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钦诚生物 | 一周
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其他参数
原代培养原理和应用:
一、细胞原代培养是通过特殊分离方法从胚胎、组织器官以及外周血中分离获得单细胞,置于合适的培养基中培养,在无菌、适当温度和一定条件下,使细胞生存、生长和繁殖的过程。原代培养的“代”并非细胞的代数,是指细胞培养的次数,从体内取出组织接种培养到第一次传代的阶段,都属原代培养,一般持续1-4周。常见的原代培养过程如图1所示。
二、原代培养细胞直接来源于活体组织,体外培养也尽量模拟体内环境,使得分离得到的细胞接近生物体内的生活状态,可作为研究生物体细胞的生产、代谢、繁殖、凋亡提供有力手段,亦可用于各种药理作用、药物开发研究和临床实践。
三、原代细胞的质量取决于多个因素:取材、培养条件的优化、无菌操作,特别是组织分离技术等。对于大多数研究者而言,想要获得高质量的原代培养细胞仍然比较困难。尽管原代培养技术已较普遍,但是有时仍会得到一些难以解释的结果。拥有行政许可的洁净级实验动物中心,已构建细胞培养和实验平台,可分离培养数百种人、大小鼠和大型动物的原代细胞,并在此基础上提供相关细胞实验服务,包括细胞培养、细胞转染以及细胞药物刺激后各种增殖、侵染和凋亡实验。
小鼠脐带间充质干细胞
产品名称 | 小鼠脐带间充质干细胞 | 组织来源 | 脐带组织 |
产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 | 生长特性 | 贴壁 |
传代特性 | 可传2-3代 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
培养信息:
培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
方法简介:
公司实验室分离的小鼠脐带间充质干细胞采用组织贴块法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测:
公司实验室分离的小鼠脐带间充质干细胞经CD29、CD44免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
细胞简介:
小鼠脐带间充质干细胞分离自脐带;脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构。原来是由羊膜包卷着卵黄囊和尿膜的柄状伸长部而形成的。脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉,卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。当卵黄囊及其血管退化,脐动脉和脐静脉就发达起来,在这些间隙中可以看到疏松的胶状的间充质。在子宫中,子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管,与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近,在此处母体和胎儿的血液间进行CO2和O2,代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿来的废物运送至胎盘,脐静脉将O2和营养物质从胎盘运送给胎儿。最后由子宫静脉将来自胎儿的代谢废物运走,某种激素和抗体等也通过脐带从母体移交给胎儿。脐带中含有大量的干细胞,干细胞是生命的种子,它会分化成机体的各种细胞,结出各种不同的果实——血液细胞、神经细胞、骨骼细胞等。干细胞是具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞群体;这些细胞可以通过分裂维持自身细胞的特性和数量,又可进一步分化为各种组织细胞,从而在组织修复等方面发挥积极作用。间充质干细胞(MSC)是一种具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞。在不同的诱导条件下,可分化为多种造血细胞以外的组织细胞,并具有造血支持、免疫调节、组织修复等作用;目前,多用于风湿免疫疾病的治疗。间充质干细胞(MSCs)是一种具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,存在于骨髓、脂肪组织、脐血及多种胎儿组织。它可分泌多种细胞因子及生长因子,促进造血干细胞(HSC)的增殖与分化。MSCs还具有免疫调节、抗炎和组织修复作用,可减轻移植物抗宿主病(GVHD)及其他移植相关并发症。
贴壁细胞传代操作步骤:
用移液管或者巴氏吸管吸取培养液;
使用不含钙镁离子的平衡盐溶液(PBS)冲洗细胞1-2次;
弃PBS,加入胰蛋白酶-EDTA消化液(消化液浓度根据各细胞不同有调整),轻轻摇晃培养瓶,使胰酶与细胞表面充分接触,37 ℃孵育2-3 min,加入含血清完全培养基终止消化。
将细胞悬液移入离心管中,800 rpm-1000rpm离心5min,弃上清,加入预热的完全培养基重悬细胞,轻轻吸打混匀,吹打过程中尽量不要出现气泡。
细胞计数,根据细胞量选择合适的传代比例,最后转移置37 ℃细胞培养箱中进行培养。
悬浮细胞传代操作步骤:
悬浮细胞由于本身在生长培养基中悬浮,无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离,整个过程较为迅速,对细胞损伤较小。悬浮细胞传代,通常有两种方法,直接传代法和离心传代法。
(1)直接传代法
① 悬浮细胞长满至80%-90%左右(细胞悬液变黄,最大细胞密度随细胞系不同而有所差异),即可传代;
② 用吸管吸弃细胞悬液1/2~2/3;
③ 加入适量的新鲜培养基,继续培养。
(2)离心传代法
① 将细胞悬液转移到离心管内;
② 800 rpm-1000rpm离心5min,弃上清;
③ 使用新鲜的培养基重悬细胞;
④ 吸管吸取适量细胞悬液,装入新的培养瓶,再加入适量的新鲜培养基,继续培养。
公司正在出售的产品:
Hoechst 33342 trihydrochloride 875756-97-1 C27H31Cl3N6O
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