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- 货号:PH096995
- 种属:人
- 类别:人Elisa试剂盒
- 英文简称:BRAF
- 用途:仅用于科研研究实验
人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)elisa试剂盒
实验目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)的含量
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定大鼠标本中人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)水平。用纯化的人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)，再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B-raf(BRAF)含量。
英文名称 | Human Serine/threonine-protein kinase B-raf,BRAF elisa kit |
规格 | 48T/96T |
货号 | PH096995 |
产品类别 | Human/人elisa试剂盒 |
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试验所需自备物品:
1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
3. 自动洗板机
4. 高精度移液器， EP管及一次性吸头： 0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
5. 吸水纸
检测程序:
1. 加样：空白孔加入50μl标准品/样品稀释液，其余孔各加入标准品或待测样品50ul，将反应板混匀后置37℃，40分钟。
2. 洗板：用1×洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，每孔加入1×洗液350μl，每次震荡/浸泡1-2分钟，向滤纸上印干。
3. 空白孔加入100ul生物素化抗体稀释液，其余孔各加入1×的生物素化抗体工作液100ul，混匀后置37℃，30分钟。
4. 洗板：同上。
5. 每孔加入SABC复合物工作液100ul，混匀后置37℃，20分钟。
6. 洗板：同上。
7. 每孔加入提前配置好的TMB混合液100ul，混匀后置37 ℃暗处反应10-20分钟（具体显色时间根据显色结果而定）。
8. 每孔加入100ul终止液，混匀，30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。
结果判断与计算：
1. 所有OD值建议减除空白值后再行计算，如空白OD低于0.1，也可以直接计算。
2. 以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线，根据样品OD值计算出相应含量，再乘上稀释倍数即可。
试剂盒性能:
1、 检测范围:0.625-40ng/mL
2、 特异性:同时可检测重组或天然的某种蛋白或抗体，不与其它细胞因子有交叉反应。
3、 重复性:板内，板间变异系数均小于10%。
操作步骤:
1.加样→2.温育→3.配液→4.洗涤→5.加酶→6.温育→7.洗涤→8.显色→9.加终止→10.测定。
1．使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，每个标准品和空白孔建议做复孔，每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体，盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次，如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5． 每孔加入50ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次，如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。
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