准品 S 与供试品T抗 IIa 因子和 Xa 因子的活性，以测定供试品的效价。效价是某种药物达到一定效应时所需的剂量，产生相同效应药物的剂量比较时，所需剂量越小，药物的效价就越高，反之效价就低。在人或动物体内，发生凝血作用的主要是凝血酶，低分子肝素在人体内与抗凝血酶形成络合物，然后抑制凝血酶 ( IIa 因子或 Xa 因子 ) 的活性，达到抗凝血的作用，剩余未被抑制的 IIa 因子或 Xa 因子与生色底物作用显色，使用酶标仪在 405nm 波长处读取吸光度，终溶液的吸光度值与低分子肝素的效价成反比。以吸光度为纵坐标，标准品系列溶液 ( 或供试品系列溶液 ) 浓度的对数值为横坐标分别作线性回归，按生物检定统计法 ( 通则 1431 ) 中的量反应平行线原理 4.4 法实验设计，计算效价及实验误差，药典要求可信限率(FL%) 不得大于 10 %。

【应用文章下载】利用基于 HTRF 的 Tag-lite 技术检测胰高血糖 素 GLP-1 受体的 Kd 值

Cisbio 的 Tag-lite HTRF 平台能 够 有效 地 用 HTRF 荧 光 团标记目标位点上感兴趣的蛋白。细胞表面受体可以插 入 SNAP-tag 质粒中，然后用这种结构转染细胞并表达 标记的受体。通过添加 snap -lumi4-Tb 底物，用铽 (Tb) 穴状化合物标记受体。为了进行结合试验，受体的配体 用 HTRF 受体荧光团标记，例如 d2。当 d2 配体与铽标 记的受体结合时，可以使用具备 HTRF 功能的微孔板读 板机检测受体到配体的时间分辨荧光共振能量转移 (TRFRET) ( 图 1)。 Cisbio 提供了多种标签和兴趣蛋白标记编码的质粒，以 及已经用这些结构物转染的冷冻细胞。该结构体能够表 达标记蛋白，如受体，可以用铽标记，同时其受体配体 ( 激动剂或拮抗剂 ) 用受体荧光团标记。Tag-lite 平台适 用于广泛的应用，如受体二聚化、配体结合分析和第二信 使评估。结合动力学可以研究药物 - 蛋白质复合物的结 合和解离速率，是优化候选药物体内疗效的必要步骤 。