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价格: ¥ 2990
品牌:雅吉生物
供货周期: 14天
货号:135080
型号:50次/盒
CAS:Xanthomonas campestris pv. vesicatoria
产品名称:野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致变种PCR试剂盒
本产品就是根据PCR原理专门开发的试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品DNA模板。
2. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
3. 产品精心优化且特异性高,引物是根据高度保守区设计,不会跟除此之外的其它微生物DNA发生交叉反应。
4. PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。
5. 本产品足够50次20μL体系的PCR反应。
6. 本产品只能用于定性实验,不能用于定量。
7. 本产品只能用于科研
野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致变种PCR试剂盒使用方法
一、稀释标准曲线样品(以 10E1-10E6 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能
污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本
产品不提供活体样品做阳性对照,只提供无传染性的 DNA 片段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2,1。
2. 用带芯枪头分别加入 45μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,最好用带芯枪头,
下同。
3. 在 6 号管中加入 5μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(试剂盒提供),充分震
荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 5 号管中加入 5μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所
得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 4 号管中加入 5μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所
得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E4 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 如果有 N 个样品待提取,最好设置 N+2 个提取,多出的是 PC(样品制备阳
性对照)和 NC(样品制备阴性对照)。可以上步所得第 4 号稀释液 10μL
再加上一定量的水,使总体积与核酸纯化试剂盒所要求的待提取样品的起始
体积一致,以此作为 PC。另外用水作为 NC。
8. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数 DNA 提取试剂盒兼
容。也可以选购本公司的相关产品或免提取核酸释放剂。
注:上述样品建议经过增菌后,收集培养物用于检测。
三、DNA提取:
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液,按以下说明进行DNA核酸的粗提。并按照相应试剂盒说明进行操作。
1、液体培养物:取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中,8000rpm离心3min,尽量吸弃上清,加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。
2、固体培养物:挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min,取上清5μL进行PCR反应。
3、粪便样品:挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中,加入0.5mL生理盐水,振荡混匀,13000rpm离心3分钟,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
4、其他液体标本:取标本2-3mL,13000rpm离心3min,弃上清,沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀,100℃恒温10min,13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR:
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 分 |
PCR反应(35个循环) | 95℃ | 10 秒 |
60℃ | 40 秒(采集 SYBR 通道的荧光信号) | |
溶解曲线分析 | 按 qPCR 仪器手册执行 |
注意:循环次数不要超过 35 个循环。
野油菜黄单胞菌辣椒斑点病致变种PCR试剂盒样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、运输及保存:低温运输,-20℃保存,保存期限一年。阳性对照需单独放置,不要污染其他试剂。
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
4、自备试剂:样品DNA。
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