IBA的pEXPR-IBA载体是专为哺乳动物细胞中高水平表达和纯化重组Strep-tagÒ和/或 6xHistidine-tag融合蛋白而设计的。这些载体的克隆策略相同,因而与相应的细菌pASK-IBA质粒相兼容。因此,一个PCR片段可以被平行克隆进pASK-IBA及其相等的pEXPR-IBA。人巨细胞病毒(CMV)立早启动子在很多哺乳动物细胞中提供强表达。为了延长在转染细胞中表达的时间,载体会在潜伏感染了SV40大T-抗原(如COS7)的细胞系中复制。此外,新霉素抗性基因可以允许直接筛选稳定的细胞系。
pEXPR-IBA 特点 益处
Strep-tag II 采用Strep-Tactin基质纯化重组蛋白
CMV 立早启动子/增强子 在多种哺乳动物细胞中高水平表达
多克隆位点 插入目标基因并与Strep-tag和/或6xHistidine-tag融合。与pASK-IBA载体兼容
新霉素抗性基因 在哺乳动物细胞中筛选稳定的转染子
氨卞青霉素抗性基因 在E. coli中筛选
pUC复制起始位点 在E. coli中高拷贝复制
BM40 (仅见于pEXPR-IBA42 和44 ) 使蛋白质分泌进培养基中
Factor Xa, thrombin (thb), enterokinase (ent) ,TEV protease (TEV)切割位点 如果需要可以除去Strep-tag(一般不需要)
质粒 Strep-tag 6xHis
-tag HA
epitope-tag 分泌 Tag去除 蛋白酶 抗性 目录号
哺乳动物载体:具有人CMV启动子
pEXPR-IBA3 C-端 - No No - Amp/Neo 2-1903-000
pEXPR-IBA5 N-端 - No No, - Amp/Neo 2-1905-000
pEXPR, , , -I, B, A7<, /DIV> N-端 - No Yes factor Xa Amp/Neo 2-1907-000
pEXPR-IBA13 N-端 - No Yes thrombin Amp/Neo 2-1913-000
pEXPR-IBA15 N-端 - No Yes enterokinase Amp/Neo 2-1915-000
pEXPR-IBA17 N-端 - No Yes TEV protease Amp/Neo 2-1917-000
pEXPR-IBA42 C-端 N-端 - Yes No - Amp/Neo 2-1942-000
pEXPR-IBA43 C-端 N-端 - No No - Amp/Neo 2-1943-000
pEXPR-IBA44 N-端 C-端 - Yes No - Amp/Neo 2-1944-000
pEXPR-IBA45 N-端 C-端 - No No - Amp/Neo 2-1945-000
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